br>[0051] 所述轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞系均不包括繁殖材料。所述轉(zhuǎn)基因植物理解為不僅包含將所 述化CAT1的編碼基因轉(zhuǎn)化受體植物得到的第一代轉(zhuǎn)基因植物，也包括其子代。對(duì)于轉(zhuǎn)基因 植物，可W在該物種中繁殖該基因，也可用常規(guī)育種技術(shù)將該基因轉(zhuǎn)移進(jìn)入相同物種的其 它品種，特別包括商業(yè)品種中。所述轉(zhuǎn)基因植物包括種子、愈傷組織、完整植株和細(xì)胞。 [005引所述化CAT1，或，所述編碼所述化CAT1的核酸分子，或，含有所述編碼所述化CAT1 的核酸分子的表達(dá)盒、重組載體、重組微生物或轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系，在如下（dl)、（d2)、（d3)或 (d4)中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍：
[0053] (dl)鑒定或輔助鑒定真菌的致病力；
[0054] (d2)制備鑒定或輔助鑒定真菌致病力的產(chǎn)品；
[0055] (d3)篩選或輔助篩選具有不同致病力的真菌；
[0056] (d4)制備篩選或輔助篩選具有不同致病力的真菌的產(chǎn)品。
[0057] 上述任一所述真菌是如下el)-e5)中的任一種：
[005引 el)霜霉目真困；
[0059]e。腐霉科真困；
[0060]e3)疫霉屬真菌；
[0061]e4)辣椒疫霉；
[0062]e5)辣椒疫霉菌株SD33。
[0063] 上述任一所述致病可為致辣椒疫霉病。
[0064] 實(shí)驗(yàn)證明，101和102為化CAT1基因過(guò)表達(dá)轉(zhuǎn)化子，1S1和1S2為化CAT1基因沉 默轉(zhuǎn)化子，CK為轉(zhuǎn)空載體的對(duì)照轉(zhuǎn)化子SPN。將辣椒疫霉菌株SD33、對(duì)照轉(zhuǎn)化子SPN、101、 102、1S1和1S2分別接種辣椒葉片，結(jié)果表明，接種辣椒疫霉菌株SD33、對(duì)照轉(zhuǎn)化子SPN、101 或102的辣椒葉片發(fā)病面積無(wú)顯著差別，而接種1S1或1S2的辣椒葉片發(fā)病面積顯著減小 且壞死程度較輕?？梢姡疌AT1基因的表達(dá)量下降能夠降低了辣椒疫霉的致病性，本發(fā)明 所提供的真菌致病相關(guān)蛋白化CAT1可在調(diào)控辣椒疫霉對(duì)植物的致病力，對(duì)辣椒疫霉病的 防治具有重大價(jià)值。
【附圖說(shuō)明】
[0065] 圖1為真菌致病相關(guān)蛋白化CAT1編碼基因的PCR擴(kuò)增結(jié)果。
[0066] 圖2為載體PHAM34的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0067] 圖3為RT-PCR分析擬沉默轉(zhuǎn)化子的表達(dá)情況。
[0068] 圖4為RT-PCR分析擬過(guò)表達(dá)轉(zhuǎn)化子的表達(dá)情況。
[0069] 圖5為相同溫度下不同菌落的生長(zhǎng)速率分析。
[0070] 圖6為不同溫度下不同菌落的生長(zhǎng)速率分析。
[0071] 圖7為菌絲形態(tài)的觀察。
[0072] 圖8為不同誘導(dǎo)時(shí)間辣椒疫霉抱子囊產(chǎn)生的數(shù)量和形態(tài)。
[0073] 圖9為致病性檢測(cè)結(jié)果。
【具體實(shí)施方式】
[0074] 下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的詳細(xì)描述，給出的實(shí)施例僅為了闡 明本發(fā)明，而不是為了限制本發(fā)明的范圍。
[00巧]下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。
[0076] 下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無(wú)特殊說(shuō)明，均可從商業(yè)途徑得到。W下實(shí) 施例中的定量試驗(yàn)，均設(shè)置Ξ次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果取平均值。
[0077] 下述實(shí)施例中的辣椒疫霉菌株SD33、載體PHAM34、辣椒自交系06221和抑SP化t 輔助載體均記載與如下文獻(xiàn)中：FengBZ,ZhuΧΡ,Ρ?ιLLvRF,StoreyD,TooleyP,Zhang XG(2014)Characterization of necrosis-inducing NLP proteins in Phytophthora capsici.BMC Plant Biol 14:126.在下文中辣椒疫霉菌株SD33簡(jiǎn)稱菌株SD33,辣椒自交 系06221簡(jiǎn)稱辣椒。
[0078] pEASY-T3 clone Vector、TransScript All-in-〇ne First-Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR(One-Step gDNA Removal)和TransStart Tip Green qPCR SuperMix均為北京全式金生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品；DM Ligation Kit Ver. 2. 1、DM Marker DL2000和DM Marker DL5000均為Takara公司產(chǎn)品；卡那霉素化anamycin)、氨 節(jié)青霉素（Ampicillin)、利福平巧ifampicin)、G418、苯胺藍(lán)、臺(tái)吩藍(lán)、IXPBS緩沖液、戊二 醒、邸TA-2化均為北京索萊寶科技有限公司產(chǎn)品；RNeasy Plant Mini Kit為QIAGEN公司 產(chǎn)品；RNase-Free d地2〇和面aseI均為天根生化科技（北京）有限公司產(chǎn)品；RNase清除 劑為北京華越洋生物科技有限公司產(chǎn)品。
[0079] 下述實(shí)施例中設(shè)及的培養(yǎng)基如下：
[0080]LB液體培養(yǎng)基：將酵母提取物5g、膜蛋白腺lOg和氯化鋼5g溶于1L去離子水，pH 自然，高溫高壓滅菌20min。
[0081] LB固體培養(yǎng)基：向LB液體培養(yǎng)基中加入瓊脂，使瓊脂在培養(yǎng)基中濃度為15g/L得 到的培養(yǎng)基。
[0082]V8液體培養(yǎng)基：將170mLV8蔬菜汁（香港金寶湯亞洲有限公司產(chǎn)品）從科尚生物 公司購(gòu)買和1. 6g碳酸巧混勻，2500-4000巧m離屯、8min，取上清，加去離子水定容至1L，高溫 高壓滅菌20min。
[0083]V8固體培養(yǎng)基：向V8液體培養(yǎng)基中加入瓊脂，使瓊脂在培養(yǎng)基中濃度為15g/L得 到的培養(yǎng)基。
[0084]V8固體平板：由V8固體培養(yǎng)基制備的平板。
[00財(cái) G418固體平板：向V8固體培養(yǎng)基中加入G418,使G418在培養(yǎng)基中濃度為50μg/ mL，制備平板。
[0086]PM液體培養(yǎng)基：將甜青豆120g加入1L去離子水中，高溫高壓滅菌20min后用4層 紗布過(guò)濾，棄渣，向上清液中加入91.IgD-Mannitol、2gCaC〇3和Ig化CI2,加熱充分溶解 后，定谷至1L,局溫局壓滅困20min。
[0087] PM固體培養(yǎng)基：向PM液體培養(yǎng)基中加入瓊脂，使瓊脂在培養(yǎng)基中濃度為15g/L得 到的培養(yǎng)基。
[0088]PM固體平板：由PM固體培養(yǎng)基制備的平板。
[0089] NOB液體培養(yǎng)基：向1L去離子水中加入25g燕麥，加熱至充分溶解后用4層紗布 過(guò)濾，棄渣，向上清液中加入馬冊(cè)〇41.0邑、皿2口〇4 l.〇g、KN〇3 3. 0g、M拆〇41.0g、CaCl2 0.1 g、 CaC〇32. 0g、D-山梨醇5. 0g、D-甘露醇5. Og、葡萄糖5. 0g、Vitamin stock 2. 0血和Trace elements 2. OmU加去離子水定容至IL，加熱充分溶解，高溫高壓滅菌20min。
[0090] NOB固體培養(yǎng)基：向NOB液體培養(yǎng)基中加入瓊脂，使瓊脂在培養(yǎng)基中濃度為15g/L 得到的培養(yǎng)基。
[0091]實(shí)施例1、化CAT1基因的功能驗(yàn)證
[0092]-、真菌致病相關(guān)蛋白化CAT1編碼基因的克隆
[0093] 從菌株SD33中分離克隆出真菌致病相關(guān)蛋白化CAT1的編碼基因。具體方法如 下：
[0094] 1、提取菌株SD33的基因組DM
[0095]取菌株SD33接種于V8固體平板，25°C、暗培養(yǎng)4d得到菌落平板，用金屬打孔器沿 菌落外圍將菌落平板打成若干直徑約5mm的菌塊，取菌塊10-15塊，置于20mLV8液體培 養(yǎng)基，25°C、暗靜置培養(yǎng)，5d后收集菌絲（用滅菌濾紙將菌絲粘附的少量液體V8培養(yǎng)基吸 干），然后采用CTAB法提取菌株SD33基因組DNA。
[0096] 2、第一鏈cDNA的合成
[0097]取菌株SD33接種于V8固體平板，25°C、暗培養(yǎng)4d得到菌落平板，用金屬打孔器沿 菌落外圍將菌落平板打成若干直徑約5mm的菌塊，取菌塊10-15塊，置于20mLV8液體培 養(yǎng)基，25Γ、暗靜置培養(yǎng)，5d后收集菌絲（用滅菌濾紙將菌絲粘附的少量液體V8培養(yǎng)基吸 干），然后用RNeasyPlantMiniKit提取的菌株SD33菌絲的總RNA(提取步驟參考試劑盒 說(shuō)明書進(jìn)行），用TransScriptAll-in-OneFirst-StrandcDNASynthesisSuperMixfor qPCR(0ne-St巧曲NARemoval)合成第一鏈cDNA(合成第一鏈cDNA步驟參考試劑盒說(shuō)明書 進(jìn)行），將合成的cDNA命名為菌株SD33CDNA。
[0098] 3、W菌株SD33基因組DNA或菌株SD33cDNA為模板，WCAT1-F: 5'-ATGCTGCACGCGTCCCG