優(yōu)選地是在合適的包裝后進(jìn)行γ-照射。
[0083] 還可以有利地將根據(jù)本發(fā)明干的顆粒狀細(xì)胞培養(yǎng)基用于生產(chǎn)其他經(jīng)壓實(shí)的培養(yǎng) 基形式（如片劑或較大的薄片）。為此，將根據(jù)本發(fā)明干的顆粒狀細(xì)胞培養(yǎng)基在合適的擠壓 機(jī)，例如壓片機(jī)中進(jìn)一步壓實(shí)?？梢栽诓惶砑悠渌M分的情況下使用顆粒狀培養(yǎng)基，或者可 以將其與其他組分如壓片輔助劑混合，或者與例如對(duì)緩釋片劑特定的組分混合或隨后用所 述組分包衣。另一方面，可以將干的顆粒狀細(xì)胞培養(yǎng)基與支持片劑快速溶解的組分，如碳酸 氫鈉混合。
[0084] 根據(jù)本發(fā)明的方法成為干的顆粒狀或者經(jīng)壓實(shí)的細(xì)胞培養(yǎng)基通常包含至少一種 或多種糖類組分、一種或多種氨基酸、一種或多種維生素或者維生素前體、一種或多種鹽、 一種或多種緩沖劑組分、一種或多種輔因子以及一種或多種核酸組分。
[0085] 培養(yǎng)基還可以包含脂肪酸和/或脂肪酸衍生物和/或普盧蘭尼克酸（pluronic acid)和/或表面活性組分如以化學(xué)方法制備的非離子型表面活性劑。合適的非離子型 表面活性劑的一個(gè)實(shí)例是終止于伯羥基的雙功能嵌段共聚物表面活性劑，其例如是以來(lái)自 basf，德國(guó)的商標(biāo)名稱pluronie翁可得到的。
[0086] 可以將根據(jù)本發(fā)明干的顆粒狀培養(yǎng)基用于與本領(lǐng)域已知的粉末培養(yǎng)基或液體培 養(yǎng)基相同的目的。因?yàn)榭梢匀菀椎靥幚泶罅康念w粒狀培養(yǎng)基，而沒(méi)有所討論的粉末培養(yǎng)基 的缺點(diǎn)，所以所述干的顆粒狀培養(yǎng)基可以優(yōu)選地用于生物藥物生產(chǎn)。
[0087] 為了使用，將溶劑，優(yōu)選地水（最特別地蒸餾水和/或去離子水或者純化的水或用 于注射的水）或者含水緩沖液加入到干的顆粒狀培養(yǎng)基中，并混合組分，直到培養(yǎng)基完全 溶解于溶劑中。
[0088] 溶劑還可以包含鹽水、提供1. 0-10. 0的pH范圍的可溶性酸離子或堿離子、穩(wěn)定 劑、表面活性劑、防腐劑和醇或者其他極性有機(jī)溶劑。
[0089] 還可能將其他物質(zhì)，如用于調(diào)整pH的緩沖物質(zhì)、胎牛血清、糖等加入到細(xì)胞培養(yǎng) 基和溶劑的混合物中。然后將得到的液體細(xì)胞培養(yǎng)基與待生長(zhǎng)或者待維持的細(xì)胞接觸。
[0090] 根據(jù)本發(fā)明干的顆粒狀培養(yǎng)基是容易處理的。與粉末培養(yǎng)基相比較，當(dāng)處理所述 培養(yǎng)基時(shí)，顯著降低了其所形成的粉塵的量。
[0091] 根據(jù)本發(fā)明的培養(yǎng)基可以容易地溶解于溶劑中。重構(gòu)是快速的，優(yōu)選地少于30分 鐘，更優(yōu)選地少于15分鐘。
[0092] 甚至在運(yùn)輸期間搖動(dòng)或者振動(dòng)的情況下，根據(jù)本發(fā)明干的顆粒狀培養(yǎng)基的組合物 仍是均一的。
[0093] 此外，與濕的顆粒狀培養(yǎng)基相反，更溫和的干顆粒條件允許直接且容易地處理這 樣的培養(yǎng)基，其甚至包含熱敏感和/或氧化敏感物質(zhì)如維生素（例如維生素B1)、葡萄糖、硫 胺素、鐵鹽或包含二硫鍵的組分。
[0094] 通過(guò)以下附圖和實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明了本發(fā)明，而并非限制本發(fā)明。
[0095] 將以上和以下引用的所有申請(qǐng)、專利和出版物，以及在2010年12月16日提交的 相應(yīng)美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)61/423, 700的全部公開(kāi)內(nèi)容并入本文作為參考。 實(shí)施例
[0096] 以下實(shí)施例代表了本發(fā)明的實(shí)際應(yīng)用。
[0097] 1. Dulbecco改良的Eagle培養(yǎng)基的干壓實(shí)
[0098] Dulbecco改良的Eagle培養(yǎng)基也稱為DMEM，是通常用于使動(dòng)物細(xì)胞生長(zhǎng)的培養(yǎng) 基。DMEM的成分為（以mg/1計(jì)）：
[0099] 無(wú)機(jī)鹽：
[0100] CaCl2(無(wú)水):200.00
[0101] Fe(N03) · 9H20 :0· 10
[0102] KC1：400. 00
[0103] MgS04(無(wú)水）：97.67
[0104] NaCl :6400. 00
[0105] NaH2P04·H20 :125. 00
[0106] 其他組分：
[0107] D-葡萄糖：4500. 00
[0108]酚紅:15. 00
[0109] 丙酮酸鈉（Natriumpyruvat) :110. 00
[0110] 氨基酸：
[0111] L-精氨酸HC1 :84· 00
[0112] L-半胱氨酸 2HC1 :63· 00
[0113] L-谷氨酰胺：584· 00
[0114] 甘氨酸：30.00
[0115] L-組氨酸HC1H20 :42· 00
[0116] L-異亮氨酸：105.00
[0117] L-亮氨酸：105. 00
[0118] L-賴氨酸HC1 :146. 00
[0119] L-甲硫氨酸：30· 00
[0120] L-苯丙氨酸：66. 00
[0121] L-絲氨酸：42.00
[0122] L-蘇氨酸：95.00
[0123] L-色氨酸：16.00
[0124] L-酪氨酸 2Na· 2H20 :104. 33
[0125] L-纈氨酸：94. 00
[0126] 維生素：
[0127] D-泛酸鈣：4.00
[0128] 氯化膽堿：4.00
[0129]葉酸:4. 00
[0130] i-肌醇：7.20
[0131] 煙酰胺：4.00
[0132]核昔素:0. 40
[0133] 硫胺素HC1 :4.00
[0134] 混合DMEM的全部成分，并在臥式研磨機(jī)中研磨，以產(chǎn)生均一的干粉末。將30kg粉 末進(jìn)料到具有以下特征的輥式壓制機(jī)中：
[0135] -凹平面輥
[0136] -$昆間距離：1.5mm
[0137] -輥間空隙的長(zhǎng)度：10cm
[0138] -擠壓力：5〇kN
[0139] 得到的物質(zhì)顯示出較大壓實(shí)物的更百分比。在具有3mm篩眼孔徑的振動(dòng)篩磨機(jī) (型號(hào)FC200,B印exGmbH)中篩濾得到的物質(zhì)。
[0140] 將具有低于0.2_大?。ㄖ睆剑┑念w粒級(jí)分再引入到輥式壓制機(jī)中。獲得具有大 于75 %的顆粒具有l(wèi)-3mm大小的干顆粒狀DMEM培養(yǎng)基。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 不包含蛋白胨或胰蛋白胨的干的顆粒狀細(xì)胞培養(yǎng)基用于培養(yǎng)細(xì)胞的用途，所述培養(yǎng) 基通過(guò)如下方法制備 a) 以培養(yǎng)基組分的混合粉末形式提供細(xì)胞培養(yǎng)基，所述細(xì)胞培養(yǎng)基包含一種或多種 糖類組分、一種或多種氨基酸、一種或多種維生素、一種或多種鹽、一種或多種緩沖劑組分、 一種或多種輔因子以及一種或多種核酸組分，其中所述細(xì)胞培養(yǎng)基不包含蛋白胨或胰蛋白 胨； b) 在輥式壓制機(jī)中壓實(shí)所述混合的粉末， 通過(guò)以下步驟實(shí)現(xiàn)所述用途： a) 在溶劑中溶解所述不包含蛋白胨或胰蛋白胨的干的顆粒狀細(xì)胞培養(yǎng)基，以形成液體 細(xì)胞培養(yǎng)基； b) 將所述液體細(xì)胞培養(yǎng)基與待培養(yǎng)的所述細(xì)胞接觸。2. 權(quán)利要求1的用途，其中所述培養(yǎng)基通過(guò)如下方法制備 a) 以培養(yǎng)基組分的混合粉末形式提供細(xì)胞培養(yǎng)基，所述細(xì)胞培養(yǎng)基包含一種或多種 糖類組分、一種或多種氨基酸、一種或多種維生素、一種或多種鹽、一種或多種緩沖劑組分、 一種或多種輔因子以及一種或多種核酸組分，其中所述細(xì)胞培養(yǎng)基不包含蛋白胨或胰蛋白 胨； b) 在輥式壓制機(jī)中壓實(shí)所述混合的粉末， 其特征在于如下實(shí)施步驟b): bl)在輥式壓制機(jī)中壓實(shí)所述混合的粉末； b2)將步驟bl)中獲得的具有小于0.5mm顆粒大小的經(jīng)壓實(shí)的所述細(xì)胞培養(yǎng)基的所有 部分以待填充到輥式壓制機(jī)中的培養(yǎng)基組分的混合粉末形式再引入到所述細(xì)胞培養(yǎng)基中。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2的用途，其特征在于所述不包含蛋白胨或胰蛋白胨的干的顆粒 狀細(xì)胞培養(yǎng)基是哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基。4. 權(quán)利要求1 一 3任一項(xiàng)的用途，其特征在于所述輥式壓制機(jī)的擠壓能力在30至 80kN/cm輥寬之間。5. 權(quán)利要求1 一 4任一項(xiàng)的用途，其特征在于輥式壓制機(jī)的輥之間的間隙大小在0. 5 至3mm之間。6. 權(quán)利要求1一5任一項(xiàng)的用途，其特征在于在步驟c)中，將從輥式壓制機(jī)中壓實(shí)所 述混合的粉末獲得的物質(zhì)在篩磨機(jī)進(jìn)一步處理。7. 權(quán)利要求1 一 6任一項(xiàng)的用途，其特征在于所述顆粒狀細(xì)胞培養(yǎng)基的大于80%的顆 粒具有大于〇. 5mm的大小。8. 權(quán)利要求1 一 7任一項(xiàng)的用途，其特征在于所述顆粒狀細(xì)胞培養(yǎng)基的大于90%的顆 粒具有大于〇. 5mm的大小。9. 權(quán)利要求1一8任一項(xiàng)的用途，其特征在于用于溶解所述不包含蛋白胨或胰蛋白胨 的干的顆粒狀細(xì)胞培養(yǎng)基以形成液體細(xì)胞培養(yǎng)基的溶劑是水。
【專利摘要】本發(fā)明涉及不包含蛋白胨或胰蛋白胨的干的顆粒狀細(xì)胞培養(yǎng)基，尤其涉及支持哺乳動(dòng)物和/或昆蟲(chóng)和/或植物細(xì)胞生長(zhǎng)的干的顆粒狀細(xì)胞培養(yǎng)基制劑。本發(fā)明還涉及這些干的顆粒狀細(xì)胞培養(yǎng)基的生產(chǎn)及其用途。
【IPC分類】C12N5/071
【公開(kāi)號(hào)】CN105274047
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510679620
【發(fā)明人】M·H·雷納-布蘭德斯, X·(D)·趙
【申請(qǐng)人】默克專利有限公司
【公開(kāi)日】2016年1月27日
【申請(qǐng)日】2011年11月18日
【公告號(hào)】CA2821799A1, CN103261404A, EP2652123A1, EP2652123B1, US20130267027, WO2012079679A1