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2,9-二取代嘌呤-6-氨基異羥肟酸類組蛋白去乙?;敢种苿┘爸苽浞椒ê蛻?yīng)用_5

文檔序號:8936601閱讀:來源:國知局
L,此時TSA濃度為 2yM,2x終濃度,表示加到反應(yīng)體系后的終濃度為1yM)。
[0195] 96孔板中,每孔分別加入15yL稀釋后的酶和10yL待測化合物,37°C孵育5min 后加入25yL的底物(空白孔不加酶及化合物,加Buffer代替;對照孔化合物用Buffer 代替)。將96孔板置于37°C搖床中孵育30min。然后每孔加入50yL現(xiàn)配置的Colorde Lys?Developer,繼續(xù)孵育。30min后,酶標(biāo)儀上測定405nm條件下的紫外吸收,通過測定 對照組和目標(biāo)化合物組的405nm吸收度,可計算目標(biāo)化合物的抑制率并求得IC5。值。
[0196] 實驗結(jié)果見表2。
[0197] 表2.目標(biāo)化合物對HDAC體外抑制實驗結(jié)果
[0198]
[0199]a表中數(shù)值為三次試驗結(jié)果的平均值
[0200] 從表中可以看出,當(dāng)鏈長達(dá)到一定長度(n為5-6),對HDAC有顯著抑制作用,部分 與陽性對照藥SAHA相當(dāng)甚至更好;在嘌呤C2位引入氨基或氯取代,則化合物的活性得到明 顯提高,例4Mvs4S,4Lvs8A和4Hvs4J;嘌呤N9位引入取代基的化合物活性優(yōu)于未引 入取代的,例4Gvs4F,4Ivs4H和4Rvs4P。試驗結(jié)果對于進(jìn)一步開發(fā)活性更高的HDACs 抑制劑有很重要的指導(dǎo)意義。
[0201] 實驗例2.目標(biāo)化合物抑制細(xì)胞增殖的活性試驗(Invitro)
[0202] 術(shù)語說明:
[0203]MDA-MB-231:人乳腺癌細(xì)胞株;
[0204]KG1和K562:白血病細(xì)胞株;
[0205] PC-3 :前列腺癌細(xì)胞株。
[0206] IC5Q:半數(shù)抑制濃度。
[0207] 1^:微摩爾/升。
[0208] 選取代表性化合物進(jìn)行體外抑制癌細(xì)胞增殖的活性試驗:
[0209] 1.[材料]MDA-MB-231,KG1,K562和PC-3細(xì)胞株,四甲基偶氮唑藍(lán)MTT,10%胎牛 血清,96孔板。
[0210] 2?[方法]
[0211] 細(xì)胞培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞株采用常規(guī)培養(yǎng)。實驗時均用對數(shù)生長期細(xì)胞。
[0212] 細(xì)胞生長檢測(MTT法)將腫瘤細(xì)胞懸液調(diào)整至3X104/mL(懸浮細(xì)胞調(diào)整至 4X104/mL),分別接種于96孔板(100yL/孔),3000個細(xì)胞/孔(懸浮細(xì)胞4000個細(xì)胞 /孔)。鋪板9h后,每孔中加入100yL含不同濃度化合物的培養(yǎng)基,每個濃度設(shè)三個復(fù) 孔,不加細(xì)胞的孔讀數(shù)時作空白,加細(xì)胞不加化合物的孔作化合物空白孔,SAHA作化合物 陽性對照。于37°C,5%C02中孵育48h,每孔加入10yL0. 5%的MTT染色液,繼續(xù)孵育。 4h后,2500rpm,離心30min,然后拋棄板孔中培養(yǎng)基,每孔加入150yLDMS0,37°C恒溫震搖 5-10min。酶標(biāo)儀上于570nm處測定每孔的吸光度0D值,細(xì)胞生長抑制率按下式計算:
[0213]
[0214] 實驗結(jié)果見表3。
[0215] 表3代表性化合物抗腫瘤細(xì)胞增殖實驗結(jié)果
[0216]
[0217] 3表中數(shù)值為三次試驗的平均值,"土 "后的數(shù)值表示標(biāo)準(zhǔn)偏差。
[0218] 上表測試數(shù)據(jù)表明,測試的三個目標(biāo)化合物對于實驗的腫瘤細(xì)胞均有抑制作 用,在體外抗腫瘤細(xì)胞增殖試驗中均顯示出與陽性對照SAHA相近甚至更好的活性,表明 2, 9-二取代嘌呤-6-氨基異羥肟酸類組蛋白去乙?;敢种苿┚哂辛己玫拈_發(fā)前景,可進(jìn) 行深入的活性研究,開發(fā)出更有活性的化合物用于制備預(yù)防和治療因組蛋白去乙?;副?達(dá)異常導(dǎo)致的相關(guān)哺乳動物疾病的藥物。
【主權(quán)項】
1. 一種2, 9-二取代嘌呤-6-氨基異羥肟酸類組蛋白去乙?;敢种苿?,是具有通式I 所示的結(jié)構(gòu),以及其立體異構(gòu)體、藥學(xué)上可接受的鹽,通式I中,R1是氫、C ^C12烷基、環(huán)烷基,或被以下一個或多個羥基、鹵素、硝基、氰基、 羧基基團(tuán)取代的C1-C12烷基、環(huán)烷基,含有相同或不同的一個或多個如下取代基或沒有取代 的芳基、雜芳基、芳基烷基、雜芳基烷基:羥基,鹵素,硝基,氰基,胍基,羧基,鹵C1-C12烷基, C1-C12烷氧基,C「C12烷基,C 3-C12環(huán)烷基,芳基,雜芳基; R2是氫,鹵素,其中,A代表NH、NHSO2、0、S原子?xùn)X和R4相同或不同,代表氫、C「C12烷基、環(huán)烷基,或 被以下一個或多個羥基、鹵素、硝基、氰基、羧基基團(tuán)取代的C1-C12烷基、環(huán)烷基,含有相同或 不同的一個或多個如下取代基或沒有取代的芳基、雜芳基、芳基烷基、雜芳基烷基:羥基,鹵 素,硝基,氰基,胍基,羧基,齒C1-C12烷基,C「C12烷氧基,C「c 12烷基,C 3-c12環(huán)烷基,芳基,雜 芳基; 其中,私和1?4不同時代表氫或Ar,Ar代表含有相同或不同的一個或多個如下取代基 或沒有取代的芳基、雜芳基、芳基烷基和雜芳基烷基:羥基,鹵素,硝基,氰基,胍基,羧基,鹵 C1-C6烷基,C「(^烷氧基,C「C6烷基,C 3-Cs環(huán)烷基,芳基,雜芳基; RjPR 4-起形成5-或6-元環(huán),選擇的被羥基、鹵素、硝基、氰基取代和/或選擇的 插入0、一 N-R3、S或插入SO或SO2基團(tuán); η 是 1_10〇2. 如權(quán)利要求1所述的2, 9-二取代嘌呤-6-氨基異羥肟酸類組蛋白去乙?;敢种?劑,其特征在于,通式I中,&是C ^C6烷基,C3-C8環(huán)烷基,或被以下一個或多個羥基、鹵素、硝基、氰基、 羧基基團(tuán)取代的C1-C6烷基、C 3-Cs環(huán)烷基,或被一個或兩個如下基團(tuán)取代或沒有取代的優(yōu)選 的芳基、雜芳基、芳基烷基、雜芳基烷基:羥基,鹵素,硝基,氰基,胍基,羧基,鹵C1-C6烷基, C1-Cf^氧基,C「C6烷基,C3-C i^烷基,C ^C1。芳基,含有1-2個雜原子的環(huán)原子數(shù)為5-10 的雜芳基; R2是氫,鹵素, 其中,A為NH和NHS02;R JPR4相同或不同,代表氫、C1-C6烷基,C3-C i^烷基,或被以 下一個或多個羥基、鹵素、硝基、氰基、羧基基團(tuán)取代的C1-C6烷基、C 3-Cs環(huán)烷基,或被一個或 兩個如下基團(tuán)取代或沒有取代的優(yōu)選的芳基、雜芳基、芳基烷基、雜芳基烷基:羥基,鹵素, 硝基,氰基,胍基,羧基,鹵C1-C6烷基,C ^C6烷氧基,C ^C6烷基,C 3-Cs環(huán)烷基,C 6-(;。芳基,含 有1-2個雜原子的環(huán)原子數(shù)為5-10的雜芳基; 所述優(yōu)選的芳基、雜芳基為C5-C15芳基,任選取代的C 5-C15芳基,以及含有5或6個環(huán)原 子的單雜環(huán)芳基,或具有8至15個環(huán)原子的雙雜環(huán)芳基,雜環(huán)芳基含有1-4個雜原子,所述 雜原子獨立地選自〇、S、N或氧化的S或N ;碳原子或氮原子是雜芳環(huán)結(jié)構(gòu)的連接點,由此保 持穩(wěn)定的芳環(huán);所述優(yōu)選的芳基烷基和雜芳基烷基為(;-(:3亞烷基連接的芳基和雜芳基; RjPR 4-起形成5-或6-元環(huán),選擇的被羥基、鹵素、硝基、氰基取代和/或選擇的 插入0、一 N-R3、S或插入SO或SO2基團(tuán); η 是 1_8〇3. 如權(quán)利要求1或2所述的2, 9-二取代嘌呤-6-氨基異羥肟酸類組蛋白去乙?;?抑制劑,其特征在于, 通式I中,R1是氫、甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基,環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán) 己基,含有相同或不同的1-2個如下取代基或沒有取代的苯基、萘基、吡啶基、呋喃基和芐 基:甲基,三氟甲基,甲氧基,鹵素、羥基、硝基、氰基、胍基、羧基,C5-C1。芳基,含有1-2個雜 原子的環(huán)原子數(shù)為5-10的雜芳基; R2是氫、鹵素、氨基,被相同或不同的1-2個羥基、鹵素、硝基、氰基取代基取代或沒有 取代的嗎啉基團(tuán),哌嗪基團(tuán)連接的芳香基團(tuán)Ar1,一 NH-R3,一 NHSO2-Ar25Ar 1是含有相 同或不同的1-2個如下取代基或沒有取代基的苯基、萘基、吡啶基、噠嗪基、吡嗪基、中氮茚 基、喹唑啉基、嘌呤基、吲哚基、喹啉基、嘧啶基、吡咯基、吡唑基、噻唑基、苯并噻唑基、噻吩 基、苯并[b]噻吩基、異惡唑基、惡噻二唑基、異噻唑基、四氮唑基、咪唑基、三嗪基、呋喃基、 苯并呋喃基和吲哚基:羥基、鹵素、硝基、氰基、胍基、羧基,鹵C1-C6烷基、C ^C6烷氧基、C ^C6烷基、C3-C8環(huán)烷基A5-C1。芳基,含有1-2個雜原子的環(huán)原子數(shù)為5-10的雜芳基;R 3是含有 相同或不同的1-2個羥基、鹵素、硝基、氰基取代基取代或沒有取代的C1-C6烷基、C 3-C8環(huán)烷 基、芐基,以及C1-C3亞烷基連接的上述芳香基團(tuán)Ar 1;Ar 2是含有相同或不同的1-2個甲基、 甲氧基、三氟甲基、鹵素、硝基、氰基取代基或沒有取代基的苯基; η 是 1_6〇4. 如權(quán)利要求1-3任一所述的2, 9-二取代嘌呤-6-氨基異羥肟酸類組蛋白去乙?;?酶抑制劑,其特征在于,是下述化合物之一: 2_ [ (2-氨基-9Η-嘌呤-6-基)氨基]-N-羥基乙酰胺(4Α), 3_ [ (2-氨基-9Η-嘌呤-6-基)氨基]-N-羥基丙酰胺(4Β), 4_ [ (2-氨基-9Η-嘌呤-6-基)氨基]-N-羥基丁酰胺(4C), 5_ [ (2-氨基-9Η-嘌呤-6-基)氨基]-N-羥基戊酰胺(4D), 5_ [ (2-氨基-9-芐基-9Η-嘌呤-6-基)氨基]-N-羥基戊酰胺(4Ε), 6_ [ (2-氨基-9Η-嘌呤-6-基)氨基]-N-羥基己酰胺(4F), 6_ [ (2-氨基-9-異丙基-9Η-嘌呤-6-基)氨基]-N-羥基己酰胺(4G), 7_ [ (2-氨基-9Η-嘌呤-6-基)氨基]-N-羥基庚酰胺(4Η), 7_ [ (2-氨基-9-異丙基-9Η-嘌呤-6-基)氨基]-N-羥基庚酰胺(41), 7- [ (9Η-嘌呤-6-基)氨基]-N-羥基庚酰胺(4J), 6-[ (9-芐基-9Η-嘌呤-6-基)氨基]-N-羥基己酰胺(4Κ), 6- [ (9- 丁基-2-氯-9Η-嘌呤-6-基)氨基]-N-羥基己酰胺(4L), 6- [ (9-芐基-2-氯-9H-嘌呤-6-基)氨基]-N-羥基己酰胺(4M), 7_ [ (2-氯-9-異丁基-9H-嘌呤-6-基)氨基]-N-羥基庚酰胺(4N), 6_ [ (2-芐胺-9H-嘌呤-6-基)氨基]-N-羥基己酰胺(40), 7_ [ (2-芐胺-9H-嘌呤-6-基)氨基]-N-羥基庚酰胺(4P), 6-[ (9-芐基-2-芐胺-9H-嘌呤-6-基)氨基]-N-羥基己酰胺(4Q), 7_ [ (2-芐胺-9-異丁基-9H-嘌呤-6-基)氨基]-N-羥基庚酰胺(4R), 6- [ (9-芐基-2- 丁胺-9H-嘌呤-6-基)氨基]-N-羥基己酰胺(4S), 7- [ (9-芐基-2- 丁胺-9H-嘌呤-6-基)氨基]-N-羥基庚酰胺(4T), 5- [ [9-芐基-2- (4-甲氧基苯磺酰胺基)-9H-嘌呤-6-基]氨基]-N-羥基戊酰胺(6A), N-羥基-7-[ [9-異丁基-2-(4-甲氧基苯磺酰胺基)-9H-嘌呤-6-基]氨基]庚酰胺 (6B), 7- [ [9-芐基-2- (4-氟苯磺酰胺基)-9H-嘌呤-6-基]氨基]-N-羥基庚酰胺(6C), 6- [ (9- 丁基-2-嗎啉-9H-嘌呤-6-基)氨基]-N-羥基己酰胺(8A), N-羥基-7-[ (2-嗎啉-9H-嘌呤-6-基)氨基]庚酰胺(8B)。5.如權(quán)利要求1-3任一所述的2, 9-二取代嘌呤-6-氨基異羥肟酸類組蛋白去乙?;?酶抑制劑的制備方法,其特征在于,步驟如下: 不同取代的6-氯嘌呤在回流條件下與各種氨基酸發(fā)生親核取代反應(yīng)得到中間體 2A-2W,該中間體2A-2W甲酯化后在羥胺的甲醇溶液中反應(yīng)得到目標(biāo)化合物4A-4T ;化合物 3E,3U和3V與磺酰氯反應(yīng)得到中間體5A-5C,該中間體5A-5C后在羥胺的甲醇溶液中反應(yīng) 得到目標(biāo)化合物6A-6C ;化合物2L和2W與嗎啉反應(yīng)后甲酯化得到中間體7A和7B,該中間 體7A和7B后在羥胺的甲醇溶液中反應(yīng)得到目標(biāo)化合物8A和8B ; 合成路線如下:其中,1^、R2、R3、η的定義同上通式I所述; 試劑和條件:a)各種氨基酸,碳酸鈉,H20, KKTC或三乙胺,正丁醇,120°C;b)氯化亞砜, 甲醇,80°C;c)羥胺的甲醇溶液,室溫;d)磺酰氯,吡啶,0°C -室溫;e)嗎啉,正丁醇,120°C; 所述的各種氨基酸是指甘氨酸,β-丙氨酸,γ-氨基丁酸,5-氨基戊酸,6-氨基己酸, 7_氨基庚酸;所述的磺酰氯是指4-甲氧基苯磺酰氯和4-氟苯磺酰氯。 6. 2-[ (2-氨基-9Η-嘌呤-6-基)氨基]-N-羥基乙酰胺(4Α)的制備方法,步驟如下: (1) 2-[ (2-氨基-9Η-嘌呤-6-基)氨基]-乙酸(2Α)的合成 將500mg化合物6-氯鳥嘌呤IA溶于IOmL H2O中,分別加入352mg Na2CO3和443mg甘 氨酸,于100°C反應(yīng)8h ;反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫,然后用2M稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至5-7,過濾,濾 餅水洗3次,干燥后得化合物2A不經(jīng)純化直接進(jìn)行下一步; (2) 2-[ (2-氨基-9H-嘌呤-6-基)氨基]-乙酸甲酯(3A)的合成 冰浴條件下,將步驟(1)制得的416mg 2A溶于15mL MeOH中,滴加0. 72mL SOCl2,滴加 結(jié)束后,冰浴條件繼續(xù)反應(yīng)30min,然后80°C反應(yīng)4h ;反應(yīng)結(jié)束后,旋蒸除掉大部分有機(jī)溶 劑,加入少量水,用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5 %的似!10)3溶液調(diào)節(jié)pH至7-8,過濾,濾餅水洗3次,干燥 后得到400mg白色固體化合物3A,產(chǎn)率95% ; (3) 2-[ (2-氨基-9H-嘌呤-6-基)氨基]-N-羥基乙酰胺(4A)的合成 羥胺甲醇溶液的制備: 溶液A :將4. 67g干燥好的鹽酸羥胺溶于24mL甲醇中即得; 溶液B :將5. 61g氫氧化鉀溶于14mL甲醇中即得; (TC時將溶液B滴加到溶液A中,滴加過程中不斷攪拌,滴加結(jié)束后0°C繼續(xù)反應(yīng)30min 后,過濾除掉固體得到無色透明的羥胺甲醇溶液,干燥備用; 向223mg化合物3A中加入6mL羥胺甲醇溶液,室溫下攪拌Ih ;旋蒸除掉大部分有機(jī) 溶劑,加入少量水,用2M稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至5-7,過濾;濾餅用水洗滌,干燥得到目標(biāo)化合物 2_ [ (2-氨基-9H-嘌呤-6-基)氨基]-N-羥基乙酰胺(4A),產(chǎn)率89 %。7. 權(quán)利要求1-4任一所述的化合物在制備預(yù)防或治療因組蛋白去乙?;副磉_(dá)異常 導(dǎo)致的相關(guān)哺乳動物疾病藥物中的應(yīng)用;所述的與組蛋白去乙?;富钚援惓1磉_(dá)相關(guān)的 哺乳動物疾病包括癌癥、神經(jīng)變性疾病、病毒感染、炎癥、白血病、瘧疾和糖尿病。8. -種適于口服給予哺乳動物的藥物組合物,包含權(quán)利要求1-4任一所述的化合物和 一種或多種藥學(xué)上可接受載體或賦形劑。9. 一種適于胃腸外給予哺乳動物的藥物組合物,包含權(quán)利要求1-4任一所述的化合物 和一種或多種藥學(xué)上可接受載體或賦形劑。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種2,9-二取代嘌呤-6-氨基異羥肟酸類組蛋白去乙酰化酶抑制劑及其制備方法和應(yīng)用,化合物具有如通式I所示的結(jié)構(gòu)。本發(fā)明的化合物對于HDAC有較強(qiáng)的抑制活性,可用于制備預(yù)防或治療因組蛋白去乙酰化酶表達(dá)異常導(dǎo)致的相關(guān)哺乳動物疾病的藥物,本發(fā)明還涉及具有通式I結(jié)構(gòu)化合物的組合物的制藥用途。
【IPC分類】A61P35/00, A61P3/10, A61P35/02, A61K31/52, A61P31/12, A61P25/28, C07D473/34, A61K31/5377, A61P29/00, A61P33/06
【公開號】CN105153163
【申請?zhí)枴緾N201510522489
【發(fā)明人】方浩, 劉仁帥, 楊新穎, 徐文方, 易凡
【申請人】山東大學(xué)
【公開日】2015年12月16日
【申請日】2015年8月24日
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