L無菌超純水回溶，電泳檢測，-20°C保存。
[001 引（2) PCR 擴增 本實施例同時檢測 rs699、rsl815739、rsl6892496、rs4253778、rs2010963、rs731236 和rsl800795。每個SNP的檢測需要一對上下游引物、兩條多態(tài)引物共4條PCR引物，共需 要28條引物。每個SNP的檢測需要做兩管PCR擴增，為防止出現假陽性之類的反應，衡量 PCR是否成功，加設一管陰性對照組，共做15管PCR，所述陰性對照組基因組模板及反應體 系是一樣的，但沒有引物存在。
[0017] 根據不同的檢測位點，用相應的引物按如下比例分別配制PCR反應體系： 2. 5y IIOXPCR緩沖液，I dNTPs，0. 5y I引物組，熱啟動Taq酶0. 15y 1，基因組模板 80mg，添加超純水至總體積為25]i 1。
[0018] 將裝有反應溶液的化pendorf試管放入ABI 9700 PCR儀中，設置反應條件如下： 預變性951：3111111;熱循環(huán)941：3〇3,6〇1：3〇3,721：3〇3,35個循環(huán)；延伸721：3111111。反應 結束后，取出試管。
[001引由于15管PCR擴增反應是在同一臺PCR儀上同步進行的，為了實現檢測的高 效性、特異性，要求28條PCR引物的Tm值相近，為此需要先進行大量的DNA序列軟件分析 來設計PCR引物，并通過大量的實驗來進行Tm值的優(yōu)化并確定設計的合理性，本試劑盒各 基因 SNP多態(tài)性的檢測是既相對獨立又相互聯系的，不可分割。
[0020] (3 )瓊脂糖凝膠電泳檢測 將擴增后的產物進行瓊脂糖電泳檢測，過程如下；3g瓊脂糖，加入IOOmL去離子水，微 波爐加熱Imin,冷卻到6(TC時加入5 U L Goldview染色液，制成3%的瓊脂糖凝膠。PCR產 物10 U L與6 X T邸緩沖液0. 8化混合上樣，電壓IOOV電泳15min。紫外燈下讀取結果并 拍照，所得瓊脂糖電泳檢測圖如圖1所示。
[0021] 檢測得到7個基因分型分析結果如下：
根據W上分型結果，該測試者具有較好的爆發(fā)力水平，適合速度、力量型的練習項目。 通過鍛煉可W增加較多的瘦體重，骨骼肌比例更高。體內的快肌纖維較平均高出許多，運動 恢復期較短。但同時，在日常運動中，應當密切關注高血壓、糖原和膜島素水平。
[0022] W上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例，并不用W限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和 原則之內，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發(fā)明的保護范圍之內。
【主權項】
1.爆發(fā)力水平基因檢測試劑盒，包括盒體及盒體內單獨存放的試劑，其特征在于：存 放的試劑包括： (1)針對7個基因 SNP多態(tài)位點的PCR反應引物組（以下引物序列方向均為5'端至3' 立而）： 針對SNPrs699的引物組： 1 CTGGCTGCTCCCTGAC 2 GTCCACACTGGCTCCCA 3 GTTTGTGCAGGGCCTG 4 CAAGGGTGGTCACCAG 針對SNP rsl815739的引物組： 1 CTGCCCGAGGCTGACC 2 GGCACCTCGCTCTCA 3 GCACACTGCTGCCCTTTC 4 CACATCTGAAGATGGAC 針對SNP rs 16892496的引物組： 1 GAAGAGCAAGCCCCCA 2 GACTTGTATCCCACG 3 AATTCAATAAACATGTATTG 4 GAATGGAAACTCCAAG 針對SNP rs4253778的引物組： 1 CTTGATATCTAGTTTC 2 GAAATGAAGCTTTTGAATCC 3 TCCCCACTCTGGGTCTCCT 4 TATTCATAGACTAGG 針對SNP rs2010963的引物組： 1 GTGCGAGCAGCGAAAGC 2 GCACTTTGCCCCTGTCC 3 AGCGGACTCACCGGCCAG 4 GGGCTCACGCCGCGCTC 針對SNP rs731236的引物組： 1 CAGGACGCCGCGCTGATC 2 GGTCCTGGATGGCCTCA 3 GCCGTTGAGTGTCTGTG 4 AGGCTGTCCTAGTCAG 針對SNP rs 1800795的引物組 1 CCTAGTTGTGTCTTGCC 2 GACGTCCTTTAGCATC 3 CATAGCTTTAGCTTA 4 GCAGAATGAGCCTCAG (2) PCR擴增試劑； (3) 瓊脂糖凝膠電泳分析試劑。2. 根據權利要求1所述的爆發(fā)力水平基因檢測試劑盒，其特征在于：所述引物用量均 為 0· 5-1. Ομ 1〇3. 根據權利要求1所述的爆發(fā)力水平基因檢測試劑盒，其特征在于：所述PCR擴增試 劑包括：10XPCR緩沖液，dNTPs，熱啟動Taq酶，基因組模板。4. 根據權利要求3所述的爆發(fā)力水平基因檢測試劑盒，其特征在于：所述PCR緩沖液 包含：100mM Tris-HCl pH8.3,500mM KCl，15mM MgCl2。5. 根據權利要求3所述的爆發(fā)力水平基因檢測試劑盒，其特征在于：所述PCR擴增 試劑用量為：l〇XPCR緩沖液2. 5μ 1，dNTPs2l·! 1，熱啟動Taq酶0. 1-0. 2μ 1，基因組模板 50-100ng〇6. 根據權利要求1所述的爆發(fā)力水平基因檢測試劑盒，其特征在于：所述瓊脂糖凝膠 電泳分析試劑包括：瓊脂糖、TAE緩沖液、DNA分子量標準、DNA無毒染料和DNA上樣緩沖 液。7. 根據權利要求6所述的爆發(fā)力水平基因檢測試劑盒，其特征在于：所述DNA無毒染 料優(yōu)選Biotium Gelred無毒染料。
【專利摘要】本發(fā)明提供了人體爆發(fā)力水平的基因檢測試劑盒，該試劑盒包括盒體及盒體內單獨存放的試劑，試劑包括：（1）針對7個基因SNP多態(tài)位點的PCR反應引物組（2）PCR擴增試劑（3）瓊脂糖凝膠電泳分析試劑。本發(fā)明通過PCR引物的設計使多個PCR擴增反應可在同一臺PCR儀上同步進行，對受測者的相關基因進行檢測，并實現檢測的高效性、特異性，分析得到爆發(fā)力水平的基因基礎，評估個體是否適合從事與爆發(fā)力相關的體育項目，為專業(yè)體育機構和教練提供選拔運動員的科學依據。對于大眾健身鍛煉來講，為個體提供個人潛在的運動能力評估，幫助個體更好的選擇適合自身體質條件的運動項目，從而更有效合理的發(fā)揮自身優(yōu)勢，達到鍛煉目的。
【IPC分類】C12Q1/68
【公開號】CN105603054
【申請?zhí)枴緾N201410651969
【發(fā)明人】李則軒, 邱嘉銘, 張舒, 朱軼凡, 別茜, 張靜靜, 范家成, 盧駿
【申請人】武漢白原科技有限公司, 湖北省體育科學研究所
【公開日】2016年5月25日
【申請日】2014年11月17日