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霍亂弧菌O1乳膠法檢測(cè)試劑盒的制作方法

文檔序號(hào):12358696閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種霍亂弧菌O1乳膠法檢測(cè)試劑盒,包括試劑條,所述試劑條包括襯底、濾樣紙、致敏乳膠聚酯膜、免疫硝酸纖維素膜和吸水紙,所述濾樣紙、致敏乳膠聚酯膜、免疫硝酸纖維素膜和吸水紙依次首尾銜接并固定于所述襯底上,其特征在于,所述致敏乳膠聚酯膜上包被有彩色乳膠顆粒標(biāo)記的抗霍亂弧菌O1型單克隆抗體Ⅰ,免疫硝酸纖維素膜上設(shè)有包被了抗霍亂弧菌O1型單克隆抗體Ⅱ的檢測(cè)線和包被了羊抗兔IgG的質(zhì)控線。

2.如權(quán)利要求1所述的試劑盒,其特征在于,所述彩色乳膠顆粒為粒徑290~300nm的聚苯乙烯顆粒。

3.權(quán)利要求1-2任一權(quán)利要求所述的霍亂弧菌O1乳膠法檢測(cè)試劑盒的制備方法,包括以下步驟:

1)致敏乳膠顆粒的制備:用羧基化的聚苯乙烯標(biāo)記抗霍亂弧菌O1型單克隆抗體Ι,獲得致敏乳膠顆粒;

2)致敏乳膠聚酯膜的制備:用步驟1)獲得的致敏乳膠顆粒包被聚酯膜,獲得致敏乳膠聚酯膜;

3)將抗霍亂弧菌O1型單克隆抗體Ⅱ和羊抗兔抗體分別噴在硝酸纖維素膜檢測(cè)線和質(zhì)控線的位置上,烘干備用,制得免疫硝酸纖維素膜;

4)將濾樣紙、致敏乳膠聚酯膜、免疫硝酸纖維素膜、吸水紙依次粘貼在PVC片上,切裁制得試劑條;

5)將試劑條裝入塑料盒,獲得霍亂弧菌O1乳膠法檢測(cè)試劑盒。

4.如權(quán)利要求3所述的制備方法,其特征在于,所述步驟1)致敏乳膠顆粒的制備為:

a.取一定體積的羧基化的聚苯乙烯,用2~3倍體積20mM pH 6.0的碳酸緩沖溶液多次沖洗、離心、棄上清,獲得羧基化的聚苯乙烯顆粒沉淀;

b.用1~1.5倍體積20mM pH6.0的磷酸緩沖溶液懸浮上一步獲得的羧基化的聚苯乙烯顆粒沉淀,并加入1~1.5倍體積的水溶性炭化二亞胺,室溫下攪拌20~30分鐘,最后用2~3倍體積0.01M pH 8.0的硼酸緩沖溶液多次沖洗、離心、棄上清,獲得待標(biāo)記物;

c.向步驟b獲得的所述待標(biāo)記物中加入2~3倍體積0.2M pH 7.0的硼酸緩沖液制成乳膠懸液,并向所述乳膠懸液中加入抗霍亂弧菌O1型單克隆抗體Ι;

d.充分反應(yīng)過(guò)夜,加入終止劑終止反應(yīng),獲得致敏乳膠顆粒。

5.如權(quán)利要求4所述的制備方法,其特征在于,所述步驟a中碳酸緩沖溶液為20mM pH 6.0含0.01%SDS的碳酸緩沖溶液。

6.如權(quán)利要求4所述的制備方法,其特征在于,所述步驟a中羧基化的聚苯乙烯濃度為6~12w/v%,所述步驟b中水溶性炭化二亞胺的濃度為9~10mg/ml。

7.如權(quán)利要求4所述的制備方法,其特征在于,所述步驟c乳膠懸液中羧基化的聚苯乙烯顆粒偶聯(lián)抗霍亂弧菌O1型單克隆抗體Ι的量為:0.5mg抗霍亂弧菌O1型單克隆抗體Ι/10mg聚苯乙烯顆粒。

8.如權(quán)利要求4所述的制備方法,其特征在于,所述步驟2)中致敏乳膠聚酯膜的制備具體步驟為:

A.用乳膠緩沖液稀釋致敏乳膠顆粒,獲得0.3~0.5w/v%的致敏乳膠溶液;

B.用步驟A制備好的致敏乳膠溶液噴涂聚酯膜,干燥,制得致敏乳膠聚酯膜。

9.如權(quán)利要求8所述的制備方法,其特征在于,所述步驟A中的乳膠緩沖液配方如下:9~11v%1.0M Tris液,0.25~0.35w/v%聚乙二醇20000,0.18~0.20w/v%牛血清白蛋白,0.15~0.25w/v%脫脂牛奶,0.28~0.30w/v%酪蛋白,和0.04~0.06w/v%疊氮化鈉,用鹽酸調(diào)節(jié)pH至8.0±0.02,余量為水。

10.權(quán)利要求1-2任一權(quán)利要求所述的試劑盒在制備霍亂弧菌O1檢測(cè)試劑中的應(yīng)用。

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