以結(jié)合成熟精子頭部的活性即可。
[0036]當(dāng)操作者進(jìn)行成熟單精子挑選的時(shí)候，按以下步驟進(jìn)行:
[0037]I)將所述單精子選擇裝置從所放置的冰箱中取出，平衡至室溫；
[0038]2)用密度梯度法分離并洗滌精子，也可以根據(jù)需要采取現(xiàn)有技術(shù)其他分離及洗滌精子的方法；以含4mg/ml人白蛋白的培養(yǎng)液調(diào)節(jié)至精子數(shù)量為0.5 X 16個(gè)/ml的精子懸液，以提高精子被透明質(zhì)酸及其鹽或衍生物特異性結(jié)合的識(shí)別準(zhǔn)確性；也可以采用含有3?5mg/ml人白蛋白的培養(yǎng)液調(diào)節(jié)至精子數(shù)量為0.2?I X 16個(gè)/ml的精子懸液，只要能達(dá)到提高精子被透明質(zhì)酸及其鹽或衍生物特異性結(jié)合的識(shí)別準(zhǔn)確性的目的即可；
[0039]3)揭下所述培養(yǎng)皿蓋I，在所述單精子選擇裝置的皿體2內(nèi)準(zhǔn)備2個(gè)或多個(gè)培養(yǎng)液液滴用于接收挑選后的成熟精子；
[0040]4)吸取20?30ul，優(yōu)選的吸取25ul經(jīng)所述2)處理后的精子懸液至該單精子選擇裝置的小凹槽21中，使精子懸液布滿小凹槽21 ;
[0041]5)蓋上所述培養(yǎng)皿蓋1，在25°C左右反應(yīng)5min ;或者在22?30°C反應(yīng)I?1min ；
[0042]6)揭下所述培養(yǎng)皿蓋1，在顯微鏡下確定精子頭部被小凹槽21內(nèi)透明質(zhì)酸結(jié)合至固相表面難以向前運(yùn)動(dòng)，但尾部鞭打劇烈的精子，這類精子即為成熟精子；
[0043]7)采用中空細(xì)管，優(yōu)選用精子注射用穿刺針緊靠培養(yǎng)皿體2或以與皿底不大于23度的角度將所述步驟6)中確定的精子以于挑選出并放置于所述培養(yǎng)液滴中。
[0044]實(shí)施例2
[0045]實(shí)施例2中透明質(zhì)酸及其鹽或衍生物包被的單精子選擇裝置和實(shí)施例1 一樣，區(qū)別僅在于挑選成熟精子時(shí)的使用方法不同，當(dāng)操作者進(jìn)行成熟單精子挑選的時(shí)候，按以下步驟進(jìn)行:
[0046]I)將所述單精子選擇裝置從所放置的冰箱中取出，平衡至室溫；
[0047]2)用密度梯度法分離并洗滌精子，也可以根據(jù)需要采取現(xiàn)有技術(shù)其他分離及洗滌精子的方法；以含4mg/ml人白蛋白的培養(yǎng)液調(diào)節(jié)至精子數(shù)量為0.5 X 16個(gè)/ml的精子懸液，以提高精子被透明質(zhì)酸及其鹽或衍生物特異性結(jié)合的識(shí)別準(zhǔn)確性；也可以采用含有3?5mg/ml人白蛋白的培養(yǎng)液調(diào)節(jié)至精子數(shù)量為0.2?I X 16個(gè)/ml的精子懸液，只要能達(dá)到提高精子被透明質(zhì)酸及其鹽或衍生物特異性結(jié)合的識(shí)別準(zhǔn)確性的目的即可；
[0048]3)揭下所述培養(yǎng)皿蓋1，在所述單精子選擇裝置的皿體2內(nèi)分別準(zhǔn)備2個(gè)或多個(gè)暫存挑選出的精子的培養(yǎng)液液滴以及抑制挑選出的精子運(yùn)動(dòng)的PVP液滴；
[0049]4)吸取20?30ul，優(yōu)選的吸取25ul經(jīng)所述2)處理后的精子懸液至該單精子選擇裝置的小凹槽21中，使精子懸液布滿小凹槽21 ;
[0050]5)蓋上所述培養(yǎng)皿蓋I在顯微鏡熱臺(tái)加熱至35°C反應(yīng)5min，也可以根據(jù)需要在顯微鏡熱臺(tái)加熱至33?37°C反應(yīng)I?1min ；
[0051]6)揭下所述培養(yǎng)皿蓋1，在顯微鏡下確定精子頭部被小凹槽21內(nèi)透明質(zhì)酸結(jié)合至固相表面難以前向運(yùn)動(dòng)，但尾部鞭打劇烈的精子，即為成熟精子；
[0052]7)采用中空細(xì)管，優(yōu)選用精子注射用穿刺針緊靠培養(yǎng)皿體2或以與小凹槽21的底部不大于23度的角度將所述步驟6)中確定的精子挑選出，暫存于培養(yǎng)液液滴或放置于PVP液滴中制動(dòng)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種透明質(zhì)酸及其鹽或衍生物包被的單精子選擇裝置，包括皿體(2)和適配的皿蓋(I)，其特征在于:在所述皿體(2)內(nèi)底部一體制成有小凹槽(21)，小凹槽(21)中包被有可結(jié)合成熟精子的透明質(zhì)酸及其鹽或衍生物，小凹槽(21)的高度高于所述包被的透明質(zhì)酸及其鹽或衍生物的高度；皿體(2)的外壁分布有若干個(gè)方便拿取皿體(2)且能避免接觸皿體(2)皿口的小耳(22);所述皿體(2)的底部下表面設(shè)有避免皿體(2)底部磨損的凸臺(tái)階(23); 培養(yǎng)皿體⑵的邊緣最高處與小凹槽(21)的底部形成的夾角為5?23度。2.如權(quán)利要求1所述的透明質(zhì)酸及其鹽或衍生物包被的單精子選擇裝置，其特征在于:所述小凹槽(21)由自所述培養(yǎng)皿體(2)底部向上一體形成的一個(gè)環(huán)形突起形成。3.如權(quán)利要求1或2所述的透明質(zhì)酸及其鹽或衍生物包被的單精子選擇裝置，其特征在于:所述小凹槽(21)設(shè)置在所述培養(yǎng)皿體(2)底部的中心位置。4.如權(quán)利要求3所述的透明質(zhì)酸及其鹽或衍生物包被的單精子選擇裝置，其特征在于:所述小凹槽(21)的尺寸為:直徑9mm，高度0.6mm。5.如權(quán)利要求4所述的透明質(zhì)酸及其鹽或衍生物包被的單精子選擇裝置，其特征在于:所述培養(yǎng)皿體⑵的尺寸為:直徑50mm，高度8mm。6.如權(quán)利要求1?5任一項(xiàng)所述的透明質(zhì)酸及其鹽或衍生物包被的單精子選擇裝置，其特征在于:所述皿蓋(I)和皿體(2)由透明硬質(zhì)塑料制成。7.一種如權(quán)利要求1?6任一項(xiàng)所述的透明質(zhì)酸及其鹽或衍生物包被的單精子選擇裝置的使用方法，其特征在于: 1)將所述單精子選擇裝置從2-8°C環(huán)境中取出，平衡至室溫； 2)分離并洗滌精子，以含有3?5mg/ml人白蛋白的培養(yǎng)液調(diào)節(jié)得到精子數(shù)量為0.2?IXO6個(gè)/ml的精子懸液，提高精子被透明質(zhì)酸及其鹽或衍生物特異性結(jié)合的識(shí)別準(zhǔn)確性； 3)揭下所述培養(yǎng)皿蓋(I)，在所述單精子選擇裝置的皿體(2)內(nèi)準(zhǔn)備若干個(gè)培養(yǎng)液液滴用于接收挑選后的成熟精子； 4)吸取20?30ul經(jīng)所述2)處理后的精子懸液至該單精子選擇裝置的小凹槽(21)中，使精子懸液布滿小凹槽(21); 5)蓋上所述培養(yǎng)皿蓋(I)，22?30°C反應(yīng)I?1min； 6)揭下所述培養(yǎng)皿蓋(I)，在顯微鏡下確定精子頭部被小凹槽(21)內(nèi)透明質(zhì)酸及其鹽或衍生物包被的物質(zhì)結(jié)合至固相表面難以運(yùn)動(dòng)，但尾部鞭打劇烈的精子；7)用精子注射用穿刺針或其他中空細(xì)管，緊靠培養(yǎng)皿體2的側(cè)壁或以與小凹槽(21)底部小于或等于23度的角度將所述步驟6)中確定的精子挑選出并放置于所述培養(yǎng)液滴中。8.一種如權(quán)利要求1?6任一項(xiàng)所述的透明質(zhì)酸及其鹽或衍生物包被的單精子選擇裝置的使用方法，其特征在于: 1)將所述單精子選擇裝置從2-8°C環(huán)境中取出，平衡至室溫； 2)分離并洗滌精子，以含有3?5mg/ml人白蛋白的培養(yǎng)液調(diào)節(jié)得到精子數(shù)量為0.2?IXO6個(gè)/ml的精子懸液，提高精子被透明質(zhì)酸及其鹽或衍生物特異性結(jié)合的識(shí)別準(zhǔn)確性； 3)揭下所述培養(yǎng)皿蓋(I)，在所述單精子選擇裝置培養(yǎng)皿體(2)內(nèi)準(zhǔn)備若干個(gè)暫存挑選出的精子的培養(yǎng)液液滴以及抑制挑選出的精子運(yùn)動(dòng)的PVP液滴； 4)吸取20?30ul經(jīng)所述2)處理后的精子懸液至該單精子選擇裝置的小凹槽(21)中，使精子懸液布滿小凹槽(21); 5)蓋上所述培養(yǎng)皿蓋(I)在顯微鏡熱臺(tái)加熱至33?37°C反應(yīng)I?1min； 6)揭下所述培養(yǎng)皿蓋(I)，在顯微鏡下確定精子頭部被小凹槽(21)內(nèi)透明質(zhì)酸及其鹽或衍生物包被的物質(zhì)結(jié)合至固相表面難以前向運(yùn)動(dòng)，但尾部鞭打劇烈的精子； 7)用精子注射用穿刺針或其他中空細(xì)管，緊靠培養(yǎng)皿體2的側(cè)壁或以與小凹槽(21)底部小于或等于23度的角度將所述步驟6)中確定的精子挑選出，暫存于培養(yǎng)液液滴或放置于PVP液滴中制動(dòng)。
【專利摘要】本發(fā)明公開透明質(zhì)酸及其鹽或衍生物包被的單精子選擇裝置，包括透在所述皿體(2)內(nèi)部底部一體制成有小凹槽(21)，小凹槽(21)中包被有可結(jié)合成熟精子的透明質(zhì)酸及其鹽或衍生物，小凹槽(21)的高度高于所述包被的透明質(zhì)酸及其鹽或衍生物的高度；皿體(2)的外面分布有若干個(gè)方便拿取皿體(2)且能避免接觸皿體(2)皿口的小耳(22)；所述皿體(2)的外底部設(shè)有避免皿體(2)外底部磨損的凸臺(tái)階(23)；培養(yǎng)皿體(2)的邊緣最高處與小凹槽(21)的底部形成的夾角為5～23度；同時(shí)還公布了本發(fā)明的使用方法。使用簡(jiǎn)單、操作方便，既能方便選擇出成熟的單精子又不破壞精子的形態(tài)、結(jié)構(gòu)與活力。
【IPC分類】C12M1/22
【公開號(hào)】CN105154320
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510657223
【發(fā)明人】胡家純, 陶思恩, 程浩, 鄧少君, 楊紅芳, 何水生
【申請(qǐng)人】深圳市博銳德生物科技有限公司
【公開日】2015年12月16日
【申請(qǐng)日】2015年10月12日