超聲提取機(jī)中,取 0. 05巧-ALA,溶解于5Kg30 %甲醇水溶液中,攬拌均勻獲得含lOppm的5-ALA水溶液,加入至 超聲提取機(jī);開(kāi)啟攬拌電機(jī)和超聲板,超聲提取2個(gè)小時(shí)后,放出提取液,砂芯漏斗抽濾后 得到4. 5Kg提取液,經(jīng)HPLC檢測(cè),4. 5Kg提取液中10-DABIII含量為0. 58mg/血,紫杉醇含 量為0. 03mg/mL,10-DABIII-次提取得率為81. 56%,紫杉醇一次提取得率為54% ;
[0070] 再取0. 05巧-ALA,溶解于5Kg30 %甲醇水溶液中,同樣方法再提取一次,獲得5Kg 的提取液,HPLC檢測(cè)后,10-DABIII含量為0. 06mg/mU紫杉醇含量為0.Olmg/mL,10-DAB III第二次提取得率為9. 375%,10-DABIII合計(jì)總得率為90. 94% ;紫杉醇第二次提取得 率為20%,紫杉醇合計(jì)總得率74%。
[0071] (2)合并兩次紅豆杉提取液,共計(jì)9. 5Kg,經(jīng)實(shí)驗(yàn)型陶瓷膜濃縮后,30%甲醇水溶 液化g/次膜洗3次后得到11. 5Kg清液和化g的母液,Kg母液丟棄。將11. 5Kg的陶瓷膜 清液經(jīng)實(shí)驗(yàn)型納濾膜濃縮,得到3Kg的納濾膜濃縮液和8. 5Kg的清液。HPLC檢測(cè)3Kg的濃 縮液,10-DABIII含量為0. 92mg/mL,濃縮得率為94. 84%,紫杉醇含量為0. 06mg/mL,得率 為 97. 30%。
[0072] 實(shí)施例2采用含10化pm的5-ALA的水溶液提取新鮮的紅豆杉枝葉的實(shí)施例
[0073] 本實(shí)施例中10-DABIII和紫杉醇的提取方法包括如下步驟:
[0074] (1)取化g新鮮的紅豆杉枝葉原料,將該原料投入到超聲提取機(jī)中,取0. 5g5-ALA, 溶解于5Kg30%甲醇水溶液中,攬拌均勻獲得含l(K)ppm的5-ALA水溶液,加入至超聲提 取機(jī);開(kāi)啟攬拌電機(jī)和超聲板,超聲提取2個(gè)小時(shí)后,放出提取液,砂芯漏斗抽濾后得到 4. 5Kg提取液,經(jīng)HPLC檢測(cè),4. 5Kg提取液中10-DABIII含量為0. 62mg/mU紫杉醇含量為 0. 03mg/mL,10-DABIII-次提取得率為87. 19%,紫杉醇一次提取得率為54% ;
[007引再取0. 5巧-ALA,溶解于5Kg30%甲醇水溶液中,同樣方法再提取一次,獲得5Kg的 提取液,HPLC檢測(cè)后,10-DABIII含量為0. 07mg/mU紫杉醇含量為0.Olmg/mL,10-DABIII 第二次提取得率為10. 93%,10-DABIII合計(jì)總得率為98. 12% ;紫杉醇第二次提取得率為 20 %,紫杉醇合計(jì)總得率74%。
[0076] (2)合并兩次紅豆杉提取液,共計(jì)9. 5Kg,經(jīng)陶瓷膜濃縮后,30%甲醇水溶液化g/ 次膜洗3次后得到11. 5Kg清液和化g的母液,Kg母液丟棄。將11. 5Kg的陶瓷膜清液經(jīng)實(shí)驗(yàn) 型納濾膜濃縮,得到3Kg的納濾膜濃縮液和8.5Kg的清液;HPLC檢測(cè)3Kg的濃縮液,10-DAB Ill含量為1. 04mg/mU濃縮得率為99. 36%,紫杉醇含量為0. 06mg/mU得率為97. 30%。
[0077] 實(shí)施例3采用含20化pm的5-ALA的水溶液提取新鮮的紅豆杉枝葉的實(shí)施例
[0078] 本實(shí)施例中10-DABIII和紫杉醇的提取方法包括如下步驟:
[0079] (1)取化g新鮮的紅豆杉枝葉原料,將該原料投入到超聲提取機(jī)中,取Ig5-ALA,溶 解于5Kg30%甲醇水溶液中,攬拌均勻獲得含20化pm的5-ALA水溶液,加入至超聲提取機(jī); 開(kāi)啟攬拌電機(jī)和超聲板,超聲提取2個(gè)小時(shí)后,放出提取液,砂芯漏斗抽濾后得到4. 5Kg提 取液,經(jīng)HPLC檢測(cè),4. 5Kg提取液中10-DABIII含量為0. 61mg/mU紫杉醇含量為0. 03mg/ 血,10-DABIII-次提取得率為85. 78%,紫杉醇一次提取得率為54% ;
[0080] 再取Ig5-ALA,溶解于5Kg30%甲醇水溶液中,同樣方法再提取一次,獲得5Kg的提 取液,HPLC檢測(cè)后,10-DABIII含量為 0. 06mg/mU紫杉醇含量為 0.Olmg/mL,10-DABIII 第二次提取得率為9. 38%,10-DABIII合計(jì)總得率為95. 16% ;紫杉醇第二次提取得率為 20 %,紫杉醇合計(jì)總得率74%。
[0081] (2)合并兩次紅豆杉提取液,共計(jì)9. 5Kg,經(jīng)陶瓷膜濃縮后,30%甲醇水溶液化g/ 次膜洗3次后得到11. 5Kg清液和化g的母液,Kg母液丟棄。將11. 5Kg的陶瓷膜清液經(jīng)實(shí)驗(yàn) 型納濾膜濃縮,得到3Kg的納濾膜濃縮液和8. 5Kg的清液;HPLC檢測(cè)3Kg的濃縮液,10-DAB III含量為0. 98mg/mU濃縮得率為96. 55%,紫杉醇含量為0. 06mg/mU得率為97. 30%。
[0082] 實(shí)施例4不添加5-ALA對(duì)提取液進(jìn)行層析分離的實(shí)施例
[0083] 本實(shí)施例中10-DABIII和紫杉醇的提取方法包括如下步驟:
[0084]取3Kg納濾膜濃縮液(10-DABIII濃度為0. 82mg/mL,紫杉醇濃度為0. 02mg/mL), 緩慢吸附在預(yù)先活化的D101大孔樹(shù)脂柱中,吸附完成后,TLC點(diǎn)板確認(rèn)上柱液吸附完全,沒(méi) 有泄漏;分別調(diào)配30%甲醇水溶液20以40%甲醇水溶液30以50 %甲醇水溶液30以60%甲 醇水溶液30L,90%甲醇水溶液30L,分別按順序淋洗洗脫液,流速為lOOmL/min。TLC點(diǎn)板分 段(展開(kāi)劑=己酸己醋;正己焼=2山濃硫酸碳化法顯色),分別收集得到10-DABIII層 析液段35以紫杉醇層析液段8L。納濾膜濃縮后,分別得到0.化的10-DABIII濃縮液(50% 甲醇)和lOOmL紫杉醇濃縮液化0%甲醇)。HPLC檢測(cè)J后,10-DABIII含量為3. 93mg/mL, 紫杉醇含量為0. 48mg/mL,10-DABIII層析分離得率為79. 88%,紫杉醇分離層析得率為 80%。
[0085] 將500血含甲醇50%的10-DABIII濃縮液加入333血純化水,配成含30%甲醇的 水溶液。冰箱中冷凍12小時(shí),抽濾,少量30%甲醇水溶液淋洗3次,烘干,得到固體2. 05邑, HPLC檢測(cè)含量69. 92%,結(jié)晶得率為72. 94%。
[008引將100血含甲醇60%的紫杉醇濃縮液加入50血純化水,配成含40%甲醇的水溶 液。冰箱中冷凍12小時(shí),抽濾,少量40%甲醇水溶液淋洗3次,烘干,得到固體0. 12g,HPLC 檢測(cè)含量23. 33%,結(jié)晶得率為58. 33%。
[0087]實(shí)施例5添加lOppm的5-ALA對(duì)提取液進(jìn)行層析分離的實(shí)施例[008引本實(shí)施例中10-DABIII和紫杉醇的提取方法包括如下步驟:
[0089]取3Kg的納濾膜濃縮液(10-DABIII濃度為0. 82mg/mL,紫杉醇濃度為0. 02mg/mL),緩慢吸附在預(yù)先活化的D101大孔樹(shù)脂柱中,吸附完成后,TLC點(diǎn)板確認(rèn)上柱液吸 附完全,沒(méi)有泄漏。分別調(diào)配30 %甲醇水溶液20L(加入0. 2g5-ALA),40 %甲醇水溶液 30L(加入0. 3g5-ALA),50 %甲醇水溶液30L(加入0. 3g5-ALA),60 %甲醇水溶液30L(加入 0. 3巧-ALA),90%甲醇水溶液30升(沖柱液,不需要5-ALA),分別按順序淋洗洗脫液,流速 為100血/min。TLC點(diǎn)板分段(展開(kāi)劑=己酸己醋;正己焼=2山濃硫酸碳化法顯色),分別 收集得到10-DABIII層析液段36L紫杉醇層析液段化。納濾膜濃縮后,分別得到0.化的 10-DABIII濃縮液(50%甲醇)和lOOmL紫杉醇濃縮液(60%甲醇)。HPLC檢測(cè)后,10-DAB III含量為4. 15mg/mU紫杉醇含量為0. 50mg/mL,10-DABIII層析分離得率為84. 35%,紫 杉醇分離層析得率為83. 33%。
[0090] 將500血含甲醇50%的10-DABIII濃縮液加入333血純化水,配成含30%甲醇的 水溶液。冰箱中冷凍12小時(shí),抽濾,少量30%甲醇水溶液淋洗3次,烘干,得到固體2. 23邑,HPLC檢測(cè)含量70. 38%,結(jié)晶得率為75. 64%。
[00川將100血含甲醇60%的紫杉醇濃縮液加入50血純化水,配成含40%甲醇的水溶 液。冰箱中冷凍12小時(shí),抽濾,少量40%甲醇水溶液淋洗3次,烘干,得到固體0. 14g,HPLC 檢測(cè)含量22. 17%,結(jié)晶得率為62. 08%。
[0092] 實(shí)施例6添加10化pm的5-ALA對(duì)提取液進(jìn)行層析分離的實(shí)施例
[0093] 本實(shí)施例中10-DABIII和紫杉醇的提取方法包括如下步驟:
[0094] 取3Kg的納濾膜濃縮液(10-DABIII濃度為0. 82mg/mU紫杉醇濃度為0. 02mg/ mL),緩慢吸附在預(yù)先活化的D101大孔樹(shù)脂柱中(柱子內(nèi)勁10cm,柱高1. 2m,內(nèi)填裝2Kg的 D101大孔樹(shù)脂),吸附完成后,TLC點(diǎn)板確認(rèn)上柱液吸附完全,沒(méi)有泄漏。分別調(diào)配30%甲醇 水溶液20L(加入2巧-ALA),40 %甲醇水溶液30L(加入3巧-ALA),50 %甲醇水溶液30L(加 入3g5-ALA),60 %甲醇水溶液30L(加入3g5-ALA),90 %甲醇水溶液30L(沖柱液,不需要 5-ALA),分別按順序淋洗洗脫液,流速為100血/min。TLC點(diǎn)板分段(展開(kāi)劑=己酸己醋:正 己焼=2 ;1,濃硫酸碳化法顯色),分別收集得到10-DABIII層析液段3化,紫杉醇層析液 段化。納濾膜濃縮后,分別得到0.化的10-DABIII濃縮液(50%甲醇)和lOOmL紫杉醇濃 縮液(60%甲醇)。HPLC檢測(cè)后,10-DABIII含量為4. 68mg/血,紫杉醇含量為0. 48mg/血, 10-DABIII層析分離得率為95. 12%,紫杉醇分離層析得率為80%。
[0095] 將500血含甲醇50%的10-DABIII濃縮液加入333血純化水,