3,4-二氫異喹啉-2(1h)-基化合物的制作方法
【專利說明】3, 4-二氨異喧嘟-2 (I旬-基化合物
[0001] 本發(fā)明提供某些3, 4-二氨異哇嘟-2(1句-基化合物、其藥物組合物、其使用方法 及其制備方法。
[0002] 帕金森氏病是一種慢性、漸進的神經(jīng)變性病癥，其特征在于腦中的多己胺能神經(jīng) 元的損失。帕金森氏病顯現(xiàn)為靜止性震顫連同其它運動癥狀（例如，運動不能和運動遲緩） 和非運動癥狀（例如，認知損害、睡眠障礙和抑郁癥）。當前用于治療帕金森氏病的療法包 括多己胺前體諸如左旋多己（Ievodopa)，和多己胺激動劑諸如普拉克索（pramipexole)。 此直接作用多己胺療法部分由于與認知損害、驚厥風險（如曬齒類動物中對于某些Dl激動 劑所示）和耐受性發(fā)展相關的高劑量而有效性受限。仍然存在對于帕金森氏病的安全且有 效的治療的顯著未滿足的需求。
[0003] 變構調(diào)節(jié)劑是通過修飾配體-結合環(huán)境而遠程改變配體與其受體的相互作用的 藥劑。運種類型的調(diào)節(jié)的實例是當調(diào)節(jié)劑與變構（次級）位點的結合產(chǎn)生受體蛋白的構象 改變時，所述構象改變被傳遞至配體的正構（一級）結合位點。如果調(diào)節(jié)劑促進或加強相 互作用，則變構效應的性質(zhì)被稱為正的，或者如果其抑制配體與正構結合位點的相互作用， 則變構效應的性質(zhì)被稱為負的。
[0004] 本發(fā)明的化合物是多己胺1受體值1)的正變構調(diào)節(jié)劑（PAM)。因此，本發(fā)明的化 合物可用于治療其中Dl發(fā)揮作用的病況，諸如帕金森氏癥和精神分裂癥，包括緩解相關的 癥狀，諸如帕金森氏病中的輕度認知損害W及精神分裂癥中的認知損害和陰性癥狀。本發(fā) 明的化合物也據(jù)信可用于治療阿爾茨海默氏病的癥狀，諸如認知損害。本發(fā)明的化合物還 可作為單一治療用于改善帕金森氏病中的運動癥狀。同樣，本發(fā)明的化合物據(jù)信可用于治 療抑郁癥和注意力缺陷多動癥（AD皿）。
[0005] 本發(fā)明提供某些新的化合物，其為Dl受體的PAM，且因此，可用于治療上文討論的 病癥。本發(fā)明的新的化合物可W提供此病癥的替代治療。本發(fā)明進一步提供某些新的化合 物的共晶體形式。
[0006] 歐洲專利申請公開號EP330360公開了作為阿片樣物質(zhì)K-受體的激動劑且可用 作鎮(zhèn)痛藥的某些異哇嘟化合物。
[0007] 美國專利號5236934公開了作為血管緊張素II受體的抑制劑且可用于治療CNS 病癥（包括認知功能障礙）的某些1，2, 3, 4-四氨異哇嘟化合物。
[0008] 美國專利申請公開號US2006/0287359公開了作為雌激素受體括抗劑且可用于 治療雌激素相關疾?。òㄈ橄侔┑哪承┧陌碑愅坂交衔?。
[0009] 本發(fā)明提供式I的化合物 其中
n是0、1或2 ; Ri是面素； R2是面素、H、CN、C1 -C3烷氧基或Cl-C3烷基；且R3是H、面素、Cl-C3烷氧基或Cl-C3烷基。
[0010] 本發(fā)明進一步提供式Ia的化合物 其中
n是0、1或2 ; Ri是面素； R2是面素、H、CN、C1 -C3烷氧基或Cl-C3烷基；且R3是H、面素、Cl-C3烷氧基或Cl-C3烷基。
[0011] 本發(fā)明進一步提供式I或Ia的化合物 其中 n是0、1或2 ; Ri是面素； R2是面素；且 R3是H或Cl-C3烷氧基。
[0012] 本發(fā)明進一步提供式I或Ia的化合物 其中 n是0、1或2 ; Ri是C1、F或化； R2是C1、OCH3、H、F、CN或邸3;且 r3是OCH3、H、邸2邸3、Cl、OCH(邸3) 2、〇邸2邸3、F、CH(邸3) 2或CH3。
[0013] 本發(fā)明進一步提供式I或Ia的化合物 n是0或2 ; Ri是Cl; R2是Cl或F;且R3是H或OCH3。
[0014] 本發(fā)明進一步提供式扣的化合物
[0015] 式I的一種具體化合物是式Ic的化合物。
[001引式I的一種具體化合物是2-化6-二氯苯基）-l-[(lS，3時-3-(徑基甲 基）-5- (3-徑基-3-甲基下基）-1-甲基-3, 4-二氨異哇嘟-2 (1句-基]乙酬。
[0017] 本發(fā)明進一步提供包含2-化6-二氯苯基）-1-[(15,3時-3-(徑基甲 基）-5- (3-徑基-3-甲基下基）-1-甲基-3, 4-二氨異哇嘟-2 (1句-基]乙酬和4-徑基苯 甲酸的組合物。
[0018] 本發(fā)明進一步提供包含約一比一比率的2-化6-二氯苯基）-1-[(1S，3R)-3-(徑 基甲基）-5- (3-徑基-3-甲基下基）-1-甲基-3, 4-二氨異哇嘟-2 (1句-基]乙酬和4-徑 基苯甲酸的組合物。
[001引本發(fā)明進一步提供包含2-化6-二氯苯基）-1-[(15,3時-3-(徑基甲 基）-5- (3-徑基-3-甲基下基）-1-甲基-3, 4-二氨異哇嘟-2 (1句-基]乙酬和4-徑基苯 甲酸的組合物的共晶體形式。
[0020] 本發(fā)明進一步提供包含2-化6-二氯苯基）-l-[(lS，3R)-3-(徑基甲 基）-5- (3-徑基-3-甲基下基）-I-甲基-3, 4-二氨異哇嘟-2 (I句-基]乙酬和4-徑基苯 甲酸的組合物的穩(wěn)定共晶體形式。
[0021] 本發(fā)明進一步提供包含2-化6-二氯苯基）-1-[(15,3時-3-(徑基甲 基）-5- (3-徑基-3-甲基下基）-1-甲基-3, 4-二氨異哇嘟-2 (1句-基]乙酬和4-徑基苯 甲酸的組合物的共晶體形式，其特征在于W下使用化Ka照射的X-射線粉末衍射圖案，其 具有衍射角（2-0)為18. 2°的衍射峰W及一個或多個選自16.0°、25.4°和7.0°的峰； 具有0.2度的衍射角容差。
[002引式I的一種具體化合物是2-化6-二氯苯基）-l-((lS，3時-3-(徑基甲 基）-5- (2-徑基丙-2-基）-1-甲基-3, 4-二氨異哇嘟-2 (IH)-基）乙-1-酬。
[0023] 本發(fā)明進一步提供2-化6-二氯苯基）-1- ((1S，3R) -3-(徑基甲基）-5- (2-徑基 丙-2-基）-1-甲基-3, 4-二氨異哇嘟-2 (IH)-基）乙-1-酬的晶體形式，其特征在于W下 使用化Ka照射的X-射線粉末衍射圖案，其具有衍射角（2- 0 )為14. 27°的衍射峰W及一 個或多個選自15. 71°、18.or、18. 68°、22. 43。和25. 08°的峰；具有0.2度的衍射角容 差。
[0024] 進一步，本發(fā)明提供藥物組合物，其包含式I的化合物和藥學上可接受的載體、稀 釋劑或賦形劑。
[00巧]進一步，本發(fā)明提供治療帕金森氏病的方法，其包括向有需要的患者施用有效量 的式I的化合物。
[0026] 進一步，本發(fā)明提供治療與帕金森氏病相關的神經(jīng)認知病癥的方法，其包括向有 需要的患者施用有效量的式I的化合物。
[0027] 進一步，本發(fā)明提供治療精神分裂癥的方法，其包括向有需要的患者施用有效量 的式I的化合物。
[0028] 進一步，本發(fā)明提供治療阿爾茨海默氏病的方法，其包括向有需要的患者施用有 效量的式I的化合物。
[0029] 進一步，本發(fā)明提供用于治療的式I的化合物。
[0030] 進一步，本發(fā)明提供用作藥物的式I的化合物。
[0031] 進一步，本發(fā)明提供用于治療帕金森氏病的式I的化合物。
[0032] 進一步，本發(fā)明提供用于治療精神分裂癥的式I的化合物。
[0033] 進一步，本發(fā)明提供用于治療阿爾茨海默氏病的式I的化合物。
[0034] 進一步，本發(fā)明提供式I的化合物用于制備用于治療帕金森氏病的藥物的用途。 [003引進一步，本發(fā)明提供包含2-化6-二氯苯基）-l-[(lS，3R)-3-(H基甲 基）-5- (3-徑基-3-甲基下基）-1-甲基-3, 4-二氨異哇嘟-2 (1句-基]乙酬和4-徑基苯 甲酸和藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑的藥物組合物。
[0036] 式I的化合物可W與其它藥物組合使用，所述其它藥物用于治療/預防/抑制或 改善式I的化合物可用的疾病或病況，包括帕金森氏病和精神分裂癥。此其它藥物因此可 W通過通常使用的途徑和量與式I的化合物同時或相繼施用。當式I的化合物與一種或多 種其它藥物同時使用時，優(yōu)選除了式I的化合物W外含有此其它藥物的藥物單位劑型。因 此，本發(fā)明的藥物組合物包括除了式I的化合物W外還含有一種或多種其它活性成分的藥 物組合物?？蒞分開施用或在相同藥物組合物中與式I的化合物組合的有效治療帕金森氏 病的其它活性成分的實例包括但不限于： (a)多己胺前體，諸如左旋多己；melevodopa和etilevodopa ;和 化）多己胺激動劑，包括普拉克索、羅匹尼羅、阿樸嗎啡、羅替戈汀、漠隱亭、卡麥角林 和培高利特。
[0037] 應當理解的是，本發(fā)明的化合物可W作為立體異構體存在。本發(fā)明的實施方案包 括所有對映異構體、非對映異構體及其混合物。優(yōu)選的實施方案主要是一種非對映異構體。 更優(yōu)選的實施方案主要是一種對映異構體。
[0038] 由式Ia的化合物代表的式I的化合物的一種特定非對映異構體是優(yōu)選的
其中虛線鍵-和模形鍵，代表反式構型的非對映異構體。
[0039] 實施例代表的式I或Ia的化合物（包括實施例1的化合物：2-(2,6-二氯苯 基）-1-[ (1S, 3R) -3-(徑基甲基）-5-(3-徑基-3-甲基下基）-1-甲基-3, 4-二氨異哇 嘟-2(1句-基]乙酬）的一種特定對映異構體是更優(yōu)選的。
[0040] 如本文所使用，術語"共晶體"是指包含兩種化合物的多組分結晶固體形式，其 中化合物的締合主要通過非共價和非離子的化學相互作用，諸如氨鍵鍵合。在藥物領域 中，共晶體通常包含作為活性藥物成分的第一化合物和被稱為客體化合物或共形成劑 (CO化rmer)的第二化合物。共晶體可W與結晶鹽形式的區(qū)別在于所述第一化合物基本上保 持不帶電或中性。共晶體可W與結晶水合物或溶劑化物形式的區(qū)別在于所述客體化合物不 僅僅是水或溶劑。優(yōu)選的共晶體是具有合適烙點的穩(wěn)定形式之一。
[0041] 如本文所使用，基團"面素"是指氯、氣、漠或艦。面素的特定值是氯和氣。
[0042] 如本文所使用，基團"Cl-C3烷氧基"是指甲氧基、乙氧基、正丙氧基和異丙氧 基。Cl-C3烷氧基的特定值是甲氧基。
[0043] 如本文所使用，基團"Cl-C3烷基"是指甲基、乙基、正丙基和異丙基。Cl-C3 烷基的特定值是甲基。
[0044] 如本文所使用，術語"患者"是指動物諸如哺乳動物，且包括人。人是優(yōu)選的患者。
[0045] 還應當認識到，本領域技術人員可W通過向目前表現(xiàn)出癥狀的患者施用有效量的 式I的化合物而治療帕金森氏病。因此，術語"治療（treatment)"和"治療（treating)"意 指所有過程，其中可存在現(xiàn)有病癥和/或其癥狀的減緩、中斷、停滯、控制或進展的停止，但 不一定表明所有癥狀的總體消除。
[0046] 還應當認識到，本領域技術人員可W通過向處于未來癥狀的風險的患者施用有效 量的式I的化合物而治療帕金森氏病，且意欲包括此病的預防性治療。
[0047] 如本文所使用，式I的化合物的術語"有效量"是指作為有效治療病癥諸如本文所 述的帕金森氏病的劑量的量。診斷醫(yī)師，如本領域技術人員，可W容易地通過使用常規(guī)技術 和通過觀察類似情況下獲得的結果確定有效量。在確定式I的化合物的有效量或劑量中， 考慮許多因素，包括但不限于待施用的式I的化合物；如果使用的話，共同施用其它藥劑； 哺乳動物的物種；其大小、年齡和總體健康；病癥諸如帕金森氏病的參與程度或嚴重度；個 體患者的反應；施用模式；施用的制劑的生物利用度特征；選擇的劑量方案；使用其它伴隨 藥物；和其它相關情況。
[0048] 式I的化合物可W單獨或W與藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑的藥物組合 物的形式施用。此藥物組合物及其制備方法是本領域已知的（參見，例如，Remington:The ScienceandPracticeofPharmacy,D.B.Troy，編車茸，第 21 片反，Lippincott,Williams &Wi化ins, 2006)。
[0049] 人Dl管體巿巧構調(diào)節(jié)測定 經(jīng)由逆轉(zhuǎn)錄病毒基因轉(zhuǎn)導使用pBABE-bleo載體和化oenix逆轉(zhuǎn)錄病毒系統(tǒng)生成穩(wěn)定 表達人Dl受體的肥K293細胞。使細胞在37°C于5% %中生長于補充10%小牛血清、20mM 肥陽S、2mM谷氨酸鹽和150嗦/ml博來霉素的DMEM/F12 (Gibco)中。在約80%匯合度，細胞 使用0. 25%膜蛋白酶/邸TA收獲，懸浮于FBS加8%DMS0,且儲存于液氮中。在測定當天， 將細胞解凍，且再懸浮于STIM緩沖液（補充0.1%BSAJOmM肥陽S、200剛IBMX和100剛 抗壞血酸的Hanks平衡鹽溶液）。將測試化合物連續(xù)稀釋（1:3)于DMSO中，且然后進一步 1:40稀釋于含有2XECw濃度的多己胺的STIM緩沖液中。多己胺的ECw濃度被定義為使環(huán) 狀AMP增加直至多己胺可W誘導的最大量的20 %的濃度；在該測定中，ECmgx為5yM，且EC2。 通常為12皿。將二十五y1該溶液與25W細胞懸浮液（1，250個細胞）混合，且分配于96 孔、半?yún)^(qū)域板的各孔中；最終DMSO濃度為1. 25%。將板在25°C下解育60分鐘。使用HTRF 檢測（Cisbio? )根據(jù)供應商的說明定量cAMP產(chǎn)生：將含有抗-cAMP穴狀化合物和D2-綴 合物（各25yL)的裂解緩沖液添加至各孔中，將板再解育60-90分鐘，且使用化Vision讀 板器（Perki址Imer?)檢測巧光。將數(shù)據(jù)使用CAMP標準曲線轉(zhuǎn)化為CAMP濃度，且使用4參 數(shù)非線性邏輯方程（Abase?v5. 3. 1.22)分析為絕對ECw?；诜秶鷱亩x最小反應的多 己胺ECw至通過添加5yM多己胺定義的ECm。,反應的窗口，將正變構調(diào)節(jié)劑的絕對EC5。計 算為生成半最大量的CAMP的濃度。
[0050] 在上述測定中，本文例舉的化合物表明針對人Dl受體的小于300nM的絕對ECg。。 實施例1的化合物針對人Dl受體表現(xiàn)出3. 66 + 0. 67nM(SEM;n=9)的絕對ECs。，具有83. 8 ± 4. 4 %的最大反應。實施例2的共晶體針對人Dl受體表現(xiàn)出1. 11 + 0. 11nM(SEM;n=2) 的絕對ECs。。實施例3的化合物針對人Dl受體表現(xiàn)出11.75 ± 1.27nM(SEM;n=16)的絕 對ECs。，具有91.3 ± 2.4 %的最大反應。運些數(shù)據(jù)表明，式I的例舉化合物是人Dl受體的 正變構調(diào)節(jié)劑。
[0051] 可W使用本領域眾所周知的程序諸如自發(fā)活動（locomotoractivity)的動物模 型測定本發(fā)明的化合物的抗帕金森作用，包括在人源化的多己胺1受體值1)敲入小鼠中的 對基礎（馴化）自發(fā)活動和對利血平誘導的運動不能的作用。
[oow]人D1管體敲入小鼠的牛成 可W通過標準技術生成其中鼠多己胺1值1)受體替換為其人對應物的轉(zhuǎn)基因小鼠。例 如，從RP23細菌人工染色體文庫亞克隆小鼠基因組片段且再克隆至PGK-neo祀向載體中。 小鼠開放閱讀框被替換為外顯子2中的人Dl受體開放閱讀框。外顯子2上游的neo選擇 標記側(cè)接用于隨后去除的化t位點。IoxP選擇位點側(cè)接外顯子2允許通過與表達ere核酸 酶基因的小鼠雜交而生成Dl敲除小鼠的選項。
[0053] 使巧7BL/6N胚胎干細胞系B6-3在具有20%胎牛血清和2xl06單位パ白血病 抑制因子的高葡萄糖DMEM中的小鼠胚胎成纖維細胞的有絲分裂失活飼養(yǎng)層上生長。將 一千萬個胚胎干細胞加上30微克線性化載體DNA電穿孔且進行G418選擇（200微克/ml)。 分離克隆且通過Southern印跡分析。
[0054] 將含有預期大小插入物的克隆插入囊胚，且將所得小鼠通過PCR基因分型。將雄 性嵌合體與含有Flp核酸酶基因的雌性雜交，W消除選擇標記。通過PCR鑒定含有人Dl受 體且無選擇標記的子代。將雄性雜合子與雌性巧7BL/6小鼠交配。將含有人Dl受體的雄 性和雌性子代交配且通過PCR鑒定純合子。純合子的行為和繁殖是正常的，且對于隨后世 代，將集落維持在純合子狀態(tài)。
[00巧]基礎（馴化）自發(fā)活動 使用追蹤小鼠運動的自動化系統(tǒng)來測量自發(fā)活動。將人Dl受體敲入小鼠置于腔室中 且允許其習慣腔室60分鐘。在該時間期間，它們顯示隨著時間的運動減少。施用本發(fā)明的 化合物之后，動物運動W劑量依賴的方式增加。
[0056] 更具體地，自發(fā)活動盒位于矩形構架中，所述矩形構架具有用于測量被稱為移動 (ambulations)的運動活動（水平和垂直活動）的紅外光束。在7:30和15:00小時的時間 之間記錄自發(fā)活動。
[0057] 將小鼠隨機分配至處理組，如表1中所示。將各小鼠單獨地置于自發(fā)活動盒之一， 用于馴化60分鐘。然后口服給予小鼠，且對于各小鼠經(jīng)60分鐘期間，每10分鐘記錄移動 (ambulations)的總數(shù)。在用利血平預處理的小鼠中，沒有包括先前的馴化期間。因此，在 給予后立即，持續(xù)60分鐘測量移動（ambulations)的總數(shù)。將數(shù)據(jù)從軟件/計算機傳送至 電子表格用于進一步分析。使用單向AN0VA、隨后使用Fishers氏