1.快速檢測轉(zhuǎn)基因植物中CP4-EPSPS的方法,其特征在于,包括以下步驟:
步驟一,膠體碳的制備;
步驟二,適合PH值條件下膠體碳標(biāo)記抗體的制備;
步驟三,抗體包被至反應(yīng)膜作為T線及二抗包被至反應(yīng)膜的C線;
步驟四,膠體碳試紙條的制備;
步驟五,從待檢植物中提取蛋白,制備蛋白提取液;
步驟六,將檢測試紙條插入蛋白提取液中反應(yīng);
步驟七,適當(dāng)反應(yīng)時間后,進(jìn)行肉眼判斷結(jié)果。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速檢測轉(zhuǎn)基因植物中CP4-EPSPS的方法,其特征在于,步驟二中所述抗體為兔抗CP4-EPSPS多克隆抗體;步驟二中PH值為8~10,最優(yōu)選的PH值為9.0。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速檢測轉(zhuǎn)基因植物中CP4-EPSPS的方法,其特征在于,步驟三中所述抗體亦為兔抗CP4-EPSPS多克隆抗體。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速檢測轉(zhuǎn)基因植物中CP4-EPSPS的方法,其特征在于,步驟三中所述二抗為羊抗兔IgG抗體。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速檢測轉(zhuǎn)基因植物中CP4-EPSPS的方法,其特征在于,步驟三中抗體包被量為100ug/1ml碳。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速檢測轉(zhuǎn)基因植物中CP4-EPSPS的方法,其特征在于,步驟七中所述反應(yīng)時間為3-15分鐘。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速檢測轉(zhuǎn)基因植物中CP4-EPSPS的方法,其特征在于,步驟六中所述反應(yīng)溫度為10℃~30℃。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的快速檢測轉(zhuǎn)基因植物中CP4-EPSPS的方法,其特征在于,步驟二適合PH值條件下膠體碳標(biāo)記抗體的制備具體方法為:
一、膠體碳最適PH值確定:
向一系列不同PH值梯度的硼酸鹽緩沖液中先后加入0.1%納米碳懸液及0.1%TritonX-100,超聲處理其混合液后,200rpm離心10分鐘,收集上清并靜 置24小時后,觀察無沉淀者即為最適PH值;
二、多克隆抗體的膠體碳標(biāo)記:
在步驟一判定的最適PH值條件下,向800ul 0.02M硼酸緩沖液中加入200ul抗CP4-EPSPS多克隆抗體E01,渦旋振蕩混勻,在制得的混合液中加入20ul質(zhì)量體積比為1.5%的EDC溶液,于室溫條件下旋轉(zhuǎn)震蕩20分鐘之后加入200ul膠體碳納米顆粒,于恒溫?fù)u床中300轉(zhuǎn),25℃放置2小時之后加入100ul含20%BSA的硼酸緩沖液,繼續(xù)于恒溫?fù)u床中300轉(zhuǎn),25℃放置5小時;于12000g離心20分鐘,留取沉淀,0.02M硼酸緩沖液反復(fù)重懸、離心,洗滌4次;最終,1ml 0.02M硼酸鹽緩沖液重懸沉淀并于超聲破碎儀中,超聲分散輸出功率60%,超聲開時3秒,關(guān)時3秒,總時長5分鐘;即得膠體碳標(biāo)記的CP4-EPSPS抗體。
9.一種CP4-EPSPS膠體碳快速檢測試紙條,包括PVC底板、樣品墊、硝酸纖維素膜、質(zhì)控線、檢測線、吸水濾紙,PVC底板一側(cè)設(shè)有樣品墊,另一側(cè)設(shè)有吸水濾紙;樣品墊和吸水濾紙之間設(shè)有硝酸纖維素膜,硝酸纖維素膜右側(cè)卡接在吸水濾紙中;所述硝酸纖維素膜中部設(shè)有檢測線和質(zhì)控線,檢測線靠近樣品墊,其特征在于,還包括膠體碳墊,所述膠體碳墊為包被兔多克隆抗體E01的膠體碳墊,樣品墊右端與膠體碳墊搭接相連,膠體碳墊右側(cè)與硝酸纖維素膜搭接相連。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的CP4-EPSPS膠體碳快速檢測試紙條的制備方法,其特征在于,包括以下步驟:
一、制備用膠體碳標(biāo)記的CP4-EPSPS抗體;
二、碳標(biāo)墊及反應(yīng)膜的制備:
按照1∶100比例稀釋膠體碳標(biāo)記的兔抗CP4-EPSPS多克隆抗體E01,噴涂于膠體碳墊上,干燥后備用;按照1∶8000比例稀釋多克隆抗體E01及1∶10000比例稀釋羊抗兔IgG后將其二者分別包被于硝酸纖維素膜的T線及C線位置,干燥后備用;
三、貼膜及切膜:
從左向右依次將樣品墊,膠體碳墊,硝酸纖維素膜,吸水濾紙依次貼附于PVC底板上且相互之間依附搭接相連,完成之后將試紙切割成寬3mm的試紙條成品。