一種克羅烷型二萜化合物及其制備方法和醫(yī)藥用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及從苦石蓮的干燥成熟種子中分離得到的一種 具有治療人神經(jīng)膠質(zhì)瘤作用的克羅燒型二祗類化合物及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 苦石蓮（Hance)系豆科植物南蛇巧的種子，又名瞭芙云實(shí)，老鴉枕頭。其性苦寒， 歸屯、、脾、腎經(jīng)，是一種藥食同源植物，主要分布于廣東、廣西、四川、云南等地。有清熱化濕， 散疲止痛等功效，常用于風(fēng)熱感冒，頻疾淋濁，吵逆，癡腫，瘡癖，跌打損傷等癥。
[0003] 苦石蓮主要含二祗類、黃酬類、不飽和脂肪酸等多種化學(xué)成分?？嗍徎瘜W(xué)成分研 究中對(duì)二祗類的研究最為活躍，研究發(fā)現(xiàn)了新的、大量的二祗類化合物多數(shù)具有較強(qiáng)的藥 理活性。
[0004] 苦石蓮作為一種藥用資源在民間用于治療流感、乙肝、皮膚病等一直有著廣泛的 用藥基礎(chǔ)，其具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗病毒、抗腫瘤、抗肝損傷、降血脂、抗動(dòng)脈粥樣硬化等藥理作 用。王寒等研究發(fā)現(xiàn)苦石蓮不同提取組分能夠有效抑制THP-I細(xì)胞中白介素-6,白介素-8 的分泌，從而發(fā)揮抗炎、鎮(zhèn)痛作用。吳兆華等從苦石蓮中分離純化的苦石蓮蛋白質(zhì)具有抑 制小鼠黑色素瘤細(xì)胞增殖的活性及抑菌活性；從其種子中分離得到的瞭芙云實(shí)星（minaxin A)經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)其對(duì)人肝癌化pG2細(xì)胞的生長有抑制作用。劉明等用苦石蓮乙醇提取物預(yù)防 性給藥，用四氯化碳所致肝損傷模型為研究對(duì)象，研究結(jié)果顯示：苦石蓮乙醇提取物能抑制 小鼠急性肝損傷血清AST和ALT水平，對(duì)小鼠急性肝損傷具有保護(hù)作用?？嗍徶泻械?亞油酸、油酸、等不飽和脂肪酸具有降低血脂和膽固醇、減少動(dòng)脈粥樣硬化、抑制癌細(xì)胞生 長和促進(jìn)大腦發(fā)育等作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種從苦石蓮的干燥成熟種子中分離得到的一種具有治療 人神經(jīng)膠質(zhì)瘤作用的克羅燒型二祗類化合物及其制備方法。
[0006] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得W實(shí)現(xiàn)的：
[0007] 具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，
[0008]
[0009]所述的化合物（I)的制備方法，包含W下操作步驟：(a)苦石蓮的干燥成熟種子 粉碎，用70~80%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油酸、乙酸乙醋 和水飽和的正下醇萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；化）步 驟（a)中乙酸乙醋萃取物用大孔樹脂除雜，先用15%乙醇洗脫8個(gè)柱體積，再用70%乙醇 洗脫12個(gè)柱體積，收集70%乙醇洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫物浸膏；（C)步驟化）中 70%乙醇洗脫物浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比為80:1、50:1、30:1、10:1和1:1的二 氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到5個(gè)組分；（d)步驟（C)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次 用體積比為15:1、10:1和5:1的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟（d)中 組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為70%的甲醇水溶液等度洗 脫，收集8~10個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物（I)。
[0010] 進(jìn)一步地，步驟（a)中，用75%乙醇熱回流提取，合并提取液。
[0011] 進(jìn)一步地，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。
[0012] 一種藥物組合物，該藥物組合物含有治療有效量的權(quán)利要求1所述的化合物（I) 和藥學(xué)上可接受的載體。
[0013] 所述的化合物（I)在制備治療人神經(jīng)膠質(zhì)瘤的藥物中的應(yīng)用。
[0014] 所述的藥物組合物在制備治療人神經(jīng)膠質(zhì)瘤的藥物中的應(yīng)用。
[0015] 本發(fā)明化合物用作藥物時(shí)，可W直接使用，或者W藥物組合物的形式使用。
[0016] 該藥物組合物含有治療有效量的本發(fā)明化合物（I)，其余為藥物學(xué)上可接受的、 對(duì)人和動(dòng)物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0017] 所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料 W及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物組合物W單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明藥物可 通過口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時(shí)，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等；用于注射時(shí)，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無菌粉針、脂質(zhì)體或乳劑等。
【附圖說明】
[001引圖1為化合物（I)結(jié)構(gòu)式；
[0019] 圖2為化合物（I)理論ECD值與實(shí)驗(yàn)ECD值比較。
【具體實(shí)施方式】
[0020] 下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不W此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。盡管參照較佳實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可W對(duì) 本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和范圍。
[0021] 實(shí)施例1:化合物（I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0022] 試劑來源：乙醇、石油酸、乙酸乙醋、正下醇、二氯甲燒為分析純，購自上海凌峰化 學(xué)試劑有限公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學(xué)試劑有限公司。
[002引制備方法：（a)將苦石蓮的干燥成熟種子（8kg)粉碎，用75%乙醇熱回流提取 (2化X3次），合并提取液，濃縮至無醇味（3L)，依次用石油酸（化X3次）、乙酸乙醋0LX3 次）和水飽和的正下醇（3LX3次）萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物（347g) 和正下醇萃取物；(b)步驟（a)中乙酸乙醋萃取物用AB-8型大孔樹脂除雜，先用15%乙醇 洗脫8個(gè)柱體積，再用70%乙醇洗脫12個(gè)柱體積，收集70%乙醇洗脫液，減壓濃縮得70% 乙醇洗脫物浸膏（129g) ; (C)步驟化）中70%乙醇洗脫浸膏用正相硅膠分離，依次用體積 比為80:1 (8個(gè)柱體積）、50:1 (8個(gè)柱體積）、30:U6個(gè)柱體積）、10:1 (8個(gè)柱體積）和1:1 (5 個(gè)柱體積）的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到5個(gè)組分；（d)步驟（C)中組分4 (31g)用正相 硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為15:1 (8個(gè)柱體積）、10:1 (10個(gè)柱體積）和5:U6個(gè)柱體 積）的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟（d)中組分2 (Hg)用十八烷基娃 燒鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為70%的甲醇水溶液等度洗脫，收集8-10個(gè)柱體 積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物（I)(48mg)。
[0024] 結(jié)構(gòu)確證：HR-ESIMS顯示[M+Na]+為m/z395. 1102,結(jié)合核磁特征可得分子式為 〔2〇&。〇7,不飽和度為11。核磁共振氨譜數(shù)據(jù)5h(卵m，DMS0-de，500MHz) :H-2(5. 86,山J= 10. 0)，H-3 (5. 47,dd，J= 10. 0, 2.W，H-4 (2. 66,d，J= 2.W，H-6 (I. 69,dd，J= 14. 5， 4. 0)，H-6 (I. 27,dddd，J= 14. 5,14. 5,4. 0, 2. 0)，H-7 (I. 76,ddd，J= 17. 5,6. 5,4. 0)， H-7(2. 39,m)，35,m)，55,dd，J=14. 0,3. 5)，H-12巧.72,dd，J=12. 5， 3.W，H-14 化.39,dd，J= 2. 0,1. 0)，H-15 (7. 30,t，J= 2. 0)，H-16 (7. 36,t，J=I. 0)， H-19(4.19,d，J= 9. 0)，H-19(4.08,dd，J= 9. 0, 2. 0)，H-20(I.01，s);核磁共振碳譜數(shù)據(jù) 5C(卵m，DMSO-de，125MHz) :200.8(C，1-C)，134.5(CH，2-C)，118.2(CH，3-C)，51.I(CH，4-C)， 41.0 (C，5-C)，31.6(邸2,6-C)，25.9(邸2, 7-C)，74.3 (C，8-C)，39.2 (C，9-C)，43.0(CH，10-C)， 34. 8(細(xì)2, 11-C)，71. 3(CH，12-C)，124. 7(C，13-C)，107. 8(CH，14-C)，142.I(CH，15-C)， 138.4(CH，16-C)，171.5 (C，17-C)，174.I(C，18-C)，69.5(邸2,19-C)，17.I(邸3, 20-C);碳原 子標(biāo)記參見圖1。IR光譜表明該化合物含有徑基（3472cmI)，內(nèi)醋（1762和1734cmI)和巧 喃環(huán)（879cm1)基團(tuán)。"CNMR譜顯示有20個(gè)信號(hào)，含有一個(gè)甲基，四個(gè)亞甲基（包含一個(gè) 含氧亞甲基），八個(gè)次甲基（包含五個(gè)締控碳和一個(gè)含氧碳）和八個(gè)季碳（包含=個(gè)幾基 碳，一個(gè)締控碳和一個(gè)含氧季碳）。根據(jù)電和"CNMR譜數(shù)據(jù)分析可知該化合物含有一個(gè) 12，17-5-內(nèi)醋（5冊(cè).72,5(：71.3，邸-12;5(：171.5，(：-17)和18，19-丫-內(nèi)醋（5(：174.1，C-18 ; 5H4. 19,4. 08，5C69. 5,邸2-19)。此外，季碳處于低場的化學(xué)位移（5C74. 3)，表明 C-8位存在一個(gè)徑基。根據(jù)HMBC譜中H-12 (S冊(cè).72,dd，J= 12. 5, 3. 5)與C-13 (SC124. 7)， C-14( 5C107. 8)和C-16(SC138. 4)的相關(guān)性，可推斷巧喃環(huán)位于C-12(SC71. 3)位上。 HMBC譜中&-6, &-7,H-10, &-11和&-20與C-8的相關(guān)性驗(yàn)證了上述推論，且為a構(gòu)型。 綜合氨譜、碳譜、HMBC譜和NOESY譜，W及文獻(xiàn)關(guān)于相關(guān)類型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合 物如圖1所示，立體構(gòu)型進(jìn)一步通過ECD試驗(yàn)確定，理論值與實(shí)驗(yàn)值基本一致（圖2)。
[00幼實(shí)施例2:化合物（I)藥理作用試驗(yàn)
[0026] 一、材料和儀器
[0027] 人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U251購自于上海麥莎生物科技有限公司。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物裸鼠，購 自南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中屯、，為4~6周齡的雄性BALB/c，nu/nu小鼠，體質(zhì)量12~15邑。 化合物（I)自制（含量98%W上）。5-氣尿喀晚購于南通制藥廠，膜蛋白酶購于美國 Amresco公司，不完全DMEM培養(yǎng)基購于GibeoB化公司，胎牛血清購于杭州四季青公司，十二 烷基硫酸鋼、乙二胺四乙酸、過硫酸胺、甘油、二甲基亞抓購于Sigma公司，蛋白酶K(Merka 公司），P-琉基乙醇（廣州威佳公司），苯甲基橫獻(xiàn)氣（廣州威佳公司），亮抑酶膚（廣州威 佳公司），抑蛋白酶膚（廣州威佳公司），丙締獻(xiàn)胺（上海生工生物工程公司），雙丙締獻(xiàn)胺 (上海生工生物工程公司）。
[002引光學(xué)顯微鏡（OLYMPUSBxsl，日本），Olympus數(shù)碼相機(jī)（OlympusD70,日本），顯微 攝影系統(tǒng)（CoolSNAP-