巨大戟醇提取物的分離純化方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及巨大戟醇提取物的分離純化方法，屬于中藥提取分離領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 巨大戟醇（ingenol)是一種四環(huán)二聰類天然產(chǎn)物，其結(jié)構(gòu)式如式I所示，來源于 大戟科大戟屬植物，W其為母核的衍生物表現(xiàn)出較好的抗癌、抗HIV等生物活性，其中W巨 大戟醇-3-當歸酸醋為分子實體的新藥Picato已于2012年被抑A批準上市，用于光化性 角化病的治療。
[0003]
[0004] 巨大戟醇結(jié)構(gòu)新奇復(fù)雜，在過去的30多年里，其獨特的結(jié)構(gòu)和活性雖然引起 了眾多化學家的關(guān)注，也有相關(guān)全合成的報道，但合成路線大多步驟繁瑣，得率低，難 W適應(yīng)日益增長的市場需求；LEOF*ha;rma公司與ScrippsResearchInsti1:ute合作 [Science341，878(2013)]，由（+)-3-曹帰通過14步最終合成得到巨大戟醇，總收率達到 1.2%，但其合成路線仍然處于實驗室階段，且合成過程中需要用到劇毒試劑四氧化餓和二 氧化砸，該工藝用于放大生產(chǎn)還有待進一步驗證。
[0005] 目前市場上，巨大戟醇仍然主要來源于大戟科植物的提取分離。
[0006] 中國專利CN102126941A對提取浸膏采用萃取、反萃取、堿水解、調(diào)抑、減壓濃縮， 然后對濃縮后的浸膏采用硅膠柱層析，結(jié)合重結(jié)晶手段純化得到高純度的巨大戟醇，該方 法前期有多次萃取操作，耗時長，轉(zhuǎn)移率低，損失較大，且用到價格昂貴的有毒性的萃取試 劑己臘，成本高，不利于環(huán)保，也不適合規(guī)?；a(chǎn)，而且硅膠柱層析采用了石油離/己酸 己醋（1:1)洗脫除雜，然后加入己酸己醋洗脫，在除雜的過程中由于己酸己醋的加入會將 部分巨大戟醇化合物帶出，降低產(chǎn)率。
[0007] 專利CN103694096A對提取浸膏同樣采用了萃取操作，萃取物濃縮后先后經(jīng)過娃 膠柱層析和制備液相純化，最終得到高純度的巨大戟醇單體，由于千金子藥材中巨大戟醇 主要W其醋類衍生物形式存在，該純化工藝未采用水解步驟，因而最終產(chǎn)品收率極低，難W 滿足規(guī)?；a(chǎn)要求。
[0008] 專利WO2013050365Al中對千金子藥材粉末直接加堿攬拌水解，中和后再依次用 石油離和四氨巧喃萃取，然后采用硅膠柱層析純化得到高純度的巨大戟醇，該方法雖簡化 了純化步驟，但因其用藥材粉末直接加堿攬拌水解，無法保證藥材里的巨大戟醇衍生物都 能浸提出來并水解完全。
[0009] 上述專利均采用了多步萃取操作，因千金子中富含油類成分，萃取時容易乳化，需 大量溶劑多次萃取才能將目標成分萃取完全，萃取效率低，導(dǎo)致提取率低；萃取所用萃取劑 石油離沸點低，減壓濃縮回收率低，也在一定程度上增加了生產(chǎn)成本；而且現(xiàn)有技術(shù)中柱層 析大多采用石油離和己酸己醋混合洗脫劑洗脫，雖然能夠有效的除去極性小的雜質(zhì)，由于 混合洗脫劑中己酸己醋的加入，目標化合物巨大戟醇也會隨著雜質(zhì)被帶出，降低了生產(chǎn)產(chǎn) 率。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0010] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供巨大戟醇提取物的分離純化方法。
[0011] 本發(fā)明的技術(shù)方案：巨大戟醇提取物的分離純化方法，包括如下步驟：
[0012] a、將巨大戟醇提取物加堿水解后，加酸中和，然后濃縮得到膏狀物；
[0013]K將步驟a得到的膏狀物在硅膠柱層析裝置中進行分離純化，所述硅膠柱層析裝 置包括層析柱A和層析柱B，層析柱A和層析柱B之間采用H通閥進行連接；硅膠柱層析具 體操作如下：調(diào)節(jié)H通閥，將層析柱A和層析柱B斷開連接，在層析柱A中上樣，然后，層析 柱A采用石油離洗脫除雜，調(diào)節(jié)H通閥，使層析柱A和層析柱B連接，向?qū)游鲋鵄中加入己 酸己醋洗脫，收集巨大戟醇-己酸己醋混合液；
[0014]C、將步驟b得到的巨大戟醇-己酸己醋混合液減壓濃縮后，靜置析出，過濾得到巨 大戟醇。
[0015] 進一步地，優(yōu)選步驟a中所述巨大戟醇提取物為大戟科大戟屬植物藥材采用提取 溶劑提取得到；所述提取溶劑為甲醇、己醇、丙麗、己離或氯仿。
[0016] 進一步地，優(yōu)選步驟a中所述巨大戟醇提取物的制備方法如下；取大戟科大戟屬 植物藥材，粉碎或切段，按料液比1:5~20w/v加入提取溶劑進行回流提取，提取1~4次， 每次0. 5~2小時，合并提取液，減壓濃縮得巨大戟醇提取物。其中，w/v的單位為kg/L。
[0017] 進一步地，優(yōu)選所述大戟科大戟屬植物為甘遂、乳漿大戟、千金子或南歐大戟。
[0018] 進一步地，優(yōu)選步驟a所述堿水解、酸中和的操作如下：取巨大戟醇提取物，加入 甲醇或無水己醇稀釋，甲醇或無水己醇的體積為巨大戟醇提取物體積的0. 5~2倍，加堿水 解0. 5~24小時，每升混合溶液中堿的含量為5~40g，水解完畢，加酸調(diào)節(jié)抑至7得到水 解液，然后將水解液濃縮得膏狀物。
[0019] 進一步地，優(yōu)選步驟a中所述堿為氨氧化鋼、氨氧化鐘、甲醇鋼或己醇鋼；所述酸 為磯酸、鹽酸、醋酸或甲酸。
[0020] 進一步地，優(yōu)選步驟b中所述硅膠柱層析操作為：
[0021] 調(diào)節(jié)H通閥，將層析柱A和層析柱B斷開連接，裝填層析柱A和層析柱B，層析柱A 采用石油離洗脫平衡至無氣泡，層析柱B采用己酸己醋洗脫平衡至無氣泡，然后上樣，樣品 裝入層析柱A，然后采用石油離洗脫；洗脫完畢，調(diào)節(jié)H通閥，使層析柱A和層析柱B連接， 向?qū)游鲋鵄中加入己酸己醋洗脫，得到巨大戟醇-己酸己醋混合液。
[0022] 進一步地，優(yōu)選步驟b中所述硅膠柱層析操作為：
[0023]調(diào)節(jié)H通閥，將層析柱A和層析柱B斷開連接，層析柱A先裝填0~1/2柱體積的 層析用硅膠，并用石油離洗脫平衡至無氣泡，層析柱B裝填1個柱體積層析用硅膠并用己酸 己醋洗脫平衡至無氣泡，另將拌樣硅膠與步驟a得到的膏狀物按質(zhì)量比1~1. 5:1混合拌 勻，得到樣品I，取樣品I裝入A柱，上樣量為層析柱A柱體積的1/2~1，用2~6個柱體 積的石油離洗脫；然后，調(diào)節(jié)H通閥，使層析柱A和層析柱B連接，用2~6個柱體積的己酸 己醋洗脫，收集巨大戟醇-己酸己醋混合液；
[0024] 或調(diào)節(jié)H通閥，將層析柱A和層析柱B斷開連接，層析柱A裝填1個柱體積層析用 硅膠并用石油離洗脫平衡至無氣泡；層析柱B裝填1個柱體積層析用硅膠并用己酸己醋洗 脫平衡至無氣泡，另將步驟a得到的膏狀物用石油離稀釋得到樣品II，石油離的體積為膏 狀物體積的0. 5~3倍，將1/2~1個柱體積的樣品II上樣至層析柱A，用2~6個柱體積 的石油離洗脫；然后，調(diào)節(jié)H通閥，使層析柱A和層析柱B連接，用2~6個柱體積的己酸己 醋洗脫，收集巨大戟醇-己酸己醋混合液。
[00巧]硅膠柱層析中，優(yōu)選最終收集合并巨大戟醇純度> 80%的巨大戟醇-己酸己醋混 合液。純度是通過高效液相（HHX)檢測的。
[0026] 進一步地，為了達到更好的柱層析效果，優(yōu)選步驟b中各洗脫劑的洗脫速度為每 小時0. 5~5個柱體積。
[0027] 進一步地，優(yōu)選所述步驟b完成后，拆出層析柱A中硅膠，保留層析柱B中硅膠，重 新裝填層析柱A，然后取新的一批步驟a得到的膏狀物按照步驟b的操作進行硅膠柱層析分 離純化，進行連續(xù)操作。
[0028] 進一步地，優(yōu)選步驟b中所述硅膠柱層析裝置中層析柱A連接泉；更進一步地，優(yōu) 選濕法上樣、洗脫溶劑石油離或己酸己醋采用泉送加入。
[0029] 硅膠柱層析濕法上樣時可通過泉送加入。濕法上樣即將膏狀物加石油離稀釋后上 樣，即樣品II。
[0030] 進一步地，優(yōu)選步驟C中所述靜置析出，優(yōu)選在-20~5C下靜置0~2地。
[0031] 本發(fā)明所具有的有益效果如下：
[0032] 1、操作步驟簡單，采用本發(fā)明方法石油離洗脫除雜，然后采用己酸己醋洗脫得到 目標化合物，不僅可W省去多步萃取操作，并且最終的巨大戟醇的純度仍能將純度提高到 99. 9%，由于萃取步驟的省去，操作更為簡單、產(chǎn)品損失少，收率得到提高。
[0033] 2、水解時間大為縮短，在0. 5-24小時內(nèi)，可大幅縮短產(chǎn)品的生產(chǎn)周期。
[0034] 3、采用柱切換技術(shù)，操作更簡單，一次完整的柱層析流程相當于將提取物進行了 多次單柱柱層析，而且層析柱B中的硅膠可W重復(fù)使用2次W上，一定程度上減少了硅膠使 用量和試劑消耗量，可大幅降低生產(chǎn)成本。
[0035] 4、本發(fā)明采用單一洗脫劑石油離洗脫除雜，然后采用己酸己醋洗脫得到目標化合 物，采用的單一洗脫劑，洗脫劑易回收。
[0036] 5、本發(fā)明采用附圖1的裝置，采用泉送加入溶劑，尤其適用于規(guī)?；B續(xù)生產(chǎn)。
【附圖說明】
[0037] 圖1是本發(fā)明用到的裝置連接示意圖（1為層析柱A，2為層析柱B，3為H通閥，4 為泉）；
[0038] 圖2是本發(fā)明制備得到的巨大戟醇TLC譜圖（展開劑為石油離：己酸己醋1:1 ; 顯色劑為2 %香草醒-濃硫酸溶液）；