新化合物及其制備方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及中藥制品技術領域，具體涉及一種從中藥莪術塊莖中提取得到的新化 合物。
【背景技術】
[0002] 中藥莪術是姜科姜黃屬植物的根莖，莪術有行氣破血、消積止痛的功效?，F(xiàn)代藥理 學研究表明莪術揮發(fā)油有抗腫瘤、抗菌作用；莪術醇有抑瘤作用、抗早孕作用。另外莪術對 心血管、胃腸平滑肌、急性腎功能衰竭作用顯著，還具有保肝作用。
[0003]目前對中藥莪術的的應用主要是以其揮發(fā)油注射液和復方莪術油用于抗癌作用， 制成抗癌藥物，相對比較局限。另外，莪術揮發(fā)油成分復雜，不同成分的抗癌作用也存在很 大差別，缺乏必要的藥效物質基礎和藥效研究，缺乏合理的質量控制標準，難以確保臨床用 藥的有效性、安全性、可持續(xù)性?？梢姡瑢g的化學成分進行進一步提取和研究非常有必 要。

【發(fā)明內容】

[0004] 本發(fā)明基于傳統(tǒng)中藥莪術，提供一種從中藥莪術中分離提取獲得的新的酮類單體 化合物，該新化合物被證明具有抗肝癌、抗肺癌生物活性，可用于制備相關藥物制劑。
[0005] 該新化合物的化學結構式如下：
[0006]
[0007] 該新化合物分子式為C15H2Q03,分子量為248,中文名稱為8-羥基-吉馬-1，7-二 烯-5酮-8, 12-內酯。
[0008] 本發(fā)明進一步提供上述從莪術中分離純化上述新化合物的方法，包括以下步驟：
[0009] (1)以莪術塊莖為原料，磨成粉末狀后用乙酸乙酯浸泡或者回流提取，最終所得 濾液進行旋轉蒸發(fā)至干，得粗提物，粗提物溶于正己烷-乙醇二元混合溶劑中，配成濃度為 50-500mg/mL的提取液；
[0010] (2)對提取液進行一維液相色譜分離：采用的色譜柱為正相硅膠色譜柱，采用的 流動相為A相正己烷、B相乙醇的二元流動相，進樣量為100mL/針，流動相流速為600mL/ min，洗脫方式為B相濃度0-50 %梯度洗脫30min，檢測器為紫外檢測器、檢測波長210nm，根 據紫外吸收光譜收集15. 5-17分鐘洗脫液作為目的組分，旋轉蒸發(fā)濃縮至干，得到一維液 相組分；
[0011] (3)使用正己烷-乙醇二元混合溶劑溶解一維液相組分，溶解至濃度為100mg/ mL ；
[0012] (4)進行二維液相色譜分離：采用的色譜柱為Acchrom X-Amide色譜柱，采用的流 動相為A相正己烷、B相乙醇的二元流動相，進樣量為lmL/針，流動相流速為14mL/min，洗 脫方式為B相濃度0-30 %梯度洗脫30min，檢測器為紫外檢測器、檢測波長210nm，根據紫外 吸收光譜收集17-18分鐘洗脫液作為目的組分，旋轉蒸發(fā)濃縮至干，得到目的化合物，純度 達 99%。
[0013] 作為優(yōu)選，所述步驟（1)、（3)中正己烷-乙醇二元混合溶劑中正己烷體積分數為 70%〇
[0014] 作為優(yōu)選，所述步驟（2)中正相硅膠色譜柱的尺寸為直徑150mm、長度250mm，其中 填料粒徑為10 μ m，使用時柱溫為室溫。
[0015] 作為優(yōu)選，所述步驟（4)中Acchrom X-Amide色譜柱的尺寸為直徑20mm、長度 250_，其中填料粒徑為10 μ m，使用時柱溫為室溫。
[0016] 本發(fā)明采用二維液相色譜技術進行從莪術中分離純化活性成分：
[0017] 首先，在一維分離的條件選擇上：多次試驗結果顯示，正相硅膠色譜柱對所提物質 分離效果較好，而通過考察不同流動相組成和不同洗脫方式、流速及進樣量后，結果顯示采 用本發(fā)明乙醇-正己烷0% -50%梯度洗脫分離效果最佳，且重復性良好，得到的一維液相 組分中目的組分純度高，峰容量較大，與其他峰之間分離良好，非常有利于分離操作和后續(xù) 進一步提純；
[0018] 其次，在二維分離的條件選擇上：使用Acchrom X-Amide色譜柱，在洗脫條件選擇 為B相濃度0-30 %梯度洗脫時能將少部分極性接近的雜質分離開，得到純度高達99 %的目 的單體化合物。
[0019] 在液相色譜的溶劑選擇上，一維色譜分離、二維色譜分離以及中間提取物的溶解， 均采用正己烷、乙醇兩種溶劑混合液，可以通過改變乙醇的比例來調節(jié)有效成分的溶解能 力和流動相的洗脫能力，且整個色譜分離僅使用兩種溶劑，有利于提取溶劑的回收再利用。
[0020] 與現(xiàn)有技術中相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點和顯著效果：
[0021] (1)本發(fā)明提供了一種未報道過的新化合物；
[0022] (2)提取方法工藝簡單，成本低，試劑耗費量小，制備量大，穩(wěn)定可控，重復性好，批 次間一致性高，經工藝放大后可以運用于工業(yè)生產；
[0023] (3)得到的單體化合物純度高，穩(wěn)定性好，且具備良好的生物活性，通過細胞在線 實時監(jiān)測的方法觀測其在體外的抗腫瘤作用，發(fā)現(xiàn)其對肺癌A549細胞和肝癌Η印-G2細胞 具有抑制作用，具有抗腫瘤藥物開發(fā)潛力，拓寬了抗腫瘤藥物的原料來源；
[0024] (4)由于產物為高純度且具生物活性的單體化合物，質量品質和用藥更為可控，能 夠確保臨床用藥的有效性、安全性、可持續(xù)性；
[0025] (5)本發(fā)明首次在中藥莪術中發(fā)現(xiàn)了未曾報道過的新化合物，拓展了中藥莪術的 有效成分種類，拓展了莪術的研究領域和開發(fā)價值。
【附圖說明】
[0026] 圖1所示的是本發(fā)明實施例1莪術中抗癌活性單體提取的一維色譜圖；
[0027] 圖2所示的是本發(fā)明實施例1莪術中抗癌活性單體提取的二維色譜圖；
[0028] 圖3所示的是本發(fā)明實施例1得到的目的組分的分析型高效液相色譜圖；
[0029] 圖4所示的是本發(fā)明實施例1得到的目的組分的CNMR譜（CDC13, 400MHz)的核磁 共振數據圖譜；
[0030] 圖5所示的是本發(fā)明實施例1得到的目的組分的HNMR譜（CDC13, 400MHz)的核磁 共振數據圖譜；
[0031] 圖6所示的是本發(fā)明得到目的化合物對肺癌A549細胞的抑制作用；
[0032] 圖7所示的是本發(fā)明得到目的化合物對肝癌Hep_G2細胞的抑制作用。
【具體實施方式】
[0033] 以下結合實施例對本發(fā)明作進一步具體描述。應該指出，以下具體說明都是例示 性的，旨在對本發(fā)明提供進一步的說明。除非另有說明，本發(fā)明使用的所有科學和技術術語 具有與本發(fā)明所屬技術領域人員通常理解的相同含義。
[0034] 1.原料、材料：
[0035] 莪術采摘自河北并經過鑒定；人肺癌A549細胞由中國醫(yī)學科學院血液病醫(yī)院提 供；人肝腫瘤Hep-G2細胞由中國醫(yī)學科學院血液病醫(yī)院提供。
[0036] 2.試劑：
[0037] 無水乙醇購自天津市北方天醫(yī)化學試劑廠；色譜級正己烷購自Honeywell公司； F-12K 培養(yǎng)基購自 Life Technologies Corporation ;MEM 培養(yǎng)基購自 Life Technologies Corporation ;DMS0購自天津康科德科技有限公司。
[0038] 3.儀器設備：
[0039] 超微粉碎機購自山東三清不銹鋼設備有限公司；臺式冷凍離心機購自Thermo公 司；30升中藥提取罐購自上海順儀實驗設備有限公司；恒溫鼓風干燥箱購自上海一恒科學 儀器有限公司；旋轉蒸發(fā)儀上海亞容生化儀器廠；色譜柱購自博納艾吉爾有限公司；制備 型高效液相色譜儀購自江蘇漢邦科技有限公司；iCELLigence實時無標記細胞功能分析儀 購自艾森生物（杭州）有限公司。
[0040] 實施例1 :
[0041] 以莪術為原料，磨成粉末狀后稱取4kg，溶于25L 98 %的乙醇溶液，進行回流提 取，最終所得濾液進行旋轉蒸發(fā)至干，然后溶于正己烷體積分數為70 %的正己烷-乙醇二 元混合溶劑中，配制成濃度為100mg/mL的提取液，過0. 45 μ m微孔濾膜，進行一維液相色譜 制備。
[0042] 一維液相色譜采用Silica 150X250mm，10 μπι，1:00 A，流動相采用有機相的混 合，其中有機相Α相是正己烷、Β相是乙醇，梯度洗脫方式：Β相濃度0-50%梯度洗脫