本發(fā)明屬于藥物分析化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種檢測(cè)多肽中碳二亞胺的方法。尤其是涉及一種檢測(cè)多肽中N,N-二異丙基碳二亞胺的方法。
背景技術(shù)：
：碳二亞胺(Carbodiimide)又稱(chēng)碳化二亞胺，含有N＝C＝N官能團(tuán)，是一類(lèi)常用的失水劑。自1955年有了碳二亞胺多肽合成法以后，碳二亞胺在許多化學(xué)領(lǐng)域得到了應(yīng)用。N,N-二異丙基碳二亞胺，英文簡(jiǎn)稱(chēng)DIC，就是一種常用的縮合劑。如奈西立肽的合成中就使用到了DIC，此外在Atosiban，縮宮素，生長(zhǎng)抑素、加壓素等多肽的合成中同樣使用DIC。然而歐洲藥典給出的基因毒性雜質(zhì)之結(jié)構(gòu)警示一文明確指出DIC具有基因毒性雜質(zhì)警示結(jié)構(gòu)，是一個(gè)潛在的具有基因毒性的雜質(zhì)，是要嚴(yán)格控制其在藥品中的含量的。所以建立一種檢測(cè)DIC的方法，完善多肽質(zhì)量控制，對(duì)于提升奈西立肽等多肽質(zhì)量，減少患者用藥風(fēng)險(xiǎn)，是非常有必要的。目前有文獻(xiàn)報(bào)道建立了一種多糖蛋白疫苗中殘留殘余碳二亞胺的檢測(cè)方法。該檢測(cè)方法是使用液相色譜和質(zhì)譜連用技術(shù)(LC-MS)對(duì)1-乙基-3-(2-二甲基氨基-丙基)-碳二亞胺(EDAC)尿素衍生物進(jìn)行定量分析。還沒(méi)有見(jiàn)到奈西立肽中殘留DIC檢測(cè)方法建立的文獻(xiàn)報(bào)道。而多糖蛋白疫苗為多糖和蛋白的結(jié)合物，奈西立肽是僅有三十多個(gè)氨基酸的多肽，二者之間的物理化學(xué)，結(jié)構(gòu)、樣品處理方法、合成的工藝均相差甚遠(yuǎn)。另外多糖蛋白疫苗中的碳二亞胺為1-乙基-3-(2-二甲基氨基-丙基)-碳二亞胺(EDAC)，而奈西立肽中的碳二亞胺為N,N-二異丙基碳二亞胺(DIC)，這兩者的結(jié)構(gòu)也有所差別，自然轉(zhuǎn)化的尿素衍生物也會(huì)有差別。存在的這些差異使得能夠用于檢測(cè)多糖蛋白疫苗的中碳二亞胺的方法未必適用于檢測(cè)奈西立肽中的碳二亞胺。此外，根據(jù)上述文獻(xiàn)報(bào)道的檢測(cè)方法的方法學(xué)驗(yàn)證數(shù)據(jù)可以看出，該方法僅憑文獻(xiàn)報(bào)告和主觀推測(cè)認(rèn)為多糖蛋白疫苗中殘留的碳二亞胺在工藝中已 經(jīng)完全轉(zhuǎn)化為其尿素衍生物。而實(shí)際上，樣品中仍然會(huì)有微量的碳二亞胺沒(méi)有轉(zhuǎn)化為其尿素衍生物。作為一個(gè)潛在的基因毒性雜質(zhì)，在藥物中被允許的限度很低，通常是在幾個(gè)ppm至數(shù)百ppm，這些沒(méi)有轉(zhuǎn)化的碳二亞胺很可能就超過(guò)了規(guī)定的限度。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：有鑒于此，本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種適用于奈西立肽等多肽中殘留碳二亞胺的檢測(cè)方法，尤其是N,N-二異丙基碳二亞胺的檢測(cè)方法，用于完善多肽質(zhì)量控制，提升奈西立肽等多肽質(zhì)量，減少患者用藥風(fēng)險(xiǎn)。為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：一種檢測(cè)多肽中N,N-二異丙基碳二亞胺的方法，分別用pH≤5的溶液溶解待測(cè)多肽樣品和N,N-二異丙基碳二亞胺對(duì)照品制得供試品溶液和對(duì)照品溶液；采用液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用的方法檢測(cè)供試品溶液中N,N-二異丙基碳二亞胺含量。本發(fā)明所述檢測(cè)方法以pH≤5的溶液溶解多肽樣品，營(yíng)造一個(gè)酸性環(huán)境，使得多肽中的DIC完全轉(zhuǎn)化為其尿素衍生物。取對(duì)照品溶液及待測(cè)多肽樣品溶液采用液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用的方法進(jìn)樣分析，以外標(biāo)法計(jì)算總的DIU的量，折算獲得多肽樣品中DIC的含量。在一些實(shí)施方案中，所述pH≤5的溶液為含0.001mol/L～3mol/L鹽酸的有機(jī)溶劑水溶液。在一些優(yōu)選實(shí)施方案中，所述pH≤5的溶液中的鹽酸濃度為1mol/L。在一些實(shí)施方案中，所述pH≤5的溶液中所述有機(jī)溶劑為乙腈或甲醇。在一些優(yōu)選實(shí)施方案中，所述pH≤5的溶液中所述有機(jī)溶劑濃度為30％。在一些實(shí)施方案中，所述多肽為奈西立肽。在一些實(shí)施方案中，所述溶解還包括超聲處理后靜置的步驟。溶解后超聲靜置使多肽中的DIC有充足的時(shí)間來(lái)轉(zhuǎn)化。在一些優(yōu)選實(shí)施方案中，所述超聲處理后時(shí)間為1min。在一些優(yōu)選實(shí)施方案中，所述靜置時(shí)間為2小時(shí)。在本發(fā)明所述檢測(cè)方法中，所述液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用的方法可以按照現(xiàn)有技術(shù)中的常規(guī)方法操作。在一些實(shí)施方案中，所述液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用的方法中色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠柱，流動(dòng)相A為水，流動(dòng)相B為乙腈。在一些實(shí)施方案中，所述液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用的方法中色譜柱為氧化硅柱，流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為1％的甲酸。進(jìn)一步的，在一些實(shí)施方案中，所述液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用的方法中梯度洗脫程序?yàn)闀r(shí)間(分鐘)流動(dòng)相A(％)流動(dòng)相B(％)09010105050119090209010在一些實(shí)施方案中，所述液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用的方法中檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm。在一些實(shí)施方案中，所述液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用的方法中離子流提取范圍為144-146Da。在一些實(shí)施方案中，所述液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用的方法中色譜柱柱溫為20℃～40℃之間，液相流速為0.8ml/min～1.2ml/min，進(jìn)質(zhì)譜的流速為0.2ml/min～0.4ml/min，液相檢測(cè)器為紫外檢測(cè)器，質(zhì)譜檢測(cè)器為ESI源離子阱質(zhì)譜儀，離子源溫度為200℃，離子傳輸管溫度320℃，鞘氣流30au，噴霧電壓3KV，輔氣0au，偏轉(zhuǎn)電壓80V，正離子模式。在某一具體實(shí)施例中，所述檢測(cè)方法為取待測(cè)多肽樣品20mg，精密稱(chēng)定，精密加入2mL含30％乙腈的1mol/L的鹽酸溶液溶解待測(cè)多肽樣品，超聲處理1min，再室溫靜置2小時(shí)，用30％的乙腈溶液稀釋、定容至刻度，搖勻作為供試品溶液；另取N,N-二異丙基碳二亞胺40mg，置50mL的量瓶中，加含30％乙腈的1mol/L的鹽酸溶液20mL溶解樣品，超聲處理1min，再室溫靜置 2小時(shí)，用含30％乙腈的1mol/L的鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻。精密取量上述溶液1mL置100mL量瓶中，用含30％乙腈的1mol/L的鹽酸溶液稀釋至刻度，作為對(duì)照品儲(chǔ)備溶液。精密取量對(duì)照品儲(chǔ)備液1.0mL置10mL量瓶中，用30％的乙腈溶液稀釋至刻度，作為對(duì)照品溶液；采用液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用的方法，色譜柱為AgilentEclipseC183.5μm4.6×100mm，柱溫25℃，液相流速為1.0mL/min，調(diào)節(jié)分流器的分流比使得進(jìn)質(zhì)譜的流速0.3mL/min，液相檢測(cè)器為紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm，質(zhì)譜檢測(cè)器為ESI源離子阱質(zhì)譜儀(ThermoLTQXL)，離子源溫度為200℃，離子傳輸管溫度320℃，鞘氣流30au，噴霧電壓3KV，輔氣0au，偏轉(zhuǎn)電壓80V，正離子模式，離子流提取范圍144-146Da，流動(dòng)相A為水，流動(dòng)相B為乙腈，梯度洗脫程序?yàn)闀r(shí)間(分鐘)流動(dòng)相A(％)流動(dòng)相B(％)09010105050119090209010精密量取上述供試品溶液與對(duì)照品溶液各10μL注入液相色譜儀，按外標(biāo)法以離子流峰面積或液相峰面積進(jìn)行計(jì)算，求出DIC的含量。在本發(fā)明所述檢測(cè)方法中，所述液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用的方法包括但不限于上述檢測(cè)方法。本發(fā)明實(shí)施例中分別對(duì)本發(fā)明所述檢測(cè)方法進(jìn)行檢測(cè)限、系統(tǒng)適應(yīng)性、定量限、線性、分析重復(fù)性、回收率進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示本發(fā)明所述方法檢測(cè)限溶液的液相色譜峰的信噪比為5.32，大于3，質(zhì)譜的離子流峰高明顯高于基線，信噪比必定大于3。表明本發(fā)明所述方法所述對(duì)照溶液濃度的10％處可以有效檢測(cè)，相當(dāng)83ppm。本發(fā)明所述方法系統(tǒng)適應(yīng)性結(jié)果顯示液相峰面積RSD為0.53％，小于20％，質(zhì)譜離子流峰面積RSD為2.76％，小于20％，表明本發(fā)明所述檢測(cè)方法系統(tǒng)適應(yīng)性很好。本發(fā)明所述方法定量限溶液連續(xù)進(jìn)樣6針，液相色譜圖的信噪比均大于3，峰面積的RSD為0.66％，小于20.0％。質(zhì)譜的離子流峰明顯高于基線，信噪 比必定大于10，且離子流峰面積的RSD為1.10％，小于20.0％。表明對(duì)照溶液濃度的30％處可以定量分析，相當(dāng)于249ppm。本發(fā)明所述方法液相線性回歸的結(jié)果來(lái)看，從定量限到對(duì)照品限度的2倍選取7個(gè)濃度點(diǎn)進(jìn)行回歸，液相檢測(cè)結(jié)果的相關(guān)系數(shù)R2＝0.9999，大于0.990，截距峰面積比為3.93％，小于10％，線性關(guān)系良好。質(zhì)譜檢測(cè)結(jié)果的相關(guān)系數(shù)R2＝0.9906，大于0.990，截距峰面積比為1.56％，小于10％，線性關(guān)系良好。本發(fā)明所述方法分析重復(fù)性溶液液相峰面積和質(zhì)譜離子流峰面積的RSD均小于20.0％，表明本發(fā)明所述檢測(cè)方法的分析重復(fù)性良好。本發(fā)明所述方法液相和質(zhì)譜各濃度水平的平均回收率為90.76％，質(zhì)譜的平均回收率為106.99％，均在80.0％～120.0％，平均回收率的RSD分別為4.66％和8.80％，均小于20.0％，表明本發(fā)明所述檢測(cè)方法的準(zhǔn)確度良好。本發(fā)明所述檢測(cè)多肽中N,N-二異丙基碳二亞胺的方法分別用pH≤5的溶液溶解待測(cè)多肽樣品和N,N-二異丙基碳二亞胺對(duì)照品制得供試品溶液和對(duì)照品溶液；采用液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用的方法檢測(cè)供試品溶液中N,N-二異丙基碳二亞胺含量。本發(fā)明所述檢測(cè)方法以pH≤5的溶液溶解多肽樣品，營(yíng)造一個(gè)酸性環(huán)境，使得多肽中的DIC完全轉(zhuǎn)化為其尿素衍生物。取對(duì)照品溶液及待測(cè)多肽樣品溶液采用液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用的方法進(jìn)樣分析，以外標(biāo)法計(jì)算總的DIU的量，折算獲得多肽樣品中DIC的含量。本發(fā)明所述檢測(cè)方法操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)儀器和試劑普通，檢測(cè)成本低；檢測(cè)時(shí)間短，20分鐘就能完成樣品分析，而且檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確明顯，易于判斷；DIU質(zhì)譜離子化效果好，檢測(cè)靈敏度高，質(zhì)譜檢測(cè)的檢測(cè)限可以達(dá)到0.8ppm，廣泛適合于多肽類(lèi)藥物中DIC的檢測(cè)。附圖說(shuō)明圖1示實(shí)施例5液相色譜圖；圖2示實(shí)施例5質(zhì)譜圖；圖3示實(shí)施例6液相線性曲線圖；圖4示實(shí)施例6質(zhì)譜線性曲線圖；圖5示實(shí)施例7空白液相圖譜；圖6示實(shí)施例7空白質(zhì)譜圖譜；圖7示實(shí)施例7奈西立肽液相圖譜；圖8示實(shí)施例7奈西立肽質(zhì)譜圖譜。具體實(shí)施方式本發(fā)明實(shí)施例公開(kāi)了一種檢測(cè)多肽中N,N-二異丙基碳二亞胺的方法。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改進(jìn)工藝參數(shù)實(shí)現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類(lèi)似的替換和改動(dòng)對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯而易見(jiàn)的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的產(chǎn)品和方法已經(jīng)通過(guò)較佳實(shí)施例進(jìn)行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本
發(fā)明內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)對(duì)本文所述的產(chǎn)品和方法進(jìn)行改動(dòng)或適當(dāng)變更與組合，來(lái)實(shí)現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。為了進(jìn)一步理解本發(fā)明，下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。其中，電子天平購(gòu)自METTLERTOLEDO公司，XS205型；液相色譜儀購(gòu)自Agilent公司，1260型；質(zhì)譜儀購(gòu)自Thermo公司，LTQ型；乙腈購(gòu)自Merker公司，色譜純；DIC對(duì)照品購(gòu)自AlORICH公司，批號(hào)SHBC2555V，含量99.0％。說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求書(shū)中所使用的縮寫(xiě)的含義列于下表中：縮寫(xiě)及英文含義EDAC1-乙基-3-(2-二甲基氨基-丙基)-碳二亞胺DICN,N-二異丙基碳二亞胺EDAU1-乙基-3-(2-二甲基氨基-丙基)-碳二亞胺的尿素衍生物DIUN,N-二異丙基碳二亞胺的尿素衍生物L(fēng)OQ定量限LOD檢測(cè)限實(shí)施例1：溶液的配制含30％乙腈的1mol/L的鹽酸溶液：取鹽酸120mL加水780mL、乙腈360mL混勻即得；30％的乙腈溶液：取乙腈300mL加水700mL，混勻。流動(dòng)相A：水。流動(dòng)相B：乙腈供試品溶液：取供試品約20mg，精密稱(chēng)定，置20mL容量瓶中，精密加入2mL含30％乙腈的1mol/L的鹽酸溶液溶解樣品，超聲處理1min，在室溫靜置2小時(shí)，用30％的乙腈溶液稀釋、定容至刻度，搖勻。平行配制2份。對(duì)照品儲(chǔ)備液：取DIC對(duì)照品40mg置50mL的量瓶中，加含30％乙腈的1mol/L的鹽酸溶液20mL溶解樣品，超聲處理1min，在室溫靜置2小時(shí)，用含30％乙腈的1mol/L的鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻。精密取量上述溶液1mL置100mL量瓶中，用含30％乙腈的1mol/L的鹽酸溶液稀釋至刻度，作為對(duì)照品儲(chǔ)備溶液。對(duì)照品溶液：精密取量對(duì)照品儲(chǔ)備液1.0mL置10mL量瓶中，用30％的乙腈溶液稀釋至刻度，作為對(duì)照品溶液。檢測(cè)限溶液：精密取量對(duì)照品儲(chǔ)備液0.1mL置10mL量瓶中，用30％的乙腈溶液稀釋至刻度。定量限溶液：精密取量對(duì)照品儲(chǔ)備液0.3mL置10mL量瓶中，用30％的乙腈溶液稀釋至刻度。50％線性溶液：精密取量對(duì)照品儲(chǔ)備液0.5mL置10mL量瓶中，用30％的乙腈溶液稀釋至刻度。75％線性溶液：精密取量對(duì)照品儲(chǔ)備液0.75mL置10mL量瓶中，用30％的乙腈溶液稀釋至刻度。100％線性溶液：對(duì)照品溶液。125％線性溶液：精密取量對(duì)照品儲(chǔ)備液1.25mL置10mL量瓶中，用30％的乙腈溶液稀釋至刻度。150％線性溶液：精密取量對(duì)照品儲(chǔ)備液1.5mL置10mL量瓶中，用30％的乙腈溶液稀釋至刻度。200％線性溶液：精密取量對(duì)照品儲(chǔ)備液2.0mL置10mL量瓶中，用30％的乙腈溶液稀釋至刻度。50％準(zhǔn)確度溶液：取供試品約20mg，精密稱(chēng)定，置20mL容量瓶中，精密加入2mL含30％乙腈的1mol/L的鹽酸溶液溶解樣品，超聲處理1min，在室溫靜置2小時(shí)，精密加入1.0mL對(duì)照品儲(chǔ)備液，用30％的乙腈溶液稀釋、 定容至刻度，搖勻。平行配制3份。100％準(zhǔn)確度溶液：取供試品約20mg，精密稱(chēng)定，置20mL容量瓶中，精密加入2mL含30％乙腈的1mol/L的鹽酸溶液溶解樣品，超聲處理1min，在室溫靜置2小時(shí)，精密加入2.0mL對(duì)照品儲(chǔ)備液，用30％的乙腈溶液稀釋、定容至刻度，搖勻。平行配制6份。150％準(zhǔn)確度容溶液：取供試品約20mg，精密稱(chēng)定，置20mL容量瓶中，精密加入2mL含30％乙腈的1mol/L的鹽酸溶液溶解樣品，超聲處理1min，在室溫靜置2小時(shí)，精密加入3.0mL對(duì)照品儲(chǔ)備液，用30％的乙腈溶液稀釋、定容至刻度，搖勻。平行配制3份。分析重復(fù)性溶液：配制同100％準(zhǔn)確度溶液，平行配制6份。實(shí)施例2、檢測(cè)條件1、液相條件色譜柱：AgilentEclipseC183.5μm4.6×100mm，色譜柱編號(hào)：RD-152；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)：210nm；柱溫：25℃；液相流速：1.0ml/min；調(diào)節(jié)分流比，使得進(jìn)質(zhì)譜的流速0.3ml/min；進(jìn)樣量：10μL；流動(dòng)相A：水；流動(dòng)相B：乙腈；梯度洗脫程序如下：時(shí)間(分鐘)流動(dòng)相A(％)流動(dòng)相B(％)090101050501190902090102、質(zhì)譜條件質(zhì)譜儀檢測(cè)器：ThermoLTQXL；離子模式：正離子模式；離子流數(shù)據(jù)采集范圍：144-146Da；離子源溫度:200℃；離子傳輸管溫度:320℃；鞘氣流：30au；輔氣流：0au；噴霧電壓:3KV；偏轉(zhuǎn)電壓:80KV。實(shí)施例3、系統(tǒng)適應(yīng)性取對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣6針，液相峰面積和離子流峰面積的RSD均不得 過(guò)20.0％，質(zhì)譜離子流的面積RSD不得大于20.0％。檢測(cè)結(jié)果如表1和表2。表16針對(duì)照品進(jìn)樣結(jié)果(液相)表26針對(duì)照品進(jìn)樣結(jié)果(質(zhì)譜)由表1和表2結(jié)果可見(jiàn)液相峰面積RSD為0.53％，小于20％，質(zhì)譜離子流峰面積RSD為2.76％，小于20％，表明本發(fā)明所述檢測(cè)方法系統(tǒng)適應(yīng)性很好。實(shí)施例4、定量限取定量限溶液連續(xù)進(jìn)樣6針，液相色譜峰和離子流峰的信噪比不得小于3，液相峰面積和離子流峰面積的RSD均不得過(guò)20.0％，檢測(cè)結(jié)果如表3和表4。表3連續(xù)6針液相分析結(jié)果表4連續(xù)6針質(zhì)譜分析結(jié)果由表3和表4結(jié)果可見(jiàn)，定量限溶液連續(xù)進(jìn)樣6針，液相色譜圖的信噪比均大于3，峰面積的RSD為0.66％，小于20.0％。質(zhì)譜的離子流峰明顯高于基線，信噪比必定大于10，且離子流峰面積的RSD為1.10％，小于20.0％。表明對(duì)照溶液濃度的30％處可以定量分析，相當(dāng)于249ppm。實(shí)施例5、檢出限取檢出限溶液進(jìn)樣1針，液相色譜峰和離子流峰的信噪比不得小于3，檢測(cè)結(jié)果如圖1、表5和圖2。表5液相色譜結(jié)果出峰時(shí)間峰面積峰面積％峰高峰高％S/N4.82712492100.002746100.005.32總和12492.000100.0002746.000100.000由上述結(jié)果可見(jiàn)，本發(fā)明所述方法檢測(cè)限溶液的液相色譜峰的信噪比為5.32，大于3，質(zhì)譜的離子流峰高明顯高于基線，信噪比必定大于3。表明本發(fā)明所述檢測(cè)法所述對(duì)照溶液濃度的10％處可以有效檢測(cè)，相當(dāng)83ppm。實(shí)施例6、線性取分別進(jìn)樣1針，根據(jù)液相色譜圖的峰面積和離子流峰面積繪制的線性曲線的線性相關(guān)系數(shù)R方不得小于0.990，不同濃度水平的RSD不得大于10.0％，線性曲線Y軸截距的絕對(duì)值與100％濃度水平的比值(截距峰面積比)不得過(guò)10.0％。檢測(cè)結(jié)果如表6、表7、圖3和圖4。表6各濃度線性溶液液相檢測(cè)結(jié)果表7各濃度線性溶液質(zhì)譜檢測(cè)結(jié)果從上述液相線性回歸的結(jié)果來(lái)看，從定量限到對(duì)照品限度的2倍選取7個(gè)濃度點(diǎn)進(jìn)行回歸，液相檢測(cè)結(jié)果的相關(guān)系數(shù)R2＝0.9999，大于0.990，截距峰面積比為3.93％，小于10％，線性關(guān)系良好。質(zhì)譜檢測(cè)結(jié)果的相關(guān)系數(shù)R2＝0.9906，大于0.990，截距峰面積比為1.56％，小于10％，線性關(guān)系良好。實(shí)施例7、分析重復(fù)性取2份供試品溶液和6份分析重復(fù)性溶液各進(jìn)1針。液相色譜峰和質(zhì)譜離子流峰面積的RSD均不得過(guò)20.0％。檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表8-11和圖5-8。表8液相供試品檢測(cè)結(jié)果奈西立肽質(zhì)量mg稀釋倍數(shù)奈西立肽濃度mg/mlDIC峰面積22.68201.134022.68201.134020.18201.009020.18201.0090表9質(zhì)譜供試品檢測(cè)結(jié)果圖5和圖6空白圖譜表明空白溶液對(duì)于檢測(cè)沒(méi)有任何干擾，而圖7和圖8奈西立肽圖譜結(jié)果顯示，奈西立肽中DIC的總含量為0.00％。表10液相分析重復(fù)性結(jié)果表11質(zhì)譜分析重復(fù)性結(jié)果上述分析重復(fù)性結(jié)果顯示，分析重復(fù)性溶液液相峰面積和質(zhì)譜離子流峰面積的RSD均小于20.0％，表明本發(fā)明所述檢測(cè)方法的分析重復(fù)性良好。實(shí)施例8、回收率取各濃度水平下的所有準(zhǔn)確度溶液各進(jìn)樣1針，液相和質(zhì)譜各濃度水平的平均回收率在80.0％～120.0％，回收率的RSD不得大于20.0％。表129針樣品加標(biāo)準(zhǔn)的回收的液相分析結(jié)果表139針樣品加標(biāo)準(zhǔn)的回收質(zhì)譜分析結(jié)果由表12和13的結(jié)果可見(jiàn)，液相和質(zhì)譜各濃度水平的平均回收率為90.76，質(zhì)譜的平均回收率為106.99％，均在80.0％～120.0％，平均回收率的RSD分別為4.66％和8.80％，均小于20.0％，表明本發(fā)明所述檢測(cè)方法的準(zhǔn)確度良好。以上實(shí)施例的說(shuō)明只是用于幫助理解本發(fā)明的方法及其核心思想。應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行若干改進(jìn)和修飾，這些改進(jìn)和修飾也落入本發(fā)明權(quán)利要求的保護(hù)范圍內(nèi)。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3