紅豆杉中10-dab iii和/或紫杉醇的提取方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種紅豆杉中10-DABIII和/或紫杉醇的提取方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 10-DABIII(全稱是10-去己醜基己卡了Η)是半合成紫杉醇（Paclitaxel)、多 西他賽值ocetaxel)和卡己他賽（C油azitaxel)的前體原料。國內(nèi)外有很多專利公開了 從各種紅豆杉中提取10-DABIII和紫杉醇的方法，例如CN200710178672. 1，CN1903849， EP629701,EP1053345,US4876399,US5019504,US5628906,US5850032,US5969165, US2002155177,W00078741，W00512507,W001051476 等。即用 5 ~10 倍的甲醇或己醇水溶 液提取紅豆杉，然后萃取，減壓濃縮制備成浸膏，然后再經(jīng)正相或反相層析分離，結(jié)晶和重 結(jié)晶等得到高含量的10-DABIII和紫杉醇精品，各專利保護(hù)的紅豆杉品種主要為歐洲漿果 紅豆杉、蔓地亞紅豆杉、加拿大紅豆杉、東北紅豆杉、中國紅豆杉、喜馬拉雅紅豆杉、云南紅 豆杉和中國南方紅豆杉。特別指出，CN200710178672. 1專利中公開的方法，即用0. 1%~ 0.5%巧樣酸水溶液超聲逆流提取歐洲漿果紅豆杉，用大孔樹脂富集后再洗脫，然后減壓濃 縮，結(jié)晶和重結(jié)晶獲得高含量10-DABIII。US5736366介紹用軟化水提取紅豆杉枝葉，用聚 苯己帰樹脂吸附，再用甲醇洗脫，并進(jìn)一步處理，收率得到75. 4%。CN1660827報(bào)道用70~ 80%己醇提取紅豆杉枝葉，得到水溶性濃縮液，靜置后，不溶于水的紫杉醇及低極性雜質(zhì)沉 淀析出，溶液再上S8、AB6等大孔樹脂進(jìn)行富集提取10-DABIII的方法。
[0003] 上述專利中涉及到的紅豆杉品種中的10-DABIII含量都屬于常規(guī)范疇，其中 10-DABIII含量最高的紅豆杉品種為歐洲漿果紅豆杉，新鮮的紅豆杉枝葉中10-DABIII含 量大約在500~80化pm,干燥的紅豆杉枝葉的含量大約在1200~2000ppm之間。而根據(jù)專 利CN201110190376.X公開的種植方法生產(chǎn)的紅豆杉新品種，其10-DABIII的含量特別高， 具體地，紅豆杉枝葉中10-DABIII含量> 1500ppm，干燥的紅豆杉枝葉中10-DABIII含量 > 5000ppm。針對(duì)各紅豆杉品種中的10-DABIII含量，作如下比較，具體如表1所示：
[0004] 表1各紅豆杉品種中10-DABIII的含量比較
[0005]
[0006] 但是，上述各專利公開的提取方法僅適用于提取10-DAB III含量不高的紅豆杉原 料；如果說，紅豆杉原料中10-DAB III的含量被大大提升，例如專利CN201110190376. X公 開的種植方法生產(chǎn)的紅豆杉，若仍然采用上述各專利公開的提取方法提取10-DAB III，由 于10-DAB III的含量太高，反而會(huì)發(fā)生嚴(yán)重降解的現(xiàn)象，如此一來，提取過程得到的10-DAB III的收率就會(huì)大大降低。郝么，針對(duì)10-DAB III含量高的紅豆杉，亟待提出一種10-DAB III的收率高、產(chǎn)品穩(wěn)定的提取方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于現(xiàn)有技術(shù)提供的10-DAB III提取方法應(yīng)用于提 取10-DAB III含量高的紅豆杉品種時(shí)，得到的10-DAB III不穩(wěn)定而且收率低的缺陷，而提 供了一種紅豆杉中10-DAB III和/或紫杉醇的提取方法。所提供的提取方法特別適用于 10-DAB III和紫杉醇含量高的紅豆杉的提取，該提取方法不僅提高了產(chǎn)品得率、減少了產(chǎn) 品內(nèi)的降解雜質(zhì)、還大大節(jié)省了有機(jī)溶劑用量和水電汽費(fèi)用，對(duì)環(huán)境影響?。辉撎崛》椒?W連續(xù)大規(guī)模地進(jìn)行10-DAB III和/或紫杉醇的提取、純化等操作。
[000引本發(fā)明提供了一種紅豆杉中10-DAB III和/或紫杉醇的提取方法；所述的提取方 法包括如下步驟：
[0009] (1)用水溶液提取新鮮的或干燥的紅豆杉枝葉原料，得提取液；所述水溶液中 包括濃度為10~5(K)ppm的5-ALA(全稱是5-氨基麗戊酸）；新鮮的紅豆杉枝葉原料中10-DAB III含量>1500ppm，紫杉醇含量>2(Κ)卵m ;干燥的紅豆杉枝葉中10-DAB III含量 > 5000ppm，紫杉醇含量 >SOOppm;
[0010] (2)采用陶瓷膜過濾所述提取液，W濾除分子量大于50萬道爾頓的雜質(zhì)，再用納 濾膜過濾，W濾除分子量小于200道爾頓的小分子；
[0011] (3)采用反相大孔吸附樹脂吸附，并梯度洗脫，得到10-DABIII層析液段和/或紫 杉醇層析液段，再經(jīng)后處理，得到10-DABIII粗品和/或紫杉醇粗品。
[0012] 步驟（1)中，所述的水溶液中較佳地包括濃度為50~50化pm的5-ALA，更佳地包 括濃度為100~200ppm的5-ALA。
[001引步驟（1)中，所述的水溶液中較佳地還含有甲醇和/或己醇，更佳地，進(jìn)一步還含 有巧樣酸和/或冰醋酸。其中，所述的甲醇和/或己醇的含量較佳地為占所述水溶液的 0. 1%~95%，更佳地為占所述水溶液的20%~70%，所述百分比為質(zhì)量百分比。所述的 巧樣酸和/或冰醋酸的含量較佳地為占所述水溶液的0. 1 %~2 %，所述百分比為質(zhì)量百分 比。
[0014] 步驟（1)中，所述的提取為本領(lǐng)域常規(guī)操作，較佳地為超聲逆流提取或抽提。所述 的超聲逆流提取較佳地在超聲提取機(jī)中進(jìn)行。所述的提取時(shí)，所述的新鮮的或干燥的紅豆 杉枝葉原料與所述水溶液的質(zhì)量比較佳地為（1 :5)~（1 ;10)。所述的提取的次數(shù)較佳地一 般為2次，每次提取的時(shí)間較佳地為2~3小時(shí)。一般來說，經(jīng)過一次提取后，10-DABIII 的得率較佳地為85%~90% ;經(jīng)過兩次提取后，10-DABIII的總得率較佳地為98%W上； 所述的百分比為質(zhì)量百分比。
[0015] 步驟（1)中，所述的新鮮的或干燥的紅豆杉枝葉原料較佳地由新鮮的或干燥的紅 豆杉枝葉經(jīng)過預(yù)處理得到。其中，所述的預(yù)處理較佳地為：將新鮮的或干燥的紅豆杉枝葉粉 碎為長度《1cm的小段，更佳地為粉碎為長度《0. 1cm的粉末。所述的粉碎的設(shè)備較佳地 為豆?jié){機(jī)或粉碎機(jī)。
[0016] 步驟（1)中，10-DABIII含量和紫杉醇含量滿足步驟（1)的要求的紅豆杉品種較 佳地由下述種植方法獲得；將紅豆杉按本領(lǐng)域常規(guī)人工種植方法種植和施肥，其中，所述的 施肥的肥料中含有0. 1~10%的5-ALA，所述百分比為5-ALA占肥料總量的質(zhì)量百分比。
[0017] 其中，所述的紅豆杉的本領(lǐng)域常規(guī)人工種植方法包括如下步驟；先將農(nóng)田整理，然 后將紅豆杉種植，進(jìn)行施肥即可。
[0018] 其中，農(nóng)田整理；將農(nóng)田在秋季深翻20~40cm，翌春淺翻細(xì)祀，在整理同時(shí)施入腐 熟的基肥30t/hm2~45t/hm2,同時(shí)將防治病蟲害藥劑均勻翻耕入± ;農(nóng)田平整后作苗床， 床面寬1. 0~1. 2m，高20~25畑1，要求中溝深度10~20畑1，邊溝深度20~40cm;
[001引種植；取紅豆杉的化在1~4月份期間，按照每畝800~1000株的密度種植，在 栽植當(dāng)年的4~9月，每月働草撫育1~2次，1年撫育5~7次；其中，當(dāng)紅豆杉種植> 2 年，第2年撫育4~5次，第3年撫育3~4次；働草中不働傷幼樹的樹根，働草時(shí)結(jié)合清溝 和培±，雨季田間排水，使雨水通暢排出；
[0020] 施肥管理；當(dāng)紅豆杉種植> 2年，在栽植的第2年開始，每年的3月和/或8月施 1~2次肥，每株溝施30~50g的肥料。
[0021] 其中，所述的紅豆杉的種類為本領(lǐng)域常規(guī)，一般有中國南方紅豆杉（Taxus Qiinensisvar.Mairei),中國紅豆杉（TaxusQiinensis),東北紅豆杉（Taxus Qispidata),云南紅豆杉（Taxus化nnanensis),西藏紅豆杉（TaxusWallichiana),歐洲 漿果紅豆杉（TaxusBaccata),短葉紅豆杉（Taxus化evifolia),加拿大紅豆杉（Taxus Canadensis)，佛羅里達(dá)紅豆杉（TaxusFloridana)，曼地亞紅豆杉（TaxusMedia,T. speciosa,Τ.fastigiata),矮紫杉（TaxusQispidatavar.nana),或者歐洲黃葉紅豆杉 (TaxusBaccatacvstrictaH或又名Taxusbaccatavar.fruci：!!)，較佳地為中國南方紅 豆杉燈axusQiinensisvar.Mairei)、中國紅豆杉（TaxusQiinensis)、東北紅豆杉（Taxus Qispidata)、云南紅豆杉（Taxus化nnanensis)和西藏紅豆杉（Taxuswallichiana),更佳 地為中國南方紅豆杉（TaxusQiinensisvar.Mairei)。
[002引步驟似中，所述的陶瓷膜的膜芯平均孔徑較佳地為小于lOOnm，更佳地為50nm。
[0023] 步驟（2)中，所述的陶瓷膜的濃縮倍率較佳地為5~20倍，更佳地為10倍。
[0024] 步驟似中，所述的納濾膜的平均孔徑較佳地為不大于2皿。
[00巧]步驟（2)中，所述的納濾膜的濃縮倍率較佳地為1~10倍，更佳地為5倍。
[0026] 上述步驟（2)中涉及的陶瓷膜和納濾膜的具體工作條件如工作管道壓力、溫度等 均隨具體廠家的設(shè)備型號(hào)設(shè)置決定，只要滿足前述條件即能濾除分子量大于50萬道爾頓 的雜質(zhì)，W及濾除分子量小于200道爾頓的小分子的設(shè)備均可使用。
[0027] 步驟（3)中，所述的反相大孔吸附樹脂較佳地為D101大孔吸附樹脂、D101-1大孔 吸附樹脂、YPR-II大孔吸附樹脂、CAD-40大孔吸附樹脂、CAD-45大孔吸附樹脂、D1300