0 V下反應(yīng)h，得到含有糖類的水解混合物；
[0045]b.發(fā)酵:將步驟b中的水解混合物調(diào)節(jié)總糖濃度為30g/L，用檸檬酸或氨水調(diào)節(jié)pH為5.5后接種酵母菌株，在溫度為32°C下發(fā)酵35h，得到含有乙醇的發(fā)酵混合物；
[0046]c.提取:將含有乙醇的發(fā)酵混合物調(diào)節(jié)乙醇體積分數(shù)為40%攪拌提取40min后過濾收集提取液，將提取液回收乙醇后得到含有紫杉醇、三尖杉寧堿和1-DABm的浸膏;濾渣作為廢渣處理；回收的乙醇重復(fù)利用，浸膏用傳統(tǒng)純化方法純化即可得到紫杉醇、三尖杉寧堿和I O-DABm產(chǎn)品。
[0047]本實施例中，紫杉醇的提取率99.8%以上，三尖杉寧堿提取率99.7%以上，10-DABm提取率99.8 %以上，浸膏中紫杉醇含量5 %，三尖杉寧堿含量2 %，1-DABm含量3 %。
[0048]實施例四
[0049]本實施例的利用紅豆杉聯(lián)產(chǎn)紫杉烷類有效成分和乙醇的方法，包括以下步驟:
[0050]a.酶水解:將曼地亞紅豆杉枝葉進行破碎，向破碎的紅豆杉枝葉中加入pH為4.0檸檬酸鈉緩沖溶液，固液比為1:10，然后添加紅豆杉總量0.01%的纖維素酶和紅豆杉總量0.5 %的半纖維素酶，置于38 °C下反應(yīng)50h，得到含有糖類的水解混合物；
[0051 ] b.發(fā)酵:將步驟b中的水解混合物調(diào)節(jié)總糖濃度為50g/L，用檸檬酸或氨水調(diào)節(jié)pH為4.5后接種酵母菌株，在溫度為30°C下發(fā)酵20h，得到含有乙醇的發(fā)酵混合物；
[0052]c.提取:將含有乙醇的發(fā)酵混合物調(diào)節(jié)乙醇體積分數(shù)為60%攪拌提取20min后過濾收集提取液，將提取液回收乙醇后得到含有紫杉醇、三尖杉寧堿和1-DABm的浸膏;濾渣作為廢渣處理；回收的乙醇重復(fù)利用，浸膏用傳統(tǒng)純化方法純化即可得到紫杉醇、三尖杉寧堿和I O-DABm產(chǎn)品。
[0053]本實施例中，紫杉醇的提取率99.9%以上，三尖杉寧堿提取率99.95%以上，10-DABm提取率99.7%以上，浸膏中紫杉醇含量5%，三尖杉寧堿含量I %，1-DABm含量2%。
[0054]實施例五
[0055]本實施例的利用紅豆杉聯(lián)產(chǎn)紫杉烷類有效成分和乙醇的方法，包括以下步驟:
[0050]a.酶水解:將曼地亞紅豆杉枝葉進行破碎，向破碎的紅豆杉枝葉中加入pH為5.5梓檬酸鈉緩沖溶液，固液比為1:4，然后添加紅豆杉總量0.018%的纖維素酶和紅豆杉總量0.35 %的半纖維素酶，置于35 °C下反應(yīng)20h，得到含有糖類的水解混合物；
[0057]b.發(fā)酵:將步驟b中的水解混合物調(diào)節(jié)總糖濃度為45g/L，用檸檬酸或氨水調(diào)節(jié)pH為4.5后接種酵母菌株，在溫度為35°C下發(fā)酵50h，得到含有乙醇的發(fā)酵混合物；
[0058]c.提取:將含有乙醇的發(fā)酵混合物調(diào)節(jié)乙醇體積分數(shù)為60%攪拌提取60min后過濾收集提取液，將提取液回收乙醇后得到含有紫杉醇、三尖杉寧堿和1-DABm的浸膏;濾渣作為廢渣處理；回收的乙醇重復(fù)利用，浸膏用傳統(tǒng)純化方法純化即可得到紫杉醇、三尖杉寧堿和I O-DABm產(chǎn)品。
[0059]本實施例中，紫杉醇的提取率99.75%以上，三尖杉寧堿提取率99.69%以上，10-DABm提取率99.96%以上，浸膏中紫杉醇含量4.5%,三尖杉寧堿含量3%，1-DABm含量
[0060]實施例六
[0061]本實施例的利用紅豆杉聯(lián)產(chǎn)紫杉烷類有效成分和乙醇的方法，包括以下步驟:
[0062]a.酶水解:將曼地亞紅豆杉枝葉進行破碎，向破碎的紅豆杉枝葉中加入pH為4.5梓檬酸鈉緩沖溶液，固液比為1: 2，然后添加紅豆杉總量0.01%的纖維素酶和紅豆杉總量
0.5 %的半纖維素酶，置于45 °C下反應(yīng)1h，得到含有糖類的水解混合物；
[0063]b.發(fā)酵:將步驟b中的水解混合物調(diào)節(jié)總糖濃度為50g/L，用檸檬酸或氨水調(diào)節(jié)pH為4.5后接種酵母菌株，在溫度為33°C下發(fā)酵48h，得到含有乙醇的發(fā)酵混合物；
[0064]c.提取:將含有乙醇的發(fā)酵混合物調(diào)節(jié)乙醇體積分數(shù)為25%攪拌提取55min后過濾收集提取液，將提取液回收乙醇后得到含有紫杉醇、三尖杉寧堿和1-DABm的浸膏;濾渣作為廢渣處理；回收的乙醇重復(fù)利用，浸膏用傳統(tǒng)純化方法純化即可得到紫杉醇、三尖杉寧堿和I O-DABm產(chǎn)品。
[0065]本實施例中，紫杉醇的提取率99.4%以上，三尖杉寧堿提取率99.56%以上，10-DABm提取率99.78 %以上，浸膏中紫杉醇含量3.8%,三尖杉寧堿含量2.43%, 1-DABm含量1.96% ο
[0066]實施例七
[0067]本實施例的利用紅豆杉聯(lián)產(chǎn)紫杉烷類有效成分和乙醇的方法，包括以下步驟:
[0068]a.酶水解:將曼地亞紅豆杉枝葉進行破碎，向破碎的紅豆杉枝葉中加入pH為5檸檬酸鈉緩沖溶液，固液比為1:8，然后添加紅豆杉總量0.4%的纖維素酶和紅豆杉總量0.35%的半纖維素酶，置于35°C下反應(yīng)12h，得到含有糖類的水解混合物；
[0069]b.發(fā)酵:將步驟b中的水解混合物調(diào)節(jié)總糖濃度為10g/L，用檸檬酸或氨水調(diào)節(jié)pH為4.5后接種酵母菌株，在溫度為32°C下發(fā)酵42h，得到含有乙醇的發(fā)酵混合物；
[0070]c.提取:將含有乙醇的發(fā)酵混合物調(diào)節(jié)乙醇體積分數(shù)為35%攪拌提取44min后過濾收集提取液，將提取液回收乙醇后得到含有紫杉醇、三尖杉寧堿和1-DABm的浸膏;濾渣作為廢渣處理；回收的乙醇重復(fù)利用，浸膏用傳統(tǒng)純化方法純化即可得到紫杉醇、三尖杉寧堿和I O-DABm產(chǎn)品。
[0071 ] 本實施例中，紫杉醇的提取率99%以上，三尖杉寧堿提取率99%以上，1-DABm提取率99%以上，浸膏中紫杉醇含量I %，三尖杉寧堿含量I %，1-DABm含量2 %。
[0072]實施例八
[0073]本實施例的利用紅豆杉聯(lián)產(chǎn)紫杉烷類有效成分和乙醇的方法，包括以下步驟:
[0074]a.酶水解:將曼地亞紅豆杉枝葉進行破碎，向破碎的紅豆杉枝葉中加入pH為5檸檬酸鈉緩沖溶液，固液比為I: 9，然后添加紅豆杉總量0.28%的纖維素酶和紅豆杉總量0.28%的半纖維素酶，置于45 °C下反應(yīng)1h，得到含有糖類的水解混合物；
[0075]b.發(fā)酵:將步驟b中的水解混合物調(diào)節(jié)總糖濃度為5g/L，用檸檬酸或氨水調(diào)節(jié)pH為6.0后接種酵母菌株，在溫度為35°C下發(fā)酵20h，得到含有乙醇的發(fā)酵混合物；
[0076]c.提取:將含有乙醇的發(fā)酵混合物調(diào)節(jié)乙醇體積分數(shù)為20%攪拌提取60min后過濾收集提取液，將提取液回收乙醇后得到含有紫杉醇、三尖杉寧堿和1-DABm的浸膏;濾渣作為廢渣處理；回收的乙醇重復(fù)利用，浸膏用傳統(tǒng)純化方法純化即可得到紫杉醇、三尖杉寧堿和I O-DABm產(chǎn)品。
[0077]本實施例中，紫杉醇的提取率99.9%以上，三尖杉寧堿提取率99.86%以上，10-DABm提取率99.96 %以上，浸膏中紫杉醇含量5 %，三尖杉寧堿含量3 %，1-DABm含量2 %。
[0078]最后說明的是，以上實施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡管參照較佳實施例對本發(fā)明進行了詳細說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對本發(fā)明的技術(shù)方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的宗旨和范圍，其均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍當(dāng)中。
【主權(quán)項】
1.一種利用紅豆杉聯(lián)產(chǎn)紫杉烷類有效成分和乙醇的方法，其特征在于:包括以下步驟:將紅豆杉在弱酸性條件下酶解纖維素和半纖維素后發(fā)酵產(chǎn)生乙醇，然后利用產(chǎn)生的乙醇提取紫杉烷類有效成分。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用紅豆杉聯(lián)產(chǎn)紫杉烷類有效成分和乙醇的方法，其特征在于:包括以下步驟: a.酶水解:向破碎的紅豆杉枝葉中加入pH為4.0?5.5檸檬酸鈉緩沖溶液后添加纖維素酶和半纖維素酶，置于35-45°C下反應(yīng)10?50h，得到含有糖類的水解混合物； b.發(fā)酵:將步驟b中的水解混合物在pH為4.5?6.0，溫度為30?35°C下發(fā)酵20?50h，得到含有乙醇的發(fā)酵混合物； c.提取:將含有乙醇的發(fā)酵混合物攪拌提取20?60min收集提取液，將提取液回收乙醇后得到含有紫杉醇、三尖杉寧堿和1-DABm的浸膏。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的利用紅豆杉聯(lián)產(chǎn)紫杉烷類有效成分和乙醇的方法，其特征在于:步驟a中，所述紅豆杉枝葉與檸檬酸鈉緩沖溶液的質(zhì)量比為1:2?10;所述纖維素酶為紅豆杉總量的0.01?0.5%，半纖維素酶為紅豆杉總量的0.01?0.5%。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的利用紅豆杉聯(lián)產(chǎn)紫杉烷類有效成分和乙醇的方法，其特征在于:步驟a中，所述紅豆杉枝葉與檸檬酸鈉緩沖溶液的質(zhì)量比為1:6;所述纖維素酶為紅豆杉總量的0.15%，半纖維素酶為紅豆杉總量的0.1 %。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的利用紅豆杉聯(lián)產(chǎn)紫杉烷類有效成分和乙醇的方法，其特征在于:步驟a中，所述檸檬酸鈉緩沖溶液pH為5;在40 0C下反應(yīng)35h。6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的利用紅豆杉聯(lián)產(chǎn)紫杉烷類有效成分和乙醇的方法，其特征在于:步驟b中，調(diào)節(jié)水解混合物中總糖濃度為5?50g/L，再利用檸檬酸或氨水調(diào)節(jié)混合物的pH為4.5.0?6.0后接種酵母菌株進行發(fā)酵。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的利用紅豆杉聯(lián)產(chǎn)紫杉烷類有效成分和乙醇的方法，其特征在于:可加入還原性糖液調(diào)節(jié)總糖濃度。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的利用紅豆杉聯(lián)產(chǎn)紫杉烷類有效成分和乙醇的方法，其特征在于:步驟b中，混合物總糖濃度為30g/L，pH為5.5，發(fā)酵溫度為32 °C，發(fā)酵時間35h。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的利用紅豆杉聯(lián)產(chǎn)紫杉烷類有效成分和乙醇的方法，其特征在于:步驟c中，調(diào)節(jié)發(fā)酵混合物中乙醇體積分數(shù)為20?60%后攪拌提取。10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的利用紅豆杉聯(lián)產(chǎn)紫杉烷類有效成分和乙醇的方法，其特征在于:步驟c中，調(diào)節(jié)發(fā)酵混合物中乙醇體積分數(shù)為40%后提取40min，將浸膏純化制得紫杉醇、三尖杉寧堿和1-DABΙΠ。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種利用紅豆杉聯(lián)產(chǎn)紫杉烷類有效成分和乙醇的方法，包括以下步驟：將紅豆杉在弱酸性條件下酶解纖維素和半纖維素后發(fā)酵產(chǎn)生乙醇，然后利用產(chǎn)生的乙醇提取紫杉烷類有效成分；將紅豆杉中的纖維素和半纖維素進行水解，通過酶水解纖維素后發(fā)酵產(chǎn)生乙醇，以使紫杉烷類有效成分能更好的溶解于乙醇提取液中，能同時提取紫杉醇、三尖杉寧堿和10-DABⅢ等紫杉烷類有效成分和乙醇，紫杉醇的提取率99％以上，三尖杉寧堿提取率99％以上，10-DABⅢ提取率99％以上，浸膏中紫杉醇含量1％～5％，三尖杉寧堿含量1％～3％，10-DABⅢ含量1％～3％。
【IPC分類】C07D305/14, C12P7/10, C12P19/14
【公開號】CN105671089
【申請?zhí)枴緾N201610120576
【發(fā)明人】潘先文, 潘敬坤, 夏濤, 張龍
【申請人】重慶市碚圣醫(yī)藥科技股份有限公司
【公開日】2016年6月15日
【申請日】2016年3月3日