發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。其中實(shí)施例涉 及的儀器與試劑如下：Aglientl100 高效液相色譜儀，配備DAD檢測(cè)器（美國Aglient公 司）；Aglientl260制備液相色譜儀，配備MWD檢測(cè)器（美國Aglient公司）；Aglientl290 液質(zhì)聯(lián)用儀，配備DAD檢測(cè)器、Q-T0F6538質(zhì)譜儀（美國Aglient公司）；MettlerAE240電 子分析天平（梅特勒-托利多儀器-上海有限公司）；YXQ-LS-30S II型立式壓力蒸汽滅菌 鍋（上海博訊實(shí)業(yè)有限公司）。異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺原料藥（純度大于98%，江蘇康緣藥業(yè) 股份有限公司）；HPD100大孔吸附樹脂（滄州寶恩有限公司）；色譜純乙腈（美國TEDIA公 司）；水為Milli-Q超純水；其它試劑均為分析純。
[0044] 實(shí)施例1 :異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺水溶液光照射穩(wěn)定性研究
[0045] 取異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺適量，用超純水超聲溶解，配制成約1. 2mg/ml的溶液，濾過， 將濾液分裝至l〇ml的西林瓶中，分成三組，第一組向溶液中充入氮?dú)?，第二組向溶液中充 入氧氣，第三組為空氣，壓塞，乳蓋，滅菌（溫度：121°C;時(shí)間20min)。由于光照時(shí)間較長(zhǎng)， 為排除微生物影響，優(yōu)選對(duì)異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺溶液進(jìn)行高溫滅菌。樣品放至室溫后取樣， HPLC檢測(cè)滅菌前后樣品中異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺含量，然后將三組樣品分別置于室溫自然光照 處和避光處保存，7天后分別取樣，HPLC檢測(cè)異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺含量。色譜條件：色譜柱 為PenomenexC18 (4. 60X250mm，5μm);流動(dòng)相為乙腈-〇. 1 %磷酸水，梯度洗脫條件為0~ 3〇111；[11，乙腈15%~32%，30~50111；[11，乙腈32%~95%;流速11]117 /111；[11;柱溫30°0;檢測(cè)波 長(zhǎng)226nm;進(jìn)樣量5yL。HPLC檢測(cè)結(jié)果見表1、圖1。
[0046] 表1異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺在不同情況下的含量
[0048] 注：滅菌前異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺的含量為100%
[0049] 由表1結(jié)果可見，異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺在滅菌前后，含量無明顯變化；避光放置后的 三組樣品中異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺含量均無明顯變化，說明異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺水溶液在避光條 件下穩(wěn)定。而自然光下放置的樣品中，充氧氣和空氣的樣品中異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺含量明顯 降低，其中充氧氣組降解率達(dá)58 %，而充氮?dú)饨M含量變化不明顯，說明異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺的 降解與光照和氧氣有關(guān)。由圖1可知，異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺在水溶液中主要產(chǎn)生2個(gè)降解產(chǎn) 物。
[0050] 實(shí)施例2 :
[0051] 稱取異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺原料0. 7g，用500ml超純水超聲溶解，濾過，濾液分裝至 20ml西林瓶中，充入氧氣，壓塞，乳蓋，滅菌（溫度：121°C;時(shí)間20min)。樣品置于自然光 照處放置7天，將反應(yīng)液過HPD100大孔吸附樹脂柱，依次用水、20%乙醇、40%乙醇洗脫，收 集40 %乙醇洗脫液，濃縮，干燥，得含有主要降解物（圖1中1號(hào)色譜峰和2號(hào)色譜峰）的 干膏262mg;干膏用甲醇溶解，通過制備液相分離，流動(dòng)相為乙腈-水（15:85)，分別收集含 有1號(hào)、2號(hào)色譜峰的洗脫液。分離得到的1號(hào)降解產(chǎn)物在洗脫液中不穩(wěn)定，重新分離仍難 得到含單一色譜峰的洗脫液（見圖2)。并且將含1號(hào)峰的洗脫液放置3天后1號(hào)峰的比例 降低，2號(hào)峰的比例明顯增加，表明1號(hào)峰可轉(zhuǎn)化為2號(hào)峰。將含有2號(hào)色譜峰的洗脫液濃 縮、干燥，干膏用甲醇結(jié)晶，得白色的棒狀結(jié)晶58mg。
[0052] 結(jié)構(gòu)鑒定2號(hào)降解物的具體參數(shù)如下：HRMS calcd for C1SH1S06[M+H] + :513. 18856， found513. lSeTe.^NMlUDMSO-dejOOMHz)，δ :12.07(s，lH，ΝΗ)，8· 13(d，J = 8· 1Ηz，1Η， H-9)，7.67(m，lH，H-ll)，7.60(d，J = 8.2Hz，lH，H-12)，7.35(m，lH，H-10)，7.05(d，J = 2. 6Hz，1H，H-17)，5. 81 (m，1H，H-19)，5. 48(dd，J = 17. 1Hz，1. 8Hz，1H，H-18)，5. 40(d，J =1. 5Hz，1H，H-21)，5. 35(dd，J = 17. 1Hz，1. 8Hz，1H，H-18)，4. 77(br-d，J = 12. 0Hz，1H， H-13) ,4. 55 (d, J = 7. 9Hz, 1H, Η-Γ ) ,4. 48 (d, J = 14. 0Hz, 1H, H-5) ,4. 33 (d, J = 14. 0Hz, 1H，H-5)，3. 71 (m, 1H, H-6'），3. 44 (m, 1H, H-6'），3. 26 (m, 1H, H-15)，3. 19 (m, 2H, H-5'，H-3'）， 3. 02(m,2H,H-4,,H-2,),2.66 (m,lH,H-20) ,2. 50 (overlapped,H-14), 2. 02 (m, 1H,H-14).13C NMR(DMS0,126MHz)δ172. 9 (C-7)，163. 9(C-22)，149. 5(C-2)，145. 0(C-17)，140. 3(C-13)， 132. 5(C-19)，131. 5(C-11)，125. 2(C-8)，124. 7(C-9)，123. 2(C-10)，120. 4(C-18)， 118. 3(C-12)，112. 9(C-6)，108. 9(C-16)，97. 8(C-1'），94. 8(C-21)，77. 2(C-5'）， 76. 3 (C-3,），73. 1 (C-2,），69. 9 (C-4,），61. 0 (C-6,），59. 4 (C-3)，47. 40 (C-5)，43. 6 (C-20)， 28. 1(C-14)，23.6(C-15).以上數(shù)據(jù)與短小蛇根草苷（pumiloside)基本一致。
[0053] 實(shí)施例3:
[0054] 稱取異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺原料0. 7g，用500ml超純水超聲溶解，濾過，濾液分裝至 20ml西林瓶中，持續(xù)通入氧氣，KKTC滅菌60min，然后樣品置于自然光照處放置7天，將反 應(yīng)液過HPD100大孔吸附樹脂柱，之后依次用水、20%乙醇、40%乙醇洗脫，收集40%乙醇洗 脫液，濃縮，干燥，得粗品〇.6g，粗品用甲醇結(jié)晶，得白色棒狀結(jié)晶，產(chǎn)率70%，純度90%。對(duì) 制得的粗品進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，結(jié)果同實(shí)施例2。
[0055] 實(shí)施例4 :
[0056] 稱取異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺原料0. 7g，用500ml超純水超聲溶解，濾過，濾液分裝至 20ml西林瓶中，充入氧氣，121°C滅菌20min，然后樣品置于自然光照處放置7天，將反應(yīng)液 過HPD100大孔吸附樹脂柱，之后依次用水、30 %乙醇、60 %乙醇洗脫，收集60%乙醇洗脫 液，濃縮，干燥，得粗品〇. 6g，粗品用甲醇結(jié)晶，得白色棒狀結(jié)晶，廣率72%，純度95%。對(duì)白 色棒狀結(jié)晶進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，結(jié)果同實(shí)施例2。
[0057] 實(shí)施例5 :
[0058] 稱取異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺原料0. 7g，用500ml超純水超聲溶解，濾過，濾液分裝至 20ml西林瓶中，充入氧氣，150°C滅菌20min，然后樣品置于自然光照處放置7天，將反應(yīng)液 過HPD100大孔吸附樹脂柱，之后依次用水、20 %乙醇、40 %乙醇洗脫，收集40%乙醇洗脫 液，加熱回流，回流液濃縮，干燥，得粗品〇. 6g，粗品用甲醇結(jié)晶，得白色棒狀結(jié)晶0. 5g，產(chǎn) 率75%，純度95%。對(duì)白色棒狀結(jié)晶進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，結(jié)果同實(shí)施例2。
[0059] 以上實(shí)施例的說明只是用于幫助理解本發(fā)明的方法及其核心思想。應(yīng)當(dāng)指出，對(duì) 于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行 若干改進(jìn)和修飾，這些改進(jìn)和修飾也落入本發(fā)明權(quán)利要求的保護(hù)范圍內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種制備短小蛇根草苷的方法，其特征在于，以異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺為原料，在含有氧 氣的密封條件下光照放置得到短小蛇根草苷。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述制備方法具體為異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺 用水溶解，濾過，濾液裝于密封容器中，充入氧氣，光照處理后大孔吸附樹脂吸附，之后依次 用水、10 %~30 %乙醇、40 %~60 %乙醇洗脫，收集40 %~60 %乙醇洗脫液，濃縮干燥即 得。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，還包括對(duì)收集的40%~60%乙醇洗脫液 進(jìn)行脫水處理的步驟。4. 根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的方法，其特征在于，還包括甲醇結(jié)晶的步驟。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在充入氧氣后還包括滅菌的步驟。6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述滅菌為KKTC~150°C滅菌0.3h~ lh〇7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述密封容器為西林瓶。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述光照為自然光。9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述光照處理時(shí)間為7天。10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述大孔吸附樹脂為HPD100大孔吸附樹 脂。
【專利摘要】本發(fā)明屬于藥物化學(xué)領(lǐng)域，公開了一種制備短小蛇根草苷的方法。本發(fā)明所述制備短小蛇根草苷的方法以異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺為原料，在含有氧氣的密封條件下光照放置得到短小蛇根草苷。由于異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺在膽木中含量非常高，且采用柱層析方法即可分離獲得異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺，因此本發(fā)明所述制備短小蛇根草苷的方法原料來源廣泛。而且本發(fā)明所述制備方法操作簡(jiǎn)單、綠色環(huán)保，同時(shí)短小蛇根草苷收率大于70％。
【IPC分類】C07H17/00, C07H1/00
【公開號(hào)】CN105273013
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410235324
【發(fā)明人】蕭偉, 王振中, 丁崗, 李兆亮, 劉文君, 孟兆青, 孫林, 楊彪, 齊曉輝
【申請(qǐng)人】江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司
【公開日】2016年1月27日
【申請(qǐng)日】2014年5月29日