331 [SEQ ID N0:59]或SAdV-A1337[SEQ ID N0:86]的六鄰體蛋白的氨基酸序列。合適地，該六 鄰體蛋白或其獨特片段可用于多種目的。合適的片段的示例包括基于上文和SEQ ID N0:9、 34、59或86中提供的氨基酸編碼，在N端和/或C端截去約50、100、150、200、300、400或500個 氨基酸的六鄰體。其他合適的片段包括較短的內(nèi)部、C端或N端片段。例如，一個合適的片段 是六鄰體蛋白的環(huán)區(qū)域(結(jié)構(gòu)域），命名為DEl和FGl，或其高變區(qū)。這類片段包括跨越猿六鄰 體蛋白的氨基酸殘基約125至443;約138至441的區(qū)域，或較小片段，如跨越約殘基138至殘 基163;約170至約176;約195至約203;約233至約246;約253至約374;約287至約297;和約 404至約430的那些，參考SEQ ID N0:9、34、59或86。其他合適的片段可由本領(lǐng)域技術(shù)人員容 易地鑒定。此外，可對該六鄰體蛋白進(jìn)行修飾以用于本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的多種目的。由于 六鄰體蛋白是腺病毒血清型的決定因素，因此這類人工六鄰體蛋白將導(dǎo)致具有人工血清型 的腺病毒。其他人工衣殼蛋白也可使用本發(fā)明的黑猩猩Ad五鄰體序列和/或纖毛序列和/或 其片段構(gòu)建。
[0057] 在一個實施方式中，可產(chǎn)生具有改變的六鄰體蛋白的腺病毒，所述改變的六鄰體 蛋白使用SAdV-A1302、SAdV-A1320、SAdV-A1331或SAdV-A1337六鄰體蛋白序列。一種合適的 用于改變六鄰體蛋白的方法描述于美國專利5,922,315，其通過引用納入本文。在這種方法 中，腺病毒六鄰體的至少一個環(huán)區(qū)域被另一腺病毒血清型的至少一個環(huán)區(qū)域代替。因此，這 類改變的腺病毒六鄰體蛋白的至少一個環(huán)區(qū)域是SAdV-A1302、SAdV-A1320、SAdV-A1331或 SAdV-A1337的猿Ad六鄰體環(huán)區(qū)域。在一個實施方式中，SAdV-A1302、SAdV-A1320、SAdV-A1331或SAdV-A1337六鄰體蛋白的環(huán)區(qū)域被用于代替來自另一腺病毒血清型的環(huán)區(qū)域。在 另一個實施方式中，SAdV-A1302、SAdV-A1320、SAdV-A1331或SAdV-A1337六鄰體蛋白的環(huán)區(qū) 域用于取代來自另一腺病毒血清型的環(huán)區(qū)域。如本文所述，可以容易地從人和非人血清型 中選擇合適的腺病毒血清型。合適血清型的選擇不是對本發(fā)明的限制。SAdV-A1302、SAdV-A1320、SAdV-A1331或SAdV-A1337六鄰體蛋白序列的其他用途對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言顯而 易見。
[0058] 提供了SAdV-A1302[SEQ ID N0:19]、SAdV-A1320[SEQ ID N0:44]、SAdV-A1331 [SEQ ID N0:69]或SAdV-A1337[SEQ ID N0:96]的纖毛蛋白的氨基酸序列。合適地，該纖毛 蛋白或其獨特片段可用于多種目的。一種合適的片段是纖毛突結(jié)，位于SEQ ID N0:19、44、 69或96中。其他合適的片段的示例包括基于SEQ ID NO: 19、44、69或96中提供的氨基酸編 碼，在N端和/或C端截去約50、100、150或200個氨基酸的纖毛。其他合適的片段還包括內(nèi)部 片段。此外，可使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的多種技術(shù)對纖毛蛋白進(jìn)行修飾。
[0059] SAdV-A1302、SAdV-A1320、SAdV-A1331 或 SAdV-A1337 蛋白的獨特的片段的長度為 至少8個氨基酸。但是，也可方便地采用其他所需長度的片段。此外，本文中提供了可用于導(dǎo) 入以提高SAdV-A1302、SAdV-A1320、SAdV-A1331或SAdV-A1337基因產(chǎn)物的產(chǎn)量和/或表達(dá)的 修飾，例如構(gòu)建融合分子，其中SAdV-A1302、SAdV-A1320、SAdV-A1331或SAdV-A1337基因產(chǎn) 物的全部或片段與融合伙伴(直接或通過接頭)融合。其他合適的修飾包括但不限于截短編 碼區(qū)（如蛋白或酶）以消除通常被切割的前蛋白或蛋白前體并提供成熟的蛋白或酶和/或?qū)?編碼區(qū)進(jìn)行突變以提供可分泌的基因產(chǎn)物。其他修飾對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見 的。還包括了與本文中提供的SAdV-A1302、SAdV-A1320、SAdV-A1331或SAdV-A1337蛋白具有 至少約98%、約99%、約99.5%或約99.9相同性的蛋白。
[0060] 如本文所述，含有 SAdV-A1302、SAdV-A1320、SAdV-A1331 或 SAdV-A1337 的腺病毒衣 殼蛋白的本發(fā)明的載體特別適用于中和抗體削弱基于其他Ad血清型的載體以及其他病毒 載體有效性的應(yīng)用。對于重復(fù)基因治療或?qū)τ诩訌?qiáng)免疫應(yīng)答(疫苗效價)的重新給藥，rAd載 體特別有利。
[0061] 在某些情況下，可能需要使用一種或多種SAdV-A1302、SAdV-A1320、SAdV-A1331或 SAdV-A1337基因產(chǎn)物(例如衣殼蛋白或其片段）以產(chǎn)生抗體。本文所用術(shù)語"抗體"指能夠特 異性結(jié)合表位的免疫球蛋白分子?？贵w可以多種形式存在，包括例如高親和性多克隆抗體、 單克隆抗體、合成抗體、嵌合抗體、重組抗體和人源化抗體。這類抗體來源于免疫球蛋白類 型 IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。
[0062]這類抗體可使用本領(lǐng)域已知多種方法中的任何方法產(chǎn)生。合適的抗體可通過已知 的常規(guī)技術(shù)產(chǎn)生，例如Kohler和Milstein及其多種已知改進(jìn)。類似地，通過對針對這些抗原 開發(fā)的單克隆或多克隆抗體應(yīng)用已知的重組技術(shù)來產(chǎn)生所需高效價抗體[參見例如PCT專 利申請?zhí)朠CT/GB85/00392;英國專利申請公布號GB2188638A; Amit等，1986Science，233: 747-753; Queen等，1989Proc · Nat，1 · Acad · Sci · USA，86:10029-10033; PCT專利申請?zhí)朠CT/ W09007861;和Riechmann等，Nature，332: 323-327( 1988) ;Huse等，1988a Science，246: 1275-1281 ]。或者，可通過操作針對本發(fā)明抗原的動物或人抗體的互補(bǔ)決定區(qū)來生產(chǎn)抗體。 參見例如E.Mark和Padlin，"Humanization of Monoclonal Antibodies(單克隆抗體的人 源化)"，第4章 ，The Handbook of Experimental Pharmacology(《實驗藥理學(xué)手冊》），卷 113，The Pharmacology of Monoclonal Antibodies(《單克隆抗體的藥理學(xué)》），施普林格 弗萊格公司（Springer-Ver lag) (1994 年6 月）；Harl ow等，1999, Using Antibodies:A Laboratory Manual (《使用抗體：實驗室手冊》），冷泉港實驗室出版社（Cold Spring Harbor Laboratory Press)，紐約；Harlow等，1989，Antibodies:A Laboratory Manual (《抗體：實驗室手冊》），冷泉港，紐約；Houston等，1988 ,Proc · Natl .Acad · Sci · USA 85 : 5879-5883;和Bird等，1988，Science 242:423-^437。本發(fā)明還提供了抗獨特型抗體(Ab2) 和抗抗獨特型抗體(Ab3)。參見例如Μ·Wettendorff等，Idiotypic Network and Diseases (《獨特型網(wǎng)絡(luò)和疾病》）中 "Modulation of anti-tumor immunity by anti-idiotypic antibodies(抗獨特型抗體對抗腫瘤免疫的調(diào)節(jié)）"，J.Cerny和J.Hiernaux編， 1990J.Am.Soc.Microbiol.，華盛頓特區(qū)：第203-229頁。這些抗獨特型抗體和抗抗獨特型抗 體使用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的技術(shù)生產(chǎn)。這些抗體可用于多種目的，包括診斷和臨床方法 以及試劑盒。
[0063]在某些情況下，可能需要將可檢測標(biāo)記或標(biāo)簽導(dǎo)入本發(fā)明的SAdV_A1302、SAdV-A1320、SAdV-A1331或SAdV-A1337基因產(chǎn)物、抗體或其他構(gòu)建體上。如本文中所用，可檢測標(biāo) 記是能夠單獨或與另一分子相互作用后提供可檢測信號的分子。最理想地，該標(biāo)記可通過 觀察檢測到，例如通過熒光，用于免疫組化分析或免疫熒光顯微鏡。例如，合適的標(biāo)記包括 熒光素異硫氰酸酯(FITC)、藻紅蛋白（PE)、別藻藍(lán)蛋白（APC)、沉香硫化氫-O(CPO)或串聯(lián)染 料、PE-花青_5(PC5)和PE-德克薩斯紅(E⑶）。所有這些熒光染料都是市售可得的，且其用途 是本領(lǐng)域已知的。其他有用的標(biāo)記包括膠體金標(biāo)記。其他有用的標(biāo)記還包括放射性化合物 或元件。此外，標(biāo)記包括在試驗中操作以釋放比色信號的多種酶系統(tǒng)，例如葡萄糖氧化酶 (其使用葡萄糖作為底物）釋放過氧化物作為產(chǎn)物，所述過氧化物在過氧化物酶和氫供體 (如四甲基聯(lián)苯胺(TMB))存在的情況下生成經(jīng)觀察為藍(lán)色的氧化TMB。其他示例包括辣根過 氧化物酶(HRP )、堿性磷酸酶(AP)和己糖激酶連同葡萄糖-6-磷酸脫氫酶，所述葡萄糖-6-磷 酸脫氫酶與ATP、葡萄糖和NAD+反應(yīng)以生成NADH等產(chǎn)物，所述NADH由340nm波長處吸光度升 尚所檢測。
[0064]其他可以在本文所述方法中采用的標(biāo)記系統(tǒng)可通過其他方式檢測，例如染料包埋 于其中的有色乳膠微粒(邦斯實驗室(Bangs Laboratories)，印第安納州），其在適合的試 驗中可用于取代酶以與靶序列形成偶聯(lián)物以提供可觀察的信號，所述信號指示了所得復(fù)合 物的存在。
[0065] 類似地，將標(biāo)記與所需分子偶聯(lián)或連接的方法是常規(guī)且本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。 描述了已知的標(biāo)記連接方法[參考例如Handbook of Fluorescent probes and Research Chemicals(《熒光探針和研究化學(xué)品手冊》），第6版，R. P.M. Haugland，分子探針有限公司 (Molecular Probes,Inc·)，俄勒閃州尤金，1996;Pierce Catalog and Handbook(《皮爾斯 目錄和手冊》），Life Science and Analytical Research Products(生命科學(xué)和分析研究 產(chǎn)品），皮爾斯化學(xué)公司（Pierce Chemical Company)，伊利諾州洛克福德，1994/1995]。因 此，標(biāo)記和偶聯(lián)方法的選擇并不限制本發(fā)明。
[0066] 可通過任意合適的方法生產(chǎn) SAdV-A1302、SAdV-A1320、SAdV-A1331 或 SAdV-A1337 的序列、蛋白質(zhì)和片段，包括重組生產(chǎn)、化學(xué)合成或其他合成方法。合適的生產(chǎn)技術(shù)是本領(lǐng) 域技術(shù)人員所熟知的。參見例如Sambrook等，Molecular Cloning:A Laboratory Manual (《分子克隆:實驗室手冊》），冷泉港出版社(冷泉港，紐約）。或者，還可通過熟知的固相肽合 成法（Merrifield，J. Am .Chem .Soc，85:2149(1962); Stewart和 Young，Sol id Phase Peptide Synthesis(《固相肽合成》）（弗里曼公司(Freeman)，舊金山，1969)，第27-62頁)來 合成肽。這些及其他適當(dāng)?shù)纳a(chǎn)方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，并且不構(gòu)成對本發(fā)明的限 制。
[0067] 此外，本領(lǐng)域技術(shù)人員會容易地理解，可容易地使SAdV-A1302、SAdV-A1320、SAdV-A1331或SAdV-A1337序列適用于多種病毒和非病毒載體系統(tǒng)，用于體外、離體或體內(nèi)遞送治 療性和免疫原性分子。例如，在一個實施方式中，本文所述猿Ad衣殼蛋白和其他猿腺病毒蛋 白用于基因、蛋白和其他所需診斷、治療或免疫原性分子的非病毒、基于蛋白的遞送。在一 個這類實施方式中，本發(fā)明的蛋白直接或間接地與用于靶向具有腺病毒受體的細(xì)胞的分子 連接。優(yōu)選地，選擇具有針對細(xì)胞表面受體的配體的衣殼蛋白（如六鄰體、五鄰體、纖毛或其 片段）以用于這類靶向。合適的用于遞送的分子選自本文所述治療分子及其基因產(chǎn)物?？墒?用多種接頭，包括脂質(zhì)、聚賴氨酸等。例如，以類似于Medina-Kauwe LK等，Gene Ther · 2001 年5月；8(10) :795-803和Medina-Kauwe LK等，Gene Ther .2001 年 12月；8(23): 1753-1761 中 所述的方式使用猿五鄰體序列生產(chǎn)融合蛋白，從而可以容易地使用猿五鄰體蛋白?；蛘?，猿 Ad蛋白IX的氨基酸序列可用于使載體靶向至細(xì)胞表面受體，如美國專利申請?zhí)?20010047081中所述。合適的配體包括⑶40抗原、含R⑶或含聚賴氨酸的序列等。其他猿Ad蛋 白（例如六鄰體蛋白和/或纖毛蛋白）也可用于這些和類似目的。
[0068]其他 SAdV-A1302、SAdV-A1320、SAdV-A1331 或 SAdV-A1337 腺病毒蛋白也可單獨使 用或與其他腺病毒蛋白聯(lián)用，用于對本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的多種目的。此外，SAdV腺病 毒蛋白的其他用途對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言也是顯而易見的。
[0069] Π ·重組腺病毒載體
[0070] 本文所述組合物包括將異源分子遞送至細(xì)胞的載體，用于治療或疫苗目的。如本 文所用，載體可包括任何遺傳元件，包括但不限于裸DNA、噬菌體、轉(zhuǎn)座子、粘粒、原生質(zhì)體、 質(zhì)粒或病毒。這類載體含有SAdV-A1302、SAdV-A1320、SAdV-A1331或SAdV-A1337的猿腺病毒 DNA和小基因。"小基因"或"表達(dá)盒"指所選異源基因與驅(qū)動基因產(chǎn)物在宿主細(xì)胞中翻譯、轉(zhuǎn) 錄和/或表達(dá)所必需的其它調(diào)控元件的組合。
[0071] 一般地，設(shè)計 SAdV-A1302、SAdV-A1320、SAdV-A1331 或 SAdV-A1337 來源的腺病毒載 體，以使小基因位于所選腺病毒基因的天然存在區(qū)域中含有其它腺病毒序列的核酸分子 內(nèi)。如果需要，可將小基因插入現(xiàn)有基因區(qū)域中，以破壞該區(qū)域的功能。或者，可將小基因插 入部分或完全缺失的腺病毒基因的位點內(nèi)。例如，可使小基因位于可選擇的位點中，如功能 性El缺失位點或功能性E3缺失位點等。術(shù)語"功能性缺失"指通過突變或修飾去除或破壞足 夠量的基因區(qū)域，以使該基因區(qū)域不再能夠通過基因表達(dá)產(chǎn)生功能性產(chǎn)物。如果需要，可去 除整個基因區(qū)域。在本申請的其它地方討論用于破壞或缺失基因的其它合適位點。
[0072] 例如，為了生產(chǎn)用于產(chǎn)生重組病毒的載體，該載體可含有小基因和腺病毒基因組 的5'端或腺病毒基因組的3'端，或同時含有腺病毒基因組的5'和3'端。腺病毒基因組的5' 端含有包裝和復(fù)制所必需的5'順式元件；即5'末端反向重復(fù)（ITR)序列（用作復(fù)制起點）和 天然5'包裝增強(qiáng)子結(jié)構(gòu)域(含有包裝線性Ad基因組所需序列和El啟動子的增強(qiáng)子元件）。腺 病毒基因組的3'端包含包裝和殼體化所必需的3'順式元件(包括ITR)。重組腺病毒適合含 有5'和3'腺病毒順式元件，且小基因位于5'和3'腺病毒序列之間?；赟AdV-A1302、SAdV-A1320、SAdV-A1331或SAdV-A1337的腺病毒載體也可含有其他腺病毒序列。
[0073] 合適地，這些基于 SAdV-A1302、SAdV-A1320、SAdV-A1331 或 SAdV-A1337 的腺病毒載 體含有一種或多種來源于本發(fā)明的腺病毒基因組的腺病毒元件。在一個實施方式中，載體 含有來自 SAdV-A1302、SAdV-A1320、SAdV-A1331 或SAdV-A1337的腺病毒ITR和來自同一腺病 毒血清型的其他腺病毒序列。在另一個實施方式中，載體含有與提供ITR的腺病毒血清型不 同的腺病毒血清型來源的腺病毒序列。
[0074] 如本文所定義，假型腺病毒指其中腺病毒的衣殼蛋白來自與提供ITR的腺病毒不 同的腺病毒。
[0075] 此外，可使用本文所述腺病毒使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的技術(shù)構(gòu)建嵌合或雜交腺 病毒。參見例如美國7,291，498。
[0076] ITR的腺病毒來源的選擇和載體中存在的任何其他腺病毒序列的來源不是對本實 施方式的限制。多種腺病毒毒株可從弗吉尼亞州瑪納薩斯的美國典型培養(yǎng)物保藏中心獲 得，或者通過請求從多種商業(yè)和研究所來源獲得。此外，許多這類毒株的序列可從多個數(shù)據(jù) 庫獲得，例如PubMed和GenBank。由其他猿或由人腺病毒制備的同源腺病毒載體描述于已公 開的文獻(xiàn)中[參加例如美國專利號5，240，846]。許多腺病毒類型的DNA序列可從GenBank獲 得，包括類型Ad5[GenBank登錄號M73370]。腺病毒序列可獲自任何已知的腺病毒血清型，如 血清型2、3、4、7、12和40，且還包括任何目前已鑒定到的人類型。類似地，已知感染非人動物 (例如猿)的腺病毒也可用于本發(fā)明的載體構(gòu)建體。參見例如，美國專利號6，083，716。
[0077] 如上所述獲得用于構(gòu)建本文所述載體的病毒序列、輔助病毒(如果需要)和重組病 毒顆粒，以及其它載體組分和序列。本發(fā)明的SAdV-A1302、SAdV-A1320、SAdV-A1331或SAdV-A1337猿腺病毒的DNA序列用于構(gòu)建載體和這些載體的制備過程中有用的細(xì)胞系。
[0078] 可利用標(biāo)準(zhǔn)的分子生物學(xué)技術(shù)產(chǎn)生形成本發(fā)明載體的核酸序列修飾，包括序列缺 失、插入和其它突變，且這些內(nèi)容在本實施方式的范圍內(nèi)。
[0079] A. "小基因"
[0080]根據(jù)本文提供的教導(dǎo)，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠了解用于選擇轉(zhuǎn)基因、克隆和構(gòu)建"小 基因"并將其插入病毒載體的方法。
[0081 ] 1.轉(zhuǎn)基因
[0082] 轉(zhuǎn)基因是編碼感興趣的多肽、蛋白質(zhì)或其他產(chǎn)物并與其側(cè)接的載體序列異源的核 酸序列。該核酸編碼序列以允許轉(zhuǎn)基因在宿主細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄、翻譯和/或表達(dá)的方式可操作地 連接至調(diào)節(jié)組分。
[0083] 轉(zhuǎn)基因序列的組成取決于所得到的載體的用途。例如：一類轉(zhuǎn)基因序列包含報告 序列，該序列在表達(dá)后產(chǎn)生可檢測的信號。這類報告序列包括但不限于編碼以下物質(zhì)的DNA 序列:β-內(nèi)酰胺酶、β-半乳糖苷酶(LacZ)、堿性磷酸酶、胸腺激酶、綠色熒光蛋白（GFP)、氯霉 素乙酰轉(zhuǎn)移酶(CAT)、螢光素酶、膜結(jié)合蛋白（包括如CD2、CD4、CD8)、流感血凝素蛋白和本領(lǐng) 域熟知的存在針對其的高親和力抗體或可通過常規(guī)方法產(chǎn)生所述抗體的其他物質(zhì)，以及含 有膜結(jié)合蛋白的融合蛋白，該膜結(jié)合蛋白適當(dāng)?shù)嘏c血凝素或Myc等物質(zhì)的抗原標(biāo)簽結(jié)構(gòu)域 融合。當(dāng)這些編碼序列與驅(qū)動其表達(dá)的調(diào)節(jié)元件相連接時，可提供由常規(guī)方法檢測的信號， 所述常規(guī)方法包括酶法、放射顯影法、比色法、熒光法或其他光譜測定、熒光激活細(xì)胞分選 測定與免疫測定，包括酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)、放射性免疫測定(RIA)和免疫組織化學(xué)。 例如，當(dāng)標(biāo)記序列是LacZ基因時，通過測定β-半乳糖苷酶的活性來檢測攜帶信號的載體是 否存在。當(dāng)轉(zhuǎn)基因是GFP或螢光素酶時，攜帶信號的載體可用光度計通過顏色或光的產(chǎn)生來 觀測。
[0084] 在一個實施方式中，轉(zhuǎn)基因是編碼具有生物和醫(yī)藥用途的產(chǎn)物的非標(biāo)記物序列， 如蛋白質(zhì)、肽、RNA、酶或催化RNA。所需RNA分子包括tRNA、dsRNA、核糖體RNA、催化RNA和反義 RNA。有用的RNA序列的一個示例是消除經(jīng)處理的動物中靶核酸序列表達(dá)的序列。
[0085] 可將轉(zhuǎn)基因作為癌癥治療劑或疫苗用于治療例如遺傳缺陷，以誘導(dǎo)免疫應(yīng)答，和/ 或用于預(yù)防性疫苗目的。如本文中所用，誘導(dǎo)免疫應(yīng)答指分子(如基因產(chǎn)物)誘導(dǎo)針對該分 子的T細(xì)胞和/或體液免疫應(yīng)答的能力。本發(fā)明還包括使用多種轉(zhuǎn)基因，從而例如校正或緩 解多亞基蛋白導(dǎo)致的病癥。在某些情況下，可采用不同的轉(zhuǎn)基因編碼一個蛋白質(zhì)的各個亞 基，或編碼不同的肽或蛋白質(zhì)。當(dāng)編碼蛋白質(zhì)亞基的DNA很大時該方法尤其適合，例如對于 免疫球蛋白、血小板衍生的生長因子或抗肌萎縮蛋白。為使細(xì)胞產(chǎn)生多亞基蛋白質(zhì)，用各自 含有各不同亞基的重組病毒感染細(xì)胞?；蛘?，蛋白質(zhì)的不同亞基可由同一轉(zhuǎn)基因編碼。在這 種情況下，單個轉(zhuǎn)基因包含編碼各亞基的DNA，而各亞基的DNA由內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點 (IRES)隔開。當(dāng)編碼每個亞基的DNA較小時，例如編碼亞基的DNA與IRES的總體積小于5千堿 基時，這尤其適合。作為IRES的替代，可用編碼在翻譯后階段自我切割的2A肽的序列將DNA 隔開。參見例如，]?丄.0〇11116117等，1.6611.￥化〇1.，78(第一部分）：13-21(1997年1月） ； Furler,S.等，Gene Ther. ,8(11):864-873(2001 年6月）；Klump H.等，Gene Ther. ,8(10): 811-817(2001年5月）。該2A肽明顯小于IRES，從而當(dāng)空間成為制約因素時其非常適用。然 而，選定的轉(zhuǎn)基因可編碼任何生物活性產(chǎn)物或其他產(chǎn)物，例如研究所需的產(chǎn)物。
[0086] 本領(lǐng)域技術(shù)人員可容易地選擇適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)基因。轉(zhuǎn)基因的選擇不被視為是對該實施 方式的限制。
[0087] 2.調(diào)節(jié)元件
[0088]除了以上鑒定到的小基