透明質酸及其鹽或衍生物包被的單精子選擇裝置及應用
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及體外精子挑選領域，是一種透明質酸及其鹽或衍生物包被的單精子選擇裝置及應用。
【背景技術】
[0002]現在用于挑選精子的培養(yǎng)皿多為普通細胞培養(yǎng)皿(Petri dish)，將處理后的精液放入普通細胞培養(yǎng)皿中，在顯微鏡下觀察精子的活動性能，操作者需要在眾多的精子中根據個人經驗判斷并挑選出被認為高質量的成熟精子，眾所周知，活動性較強的精子不一定是成熟的精子，此挑選過程受操作者個人經驗與主觀性影響較大，具有明顯的隨機性，不能確保挑選出的活躍精子即為成熟的活力精子。
[0003]透明質酸是卵子和透明帶黏液基質的主要成分，精子頂體和胞質膜中含有透明質酸酶。當精子穿透卵冠丘復合體時，胞質膜中透明質酸酶水解卵冠丘復合體中的黏液透明質酸，從而穿過黏液；在透明帶誘發(fā)頂體反應時精子釋放透明質酸酶水解透明質酸，在整個過程中，精子與透明質酸結合起到了重要作用。有研究表明只有成熟的活動精子可以與透明質酸結合。

【發(fā)明內容】

[0004]本發(fā)明要解決的技術問題是提供一種節(jié)約時間、既能準確選擇出成熟的精子又不破壞精子的形態(tài)、結構與活力的透明質酸及其鹽或衍生物包被的單精子選擇裝置及應用。
[0005]為了解決以上所述的技術問題，本發(fā)明采取以下技術方案:一種透明質酸及其鹽或衍生物包被的單精子選擇裝置，包括皿體和適配的皿蓋，在所述皿體內底部一體制成有小凹槽，小凹槽中包被有可結合成熟精子的透明質酸及其鹽或衍生物，小凹槽的高度高于所述包被的透明質酸及其鹽或衍生物的高度；皿體的外壁分布有若干個方便拿取皿體且能避免接觸皿體皿口的小耳；所述皿體的底部下表面設有避免皿體底部磨損的凸臺階；培養(yǎng)皿體的邊緣最高處與小凹槽的底部形成的夾角為5?23度。
[0006]優(yōu)選地，所述小凹槽由自所述培養(yǎng)皿體底部向上一體形成的一個環(huán)形突起形成。
[0007]優(yōu)選地，所述小凹槽設置在所述培養(yǎng)皿體底部的中心位置。
[0008]進一步地，所述小凹槽的尺寸為:直徑9mm，高度0.6mm。
[0009]更進一步地，所述培養(yǎng)皿體的尺寸為:直徑50mm，高度8mm。
[0010]所述皿蓋和皿體由透明硬質塑料制成。
[0011]—種所述的透明質酸及其鹽或衍生物包被的單精子選擇裝置的使用方法，
[0012]I)將所述單精子選擇裝置從2_8°C環(huán)境中取出，平衡至室溫；
[0013]2)分離并洗滌精子，以含有3?5mg/ml人白蛋白的培養(yǎng)液調節(jié)得到精子數量為0.2?IXO6個/ml的精子懸液，提高精子被透明質酸及其鹽或衍生物特異性結合的識別準確性；
[0014]3)揭下所述培養(yǎng)皿蓋，在所述單精子選擇裝置的皿體內準備若干個培養(yǎng)液液滴用于接收挑選后的成熟精子；
[0015]4)吸取20?30ul經所述2)處理后的精子懸液至該單精子選擇裝置的小凹槽中，使精子懸液布滿小凹槽；
[0016]5)蓋上所述培養(yǎng)皿蓋，22?30°C反應I?1min ；
[0017]6)揭下所述培養(yǎng)皿蓋，在顯微鏡下確定精子頭部被小凹槽內透明質酸及其鹽或衍生物包被的物質結合至固相表面難以運動，但尾部鞭打劇烈的精子；
[0018]7)用精子注射用穿刺針或其他中空細管，緊靠培養(yǎng)皿體的側壁或以與小凹槽底部小于或等于23度的角度將所述步驟6)中確定的精子挑選出并放置于所述培養(yǎng)液滴中。
[0019]—種所述的透明質酸及其鹽或衍生物包被的單精子選擇裝置的使用方法，
[0020]I)將所述單精子選擇裝置從2_8°C環(huán)境中取出，平衡至室溫；
[0021]2)分離并洗滌精子，以含有3?5mg/ml人白蛋白的培養(yǎng)液調節(jié)得到精子數量為0.2?IXO6個/ml的精子懸液，提高精子被透明質酸及其鹽或衍生物特異性結合的識別準確性；
[0022]3)揭下所述培養(yǎng)皿蓋，在所述單精子選擇裝置培養(yǎng)皿體內準備若干個暫存挑選出的精子的培養(yǎng)液液滴以及抑制挑選出的精子運動的PVP液滴；
[0023]4)吸取20?30ul經所述2)處理后的精子懸液至該單精子選擇裝置的小凹槽
(21)中，使精子懸液布滿小凹槽；
[0024]5)蓋上所述培養(yǎng)皿蓋在顯微鏡熱臺加熱至33?37°C反應I?1min ；
[0025]6)揭下所述培養(yǎng)皿蓋，在顯微鏡下確定精子頭部被小凹槽內透明質酸及其鹽或衍生物包被的物質結合至固相表面難以前向運動，但尾部鞭打劇烈的精子；
[0026]7)用精子注射用穿刺針或其他中空細管，緊靠培養(yǎng)皿體2的側壁或以與小凹槽底部小于或等于23度的角度將所述步驟6)中確定的精子挑選出，暫存于培養(yǎng)液液滴或放置于PVP液滴中制動。
[0027]與現有技術相比，能結合成熟精子的透明質酸及其鹽或衍生物直接包被成固相于所述小凹槽中，省略了操作者每次包被透明質酸及其鹽或衍生物的過程，操作簡單快捷，極大節(jié)約操作者時間、提高工作效率；通過對大量被挑選的精子進行檢測發(fā)現，當挑選精子的角度小于23度時，能確保被挑選的精子不受任何損傷且在挑起的過程中不易掉落，本發(fā)明對培養(yǎng)皿體深度與直徑的進行最優(yōu)化試驗，保證操作者緊靠培養(yǎng)皿體2的側壁挑選精子時，挑選工具與小凹槽底部的夾角小于23度；培養(yǎng)皿體的外壁分布有若干個小耳，既方便操作者拿取培養(yǎng)皿體，又能有效杜絕操作者接觸到培養(yǎng)皿體的皿口，防止外來污染物落入培養(yǎng)皿體中，影響精子的挑選；進一步地，培養(yǎng)皿體的外面底部設有凸臺階，有效避免培養(yǎng)皿體的下表面受到磨損、刮花，干擾顯微鏡下精子的挑選工作，本發(fā)明同時還提供了該透明質酸及其鹽或衍生物包被的單精子選擇裝置的使用方法。使用本發(fā)明挑選成熟的單精子，既節(jié)約操作者時間，又能在不破壞精子的形態(tài)、結構與活力的狀態(tài)下準確選擇出成熟的單精子。
【附圖說明】
[0028]圖1是培養(yǎng)皿蓋立體示意圖
[0029]圖2是培養(yǎng)皿體立體示意圖
[0030]圖3是培養(yǎng)皿體底部立體示意圖
【具體實施方式】
[0031]實施例1
[0032]一種透明質酸及其鹽或衍生物包被的單精子選擇裝置，包括皿體2和適配的皿蓋I，優(yōu)選采用透明硬質塑料制成；所述培養(yǎng)皿體2的尺寸為:直徑50_，高度8_，所述皿體2的內底部中心位置一體制成有一個向上的環(huán)形凸起形成所述小凹槽21，小凹槽21的高度高于所述包被的固相透明質酸的高度，小凹槽21中包被有可結合成熟精子的固相透明質酸。也可以將小凹槽21設置于皿體2內部底部的其他合適位置，小凹槽21可采用同樣可以結合成熟精子頭部的固相透明質酸及其鹽或衍生物來包被。
[0033]所述小凹槽21的尺寸優(yōu)選為:直徑9mm，高度0.6mm，根據三角函數，當操作者緊靠培養(yǎng)皿體2的側壁從小凹槽21中挑選精子時的角度約為18度，經過多次試驗驗證，當挑選成熟精子的角度大于23度時，存在以下三方面的缺陷:第一，由于角度較大，精子注射用穿刺針或其他中空細管頂端尖頭的部位容易損傷被挑選的精子；第二，由于角度過大，在重力作用下，被挑選的成熟精子容易從精子注射用穿刺針或其他中空細管中掉落；第三，精子注射用穿刺針或其他中空細管頂端尖頭的位置容易刮花培養(yǎng)皿體2，造成干擾，增加操作者在顯微鏡下確認及挑選成熟精子的難度。培養(yǎng)皿體2和小凹槽21的尺寸也可以根據需要采取其他尺寸，只要保證操作者緊靠培養(yǎng)皿體2的側壁從小凹槽21中挑選精子的角度小于23度，確保被挑選精子可以完整無損傷挑出即可。充分考慮培養(yǎng)皿體2的高度與直徑的關系，優(yōu)選培養(yǎng)皿體2的側壁上沿與小凹槽21底部之間的夾角為5?23度。
[0034]皿體2的外面?zhèn)缺谧詈镁鶆蚍植加?個方便拿取皿體2的小耳22，使用的時候，操作者可以用拇指和食指拿起小耳22，有效避免手指或手套接觸皿口，杜絕外來污染物落入皿體中妨礙精子的挑選；皿體2的底部下表面優(yōu)選設有3個避免皿體2底部磨損的凸臺階23，保證在顯微鏡下精子的挑選工作。所述小耳22和凸臺階23的個數均可根據實際設置若干個。
[0035]通常將該固相透明質酸包被的單精子選擇裝置優(yōu)選在在4°C冰箱環(huán)境下保存，也可以將其保存在可以在2_8°C的環(huán)境下，只要能保證固相透明質酸及其鹽或衍生物保持可