0mL 乙酸乙酯溶解，用 5% 的Na2CO3溶液洗滌三次，無(wú)水Na2SO4干燥30min后，過(guò)濾，乙酸乙酯溶液室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，次日 減壓除去乙酸乙酯溶液，加入IOmL甲醇分散，有大量不溶物，過(guò)濾，沉淀即為無(wú)色固體產(chǎn)物 0. 725g(45 % ) 〇 ESI-MS(m/e) ：449[M+H]+. 1H NMR(300MHz, DMS〇-d6) ： δ /ppm = 10. 846(s, 1H), 8. 017 (d, J=L 5Hz, 1H), 7. 911 (d, J = I. 8Hz, 1H), 7. 574 (d, J = 7. 8Hz, 1H), 7. 341 (m, 6H) ,7. 044(m,3H) ,6. 920 (t, J = 7. 2Hz, 1H) ,5. 000(s,2H) ,4. 108 (s, 1H) ,3. 505 (s, 1H), 3. 249 (dd, J = 4. 2Hz, J = 14. 4Hz, 1H), 3. 011(dd, J = 4. 8Hz, J = 14. 4Hz, 1H), 2. 719 (q, J = 7. 2Hz, 2H)，0· 981 (m, 3H)，0· 513 (m, 3H)。
[0028] 實(shí)施例3制備（3S，6S)-3-(4-丁氨基）-6-(吲哚-3-乙基）-哌嗪-2, 5-二酮（4)
[0029] 將0.448g(1.0mmol)化合物（3S，6S)-3-(4-丁氨基芐基）-6-(吲哚-3-乙基）-哌 嗪-2, 5-二酮（3)置于50mL反應(yīng)瓶中，加入IOmL甲醇溶解，向溶液中加入140mg Pd/C， 通入H2，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)48小時(shí)，濾去Pd/C，減壓濃縮得0. 260g(82,8% )標(biāo)題化合物，為 無(wú)色粉末。ESI-MS(m/e) :315[M+H]+.Mpl87-188°C .IR(KBr) :3190.26, 3053. 32,2920.23， 1668. 43, 1460. 11, 1334. 74, 1099. 43,746. 45,424. 34cm 1 · [α]? = -10.0 (c = 0.31, α^Ο^/ΗΝΜΚ^ΟΟΜΗζ,ΟΙβΟ-?^) :δ/ρρπι = 10.979(s，1H)，8.091(s，1H)，7.933(s，1H)， 7. 590(d, J = 8. OHz, 1Η), 7. 330 (d, J = 8. OHz, 1Η), 7. 030(dd, J = 15. 2Hz, J = 8. 0Ηζ,2Η), 6. 935 (t, J = 7. 2Hz, 1Η), 4. 127 (d, J = 4. 0Hz, 1Η), 3. 528 (d, J = 5. 6Hz, 1Η), 3. 266 (dd, J =4. OHz,J = 14. 8Hz, 1Η), 3. 009 (dd, J = 4. 0Hz, J = 14. 8Hz, 1Η), 2. 369 (m, 2Η), 1. 073 (m, 2Η)，0· 955 (m，1Η)，0· 597 (m，2Η)，0· 573 (m，1Η) · 13C NMR (75ΜΗζ，DMS0-d6) : δ /ppm = 167. 49， 167. 25,136. 35,128. 37,125. 11,121. 11,119. 49,118. 73,111. 63,109. 04,55. 88,54. 19, 33. 24,29. 22,28. 75,20. 86.元素分析 C17H22N4O2 :計(jì)算值 C，64. 95 ;Η，7· 05 ;Ν，17. 82 ;實(shí)測(cè)值 C，64. 80 ;Η，7· 18 ;Ν，17. 63。
[0030] 實(shí)驗(yàn)例1測(cè)定（3S，6S)-3-(4-丁氨基）-6-(吲哚-3-乙基）-哌嗪-2, 5-二酮對(duì) 尿激酶（UK)活性的影響
[0031] 1)主要試劑和儀器
[0032] 試劑：SDS-PAGE凝膠電泳所用試劑及氨基己酸（EACA)均為市售試劑；
[0033] 人纖溶酶原（PLG)和尿激酶（UK)購(gòu)自Sigma公司。
[0034] 儀器：垂直電泳槽 Mini-PROREN Tetra System(BIO-RAD);
[0035] 電泳儀 Power Pac (BIO-RAD);
[0036] 掃描儀 Scanmaker8700 (MICROTEK)。
[0037] 2)溶液的準(zhǔn)備
[0038] PLG溶液的配制：稱(chēng)取PLG 5mg，置于15mL離心管中，加入ImL生理鹽水溶解即得 PLG溶液，濃度為5mg/mL ;分裝，每管0. lmL，-20°C保存待用；
[0039] UK溶液的配制：將整瓶UK (100, 000U)以IOmL生理鹽水溶解，得母液；取0· ImL母 液以生理鹽水稀釋至2. 5mL，得UK溶液，濃度為400U/mL ;分裝，每管0. lmL，-20°C保存待 用；
[0040] EACA溶液的配制：稱(chēng)取50mg化合物，以ImL生理鹽水溶解，即得母液1，濃度為 50mg/mL ;取0. 5mL母液1，以生理鹽水稀釋至lmL，得溶液2,濃度為25mg/mL ;
[0041] (3S，6S)-3-(4- 丁氨基）-6-(吲哚-3-乙基）-哌嗪-2, 5-二酮溶液的配制：稱(chēng)取 5mg (3S，6S) -3- (4- 丁氨基）-6-(吲哚-3-乙基）-哌嗪-2, 5-二酮，以ImL生理鹽水溶解， 濃度為5mg/mL ;-20°C保存待用。
[0042] 3)樣品的準(zhǔn)備
[0043] 取5以1^1((4001]/1^)溶液；分裝，每管0.11^，置于0.51^離心管中，再向其中分別 加入10 μ L生理鹽水或（3S，6S)-3-(4-丁氨基）-6-(吲哚-3-乙基）-哌嗪-2, 5-二酮溶 液，37°C孵育15分鐘；再向各離心管中分別加入5μ L PLG溶液，37°C孵育15分鐘；孵育結(jié) 束后，再向各離心管中分別加入5 μ L5X SDS電泳上樣緩沖液，混勻后將各離心管于KKTC 水浴中變性5分鐘，快速冰浴冷卻后以12%的SDS-PAGE凝膠電泳分離。
[0044] 4) SDS-PAGE 凝膠電泳
[0045] 試劑準(zhǔn)備：
[0046] 30%儲(chǔ)備膠溶液：丙烯酰胺（Acr) 29. 0g，亞甲雙丙烯酰胺（Bis) I. 0g，混勻后加超 純水（Up-H2O)，37°C溶解，定容至IOOmL,棕色瓶存于室溫；
[0047] I. 5M Tris-HCl (ρΗ8· 0) :Trisl8. 17g 加 Up-H2O 溶解，濃鹽酸調(diào) pH 至 8. 0,定容至 IOOmL ；
[0048] IM Tris-HCl(pH6. 8) :Trisl2. Ilg 加 Up-H2O 溶解，濃鹽酸調(diào) pH 至 6· 8,定容至 IOOmL ；
[0049] 12% SDS :電泳級(jí)SDS12. Og加 Up-H2O于68 Γ助溶，濃鹽酸調(diào)至ρΗ7. 2,定容至 IOOmL ；
[0050] 10 %過(guò)硫酸銨（AP) : IOOmg AP 加 Up-H2O ImL ;
[0051] 考馬斯亮蘭染色液：甲醇-水-醋酸=45mL+45mL+10mL，加入IOOmg考馬斯亮藍(lán) 固體，配制成染色液；
[0052] 脫色液：甲醇-水-醋酸=10mL+90mL+10mL，配制成脫色液。
[0053] 操作步驟：
[0054] 采用垂直式電泳槽裝置
[0055] (一）聚丙烯酰胺凝膠的配制
[0056] 1.分離膠（12% )的配制：
[0057] 超純水 4. OmL
[0058] 30 %儲(chǔ)備膠溶液3. 3mL
[0059] I. 5M Tris-HCl 2. 5mL
[0060] 12% SDS 0.1 mL
[0061] 10% AP 0.1 mL
[0062] 取ImL上述混合液，加 TEMED(N，Ν，Ν'，Ν' -四甲基乙二胺）10 μ L封底，余加 TEMED4 μ L，混勻后灌入玻璃板間，以水封頂，注意使液面平，凝膠完全聚合需大約60min。
[0063] 2.濃縮膠（4 % )的配制：
[0064] 超純水 I. 4mL
[0065] 30 %儲(chǔ)備膠溶液0· 33mL
[0066] IM Tris-HCl 0. 25mL
[0067] 12% SDS 0. 02mL
[0068] 10% AP 0. 02mL
[0069] TEMED 2 μ L
[0070] 將分離膠上的水倒去，加入上述混合液，立即將梳子插入玻璃板間，完全聚合需大 約 30min。
[0071] (二）樣品處理：將樣品加入相應(yīng)量的5XSDS上樣緩沖液，KKTC加熱3-5min使 蛋白變性，取出，