）-哌 嗪-2, 5-二酮為0. 05 μ mol/kg ;按照小鼠體重，每IOg給0.1 mL藥液或者生理鹽水；灌胃給 藥。
[0146] 4)動物模型的建立
[0147] ICR雄性小鼠70只，體重18_22g，隨機(jī)分為化合物組、EACA組和空白對照組，每組 10只。各組按劑量灌胃給藥。給藥30分鐘后，將小鼠裝入固定裝置內(nèi)，使其尾巴暴露在外， 以毫米尺準(zhǔn)確測量，在距鼠尾末端3_處做標(biāo)記，用利剪在鼠尾末端標(biāo)記出快速剪斷，待血 液能夠自行溢出時(shí)開始計(jì)時(shí)，每隔30秒，用濾紙輕輕拭去斷口處血滴，直至血液自然停止， 即濾紙吸時(shí)無血為止。
[0148] 5)統(tǒng)計(jì)方法
[0149] 本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)均采用t檢驗(yàn)和方差分析，出血時(shí)間^
表示。
[0150] 6)結(jié)果見表3,在比陽性對照EACA的劑量低3920倍時(shí)（3S，6S) -3- (4- 丁氨 基）-6-(吲哚-3-乙基）-哌嗪-2，5-二酮仍然有效地縮短小鼠出血時(shí)間，說明它可有效地 止血。
[0151] 表 3. (3S，6S) -3- (4- 丁氨基）-6-(吲哚-3-乙基）-哌嗪-2, 5-二酮對 ICR 小鼠 鼠尾出血時(shí)間的影響a
[0153] a)η = 10 ;b)與生理鹽水比P < 0. 05 ;c)與生理鹽水比P < 0. 01 ;d)與生理鹽水 比 P > 0· 05.
[0154] 實(shí)驗(yàn)例5測定（3S，6S)-3-(4-丁氨基）-6-(吲哚-3-乙基）-哌嗪-2, 5-二酮對 大鼠頸動脈血栓生成的影響
[0155] 1)實(shí)驗(yàn)材料
[0156] 受試化合物：（3S，6S)-3-(4-丁氨基）-6-(吲哚-3-乙基）-哌嗪-2, 5-二酮；
[0157] 陽性對照為阿司匹林（Aspirin);陰性對照為生理鹽水（NS);
[0158] 實(shí)驗(yàn)動物：SD雄性大鼠（清潔級），體重180_220g，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù) 有限公司提供；每10只大鼠一組，空白和陽性對照各一組；
[0159] 溶劑：生理鹽水。
[0160] 2)藥物配制
[0161] 按量稱取（3S，6S) -3- (4- 丁氨基）-6-(吲哚-3-乙基）-哌嗪-2，5-二酮，依次加 入生理鹽水至所需濃度即可；阿司匹林為生理鹽水溶液。
[0162] 3)給藥劑量及給藥方式
[0163] 給藥劑量：阿司匹林為50ymol/kg;(3S，6S)-3-(4-丁氨基）-6-(吲哚-3-乙 基）-哌嗪-2, 5-二酮為0. 05 μ mol/kg ;按照大鼠體重，每100g給0. 3mL藥液或者生理鹽 水；灌胃給藥。
[0164] 4)動物模型的建立
[0165] SD雄性大鼠70只，體重180_220g，隨機(jī)分為化合物組、阿司匹林組和空白對照組， 每組10只。各組按劑量灌胃給藥。給藥30分鐘后，各組大鼠以10%水合氯醛麻醉，分離 出頸總動脈和頸總靜脈，以大鼠頸總動脈-靜脈插管旁路循環(huán)絲線法造成大鼠動脈血栓模 型；循環(huán)15分鐘，取出旁路管中的帶栓絲線，拭去表面浮血，稱帶栓絲線濕重，減去絲線重 量后，即得形成血栓的濕重，記錄數(shù)據(jù)。
[0166] 5)統(tǒng)計(jì)方法
[0167] 本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)均采用t檢驗(yàn)和方差分析，血栓濕重以
表示。
[0168] 6)結(jié)果見表4，在0.05以111〇1/1^劑量下（33,63)-3-(4-丁氨基）-6-(吲哚-3-乙 基）-哌嗪-2, 5-二酮沒有促進(jìn)小鼠血栓形成作用，即沒有血栓形成風(fēng)險(xiǎn)。
[0169] 表4. (3S，6S)-3-(4-丁氨基）-6-(吲哚-3-乙基）_哌嗪-2, 5-二酮對SD大鼠頸 動脈血栓生成量的影響a
[0172] a)η = 10 ;b)與生理鹽水比P > 0. 05 ;c)與生理鹽水比P < 0.0 L
[0173] 實(shí)驗(yàn)例6評價(jià)（3S，6S)-3-(4-丁氨基）-6-(吲哚-3-乙基）-哌嗪-2, 5-二酮對 二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳腫脹的影響
[0174] 1)實(shí)驗(yàn)材料
[0175] 受試化合物：（3S，6S)-3-(4-丁氨基）-6-(吲哚-3-乙基）_哌嗪-2, 5-二酮；
[0176] 陽性對照為阿司匹林（Aspirin);陰性對照為生理鹽水（NS);
[0177] 實(shí)驗(yàn)動物：ICR雄性小鼠（清潔級），體重18_22g，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)
[0178] 物技術(shù)有限公司提供。每10只小鼠一組，空白和陽性對照各一組。
[0179] 2)藥物配制
[0180] 按量稱取（3S，6S) -3- (4- 丁氨基）-6-(吲哚-3-乙基）-哌嗪-2, 5-二酮，依次加 入生理鹽水至所需濃度即可；阿司匹林為生理鹽水溶液。
[0181] 3)給藥劑量及給藥方式
[0182] 給藥劑量：阿司匹林為I. llmmol/kg ; (3S，6S)-3-(4- 丁氨基）-6-(吲哚-3-乙 基）-哌嗪-2, 5-二酮為0. 05 μ mol/kg ;按照小鼠體重，每IOg給0.1 mL藥液或者生理鹽水； 灌胃給藥。
[0183] 4)動物模型的建立
[0184] ICR雄性小鼠70只，體重18-22g，隨機(jī)分為（3S，6S) -3- (4- 丁氨基）-6-(吲 哚-3-乙基）-哌嗪-2, 5-二酮組、阿司匹林組和空白對照組，每組10只。各組按劑量灌胃 給藥。給藥30分鐘后，在小鼠左耳朵耳廓內(nèi)側(cè)均勻涂抹30 μ L二甲苯，2小時(shí)后頸椎脫臼處 死小鼠，分別將左、右兩耳外耳廓剪下并重合疊放在一起，用直徑7_的打孔器在同一位置 打取圓形耳片，稱重，記錄并計(jì)算兩耳重量差；鼠耳腫脹度=左耳片重-右耳片重。
[0185] 5)統(tǒng)計(jì)方法
[0186] 本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)均采用t檢驗(yàn)和方差分析，鼠耳腫脹度以
表示。
[0187] 6)結(jié)果見表 5,在 0. 05ymol/kg 劑量下（3S，6S)-3-(4-丁氨基）-6-(吲哚-3-乙 基）-哌嗪-2,5-二酮有效地抑制二甲苯引起的小鼠耳腫脹，即有效地抑制炎癥。
[0188] 表 5. (3S，6S) -3- (4- 丁氨基）-6-(吲哚-3-乙基）-哌嗪-2, 5-二酮對 ICR 小鼠 耳腫脹度的影響a
[0190] a)n = 10 ;b)與生理鹽水比P < 0· 05 ;c)與生理鹽水比P < 0· 01。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 下面結(jié)構(gòu)式所示的u-PA抑制劑，（3S，6S)-3-(4-丁氨基）-6-(吲哚-3-乙基）-哌 嗪-2, 5-二酮。2. 制備權(quán)利要求1的（3S，6S)-3-(4-丁氨基）-6-(吲哚-3-乙基）-哌嗪-2, 5-二酮 的方法，該方法由以下步驟構(gòu)成： (1)在DCC和HOBt存在下L-Trp-OBz1在無水四氫呋喃中與L-Boc-Lys(Z)縮合為 L-Boc-Lys(Z)-L-Trp-OBzl； (2) 在氯化氫-乙酸乙酯溶液中L-Boc-Lys(Z)-L-Trp-OBzl脫去Boc生成 L-Lys(Z)-L-Trp-OBzl； (3) 在乙酸乙酯和5 %NaHCO3存在下L-Lys(Z)-L-Trp-OBzl環(huán)合生成（3S， 6S)-3-(4-丁氨基芐基）-6-(吲哚-3-乙基）-哌嗪-2, 5-二酮； (4) 在？(1/(：和112存在下，在甲醇中（35,65)-3-(4-丁氨基芐基）-6-(吲哚-3-乙 基）-哌嗪-2, 5-二酮脫去芐基生成（3S，6S) -3- (4- 丁氨基）-6-(吲哚-3-乙基）-哌嗪-2， 5-二酮。3. 權(quán)利要求1的（3S，6S)-3-(4-丁氨基）-6-(吲哚-3-乙基）-哌嗪-2, 5-二酮在制 備腫瘤轉(zhuǎn)移和侵潤抑制疾病藥物的應(yīng)用。4. 權(quán)利要求1的（3S，6S)-3-(4-丁氨基）-6-(吲哚-3-乙基）-哌嗪-2, 5-二酮在制 備止血劑中的應(yīng)用。5. 權(quán)利要求1的（3S，6S)-3-(4-丁氨基）-6-(吲哚-3-乙基）-哌嗪-2, 5-二酮在制 備抗炎劑中的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明公開了u-PA抑制劑的(3S，6S)-3-(4-丁氨基)-6-(吲哚-3-乙基)-哌嗪-2，5-二酮，公開了它的制備方法，公開了它抑制腫瘤細(xì)胞侵襲和遷移，進(jìn)一步公開了它的止血和抗炎等作用。本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域。
【IPC分類】A61K31/496, A61P35/00, A61P29/00, C07D403/06, A61P7/04
【公開號】CN105218526
【申請?zhí)枴緾N201410252598
【發(fā)明人】彭師奇, 趙明, 王玉記, 吳建輝, 王楓
【申請人】首都醫(yī)科大學(xué)
【公開日】2016年1月6日
【申請日】2014年6月10日