一種制備短小蛇根草苷的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種制備短小蛇根草苷的方法，尤其涉及一 種以異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺為原料制備短小蛇根草苷的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 膽木（NaucleaofficinalisPierreexPitard)為茜草科烏檀屬喬木,又名藥烏檀、 山熊膽、熊膽樹，主要分布廣東、廣西和海南等地區(qū)，為我國(guó)重點(diǎn)保護(hù)的珍稀野生植物種之 一。膽木以枝、干、皮入藥，味苦、性寒，具有清熱解毒、消腫止痛作用。我國(guó)南方民間常用于 感冒發(fā)熱、急性扁桃體炎、咽喉炎、乳腺炎、肺炎、腸炎、痢疾、濕疹、皮疹、膿瘍、尿路感染、膽 囊炎、下肢潰瘍、腳癬感染等病的治療，同時(shí)也是一味黎族醫(yī)學(xué)常用植物藥，收載于《黎族醫(yī) 藥》。臨床有以膽木心材為原藥材制備的"膽木注射液"和"膽木浸膏片"，用于急性扁桃腺 炎、急性咽喉炎、急性結(jié)膜炎及上呼吸道感染的治療。
[0003] 膽木中主要含有生物堿和五環(huán)三萜等多種化合物成分，其中以生物堿類成分居 多，主要為吲哚類生物堿，包括異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺、短小蛇根草苷、3-表短小舌根草苷和喜 果苷等。其中異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺為膽木中主要生物堿，具有抗腫瘤、抗菌、抗瘧疾等生物活 性。膽木中異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺含量非常高，采用柱層析方法可以分離獲得異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰 胺。
[0004] 而短小蛇根草苷（pumiloside，PML)為喹啉酮類生物堿，也是膽木的主要活性成 分之一，分子式為C26H2SN209，分子量為513,溶于甲醇，難溶于水和乙酸乙酯，具有抗菌、抗 腫瘤、抗增殖等多種作用，其作為抗腫瘤藥物喜樹堿生物合成的重要中間體，有較大的研究 價(jià)值。
[0005] 目前短小蛇根草苷的主要來(lái)源為從膽木中分離提取，但是膽木中短小蛇根草苷含 量較低，從膽木中分離純化短小蛇根草苷較困難。因此，提供一種原料來(lái)源廣泛的制備短小 蛇根草苷的方法具有重要意義，可以為合成抗腫瘤藥物喜樹堿及制備抗菌、抗腫瘤、抗增殖 的藥物提供重要原料。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種原料來(lái)源廣泛的制備短小蛇根草苷的方 法，所述制備方法原料來(lái)源廣泛，操作簡(jiǎn)單，綠色環(huán)保，短小蛇根草苷收率高。
[0007] 為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
[0008] -種制備短小蛇根草苷的方法為以異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺為原料，在含有氧氣的密封 條件下光照放置得到短小蛇根草苷。
[0009] 優(yōu)選的，所述制備方法具體為異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺用水溶解，濾過(guò)，濾液裝于密封容 器中，充入氧氣，光照處理后大孔吸附樹脂吸附，之后依次用水、10%~30%乙醇、40%~ 60 %乙醇洗脫，收集40 %~60 %乙醇洗脫液，濃縮干燥即得。
[0010] 優(yōu)選的，還包括對(duì)收集的40%~60%乙醇洗脫液進(jìn)行脫水處理的步驟。
[0011] 優(yōu)選的，還包括甲醇結(jié)晶的步驟。
[0012] 優(yōu)選的，在充入氧氣后還包括滅菌的步驟。
[0013] 優(yōu)選的，所述100°C~150°C滅菌0· 3h~lh。。
[0014] 優(yōu)選的，所述密封容器為西林瓶。
[0015] 優(yōu)選的，所述光照為自然光。
[0016] 優(yōu)選的，所述光照處理時(shí)間為7天
[0017] 優(yōu)選的，所述大孔吸附樹脂為HPD100大孔吸附樹脂。
[0018] 由上述技術(shù)方案可知，本發(fā)明提供了一種制備短小蛇根草苷的方法。本發(fā)明所述 制備短小蛇根草苷的方法以異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺為原料，在含有氧氣的密封條件下光照放置 得到短小蛇根草苷。由于異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺在膽木中含量非常高，且采用柱層析方法即可 分離獲得異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺，因此本發(fā)明所述制備短小蛇根草苷的方法原料來(lái)源廣泛。而 且本發(fā)明所述制備方法操作簡(jiǎn)單、綠色環(huán)保，同時(shí)短小蛇根草苷收率大于70%。
【附圖說(shuō)明】
[0019] 圖1 7K實(shí)施例1不同處理的異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺溶液的HPLC分析圖，橫坐標(biāo)為出峰 時(shí)間，單位為min，其中A為充入02在避光條件下保存7天后的樣品；B為充入N2在光照條 件下保存7天后的樣品；C為充入空氣在光照條件下保存7天后的樣品；D為充入02在光照 條件下保存7天后的樣品；
[0020] 圖2示實(shí)施例2充入02在光照條件下保存7天后制備得到的異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺主 要降解物的HPLC圖，橫坐標(biāo)為出峰時(shí)間，單位為min，其中，A為1號(hào)色譜峰洗脫液分析圖； B為1號(hào)色譜峰洗脫液放置3天后的分析圖；C為2號(hào)色譜峰洗脫液分析圖。
【具體實(shí)施方式】
[0021] 本發(fā)明實(shí)施例公開了一種制備短小蛇根草苷的方法。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本 文內(nèi)容，適當(dāng)改進(jìn)工藝參數(shù)實(shí)現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動(dòng)對(duì)本領(lǐng)域技術(shù) 人員來(lái)說(shuō)是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的方法已經(jīng)通過(guò)較佳實(shí)施例 進(jìn)行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本
【發(fā)明內(nèi)容】
、精神和范圍內(nèi)對(duì)本文所述的方法進(jìn)行 改動(dòng)或適當(dāng)變更與組合，來(lái)實(shí)現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。
[0022] 為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
[0023] 申請(qǐng)人在研究異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺（strictosamide)水溶液對(duì)光照射的穩(wěn)定性時(shí)， 發(fā)現(xiàn)異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺在光照和充氧氣的條件下發(fā)生了降解。HPLC檢測(cè)異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺 的水溶液，在光照和氧氣的作用下，主要有2個(gè)降解產(chǎn)物，結(jié)果見圖1。通過(guò)HPLC方法對(duì)降 解產(chǎn)物進(jìn)行分離。其中分離得到的1號(hào)降解產(chǎn)物在洗脫液中不穩(wěn)定，重新分離仍然難以得 到含單一色譜峰的洗脫液（見圖2)。而將含有2號(hào)色譜峰的洗脫液濃縮、干燥，甲醇結(jié)晶， 得白色的棒狀結(jié)晶。對(duì)得到的白色的棒狀結(jié)晶進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，1HNMR、13CNMR、HRMS結(jié)果表 明其為短小蛇根草苷。
[0024] 因此本發(fā)明提供了一種制備短小蛇根草苷的方法，以異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺為原料， 在含有氧氣的密封條件下光照放置得到短小蛇根草苷。
[0025] 其中，上述反應(yīng)的反應(yīng)式如下：
[0026]
[0027] 進(jìn)一步的，在一些實(shí)施方案中，所述制備方法具體為異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺用水溶 解，濾過(guò)，濾液裝于密封容器中，充入氧氣，光照處理后大孔吸附樹脂吸附，之后依次用水、 10%~30 %乙醇、40 %~60%乙醇洗脫，收集40 %~60%乙醇洗脫液，濃縮干燥得到短小 蛇根草苷。
[0028] 按照本發(fā)明，所述制備短小蛇根草苷的方法中，所述溶解為超聲波超聲溶解。
[0029] 本發(fā)明所述制備方法中將濾液裝于密封容器中以保證密封條件。其中，在一些實(shí) 施方案中，所述密封容器為西林瓶。
[0030] 本發(fā)明所述制備方法中，所述在含有氧氣的條件可以是持續(xù)通入氧氣，也可以一 次通入過(guò)量的氧氣以保持含有氧氣的條件。
[0031 ] 在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明所述制備方法中，所述光照為自然光。
[0032] 在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明所述制備方法中，所述光照為日光燈作為光源照射。
[0033] 進(jìn)一步的，本發(fā)明所述制備方法中，所述光照處理時(shí)間優(yōu)選為5-10天。更優(yōu)選為 7天。
[0034] 按照本發(fā)明，由于需要在光照條件下放置，且光照時(shí)間較長(zhǎng)，因此為排除微生物影 響，所述制備方法優(yōu)選在充入氧氣后還包括滅菌的步驟，以對(duì)異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺溶液進(jìn)行 滅菌。
[0035] 進(jìn)一步的，所述滅菌優(yōu)選為高溫滅菌。在一些實(shí)施方案中為100°C~150°C滅菌 0. 3h~lh。在一些具體實(shí)施例中為121°C滅菌20min。
[0036] 大孔吸附樹脂是一類不含交換基團(tuán)且有大孔結(jié)構(gòu)的高分子吸附樹脂，具有良好的 大孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)和較大的比表面積，可以通過(guò)物理吸附從水溶液中有選擇地吸附有機(jī)物。大 孔吸附樹脂理化性質(zhì)穩(wěn)定，不溶于酸、堿及有機(jī)溶劑，對(duì)有機(jī)物選擇性好，不受無(wú)機(jī)鹽等離 子和低分子化合物的影響。本發(fā)明所述制備方法采用大孔吸附樹脂吸附分離異長(zhǎng)春花苷內(nèi) 酰胺降解反應(yīng)液中的短小蛇根草苷。
[0037] 按照本發(fā)明，所述大孔吸附樹脂優(yōu)選為非極性大孔吸附樹脂。更優(yōu)選為非極性苯 乙烯型大孔吸附樹脂，如HPD100、D-101、XAD-1、XAD-2、XAD-4。進(jìn)一步的，所述大孔吸附樹 脂優(yōu)選為HPD100大孔吸附樹脂。
[0038] 異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺降解反應(yīng)液經(jīng)大孔吸附樹脂吸附后，需要經(jīng)過(guò)洗脫液洗脫后才 能獲得短小蛇根草苷。所述洗脫具體為依次用水、10 %~30 %乙醇、40 %~60 %乙醇洗脫。 其中水和10%~30%乙醇洗脫可以除去結(jié)合在大孔吸附樹脂上的雜質(zhì)。40%~60%乙醇 洗脫大孔吸附樹脂收集得到含有短小蛇根草苷的洗脫液。其中，上述乙醇溶液為乙醇的水 溶液，所述百分比除特別說(shuō)明外均為體積百分比。
[0039] 申請(qǐng)人采用HPLC法對(duì)降解產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示含1號(hào)峰的洗脫液放置3天后 1號(hào)峰的比例降低，2號(hào)峰的比例明顯增加，表明1號(hào)峰可轉(zhuǎn)化為2號(hào)峰。因此本發(fā)明所述制 備方法在濃縮干燥前還包括脫水的步驟，以利于異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺氧化后的雜質(zhì)峰轉(zhuǎn)化為 短小蛇根草苷，提高洗脫液中短小蛇根草苷的含量。具體為異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺用水溶解，濾 過(guò)，濾液裝于密封容器中，充入氧氣，滅菌，光照處理后大孔吸附樹脂吸附，之后依次用水、 10 %~30 %乙醇、40 %~60 %乙醇洗脫，收集40 %~60 %乙醇洗脫液，脫水，濃縮干燥得到 短小蛇根草苷。
[0040] 在某些具體實(shí)施利中，所述制備方法具體為異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺用水溶解，濾過(guò)，濾 液裝于密封容器中，充入氧氣，滅菌，光照處理后大孔吸附樹脂吸附，之后依次用水、20%乙 醇、40%乙醇洗脫，收集40%乙醇洗脫液，脫水，濃縮干燥得到短小蛇根草苷。
[0041] 優(yōu)選的，所述脫水具體為加熱回流，收集回流液。
[0042] 進(jìn)一步的，所述制備方法還包括純化步驟。所述純化具體優(yōu)選為甲醇結(jié)晶。短小 蛇根草苷粗品經(jīng)甲醇結(jié)晶得到短小蛇根草苷純品。
[0043] 為了進(jìn)一步理解本發(fā)明，下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本