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改進的測定方法與流程

文檔序號:12511681閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.檢測樣品中感興趣的分析物的方法,包括:

a.將分析物結合到:(i)表面上的捕獲試劑,所述表面包含用于所述分析物的捕獲試劑,和包含錨定寡核苷酸序列的錨定試劑;(ii)連接到第一核酸探針的用于所述分析物的第一檢測試劑;和(iii)連接到第二核酸探針的用于所述分析物的第二檢測試劑;從而在所述表面上形成包含所述結合試劑、所述分析物以及所述第一和第二檢測試劑的復合物;

b.使用要求所述第一和第二探針接近的延伸過程,延伸所述第二探針以形成延伸序列,其包含與所述錨定序列互補的錨定序列互補體;

c.將所述錨定序列與所述錨定序列互補體雜交;和

d.測量結合到所述表面的延伸序列的量,

其中所述分析物是G-CDF、GM-CSF、IFNgamma、IL-lbeta、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-12/23p40、IL12p70、IL-17A、IL21、IL-22、IL-23、IL-31、IL-33、TNFalpha、TSLP、VEGF、復合PSA(complexed PSA)、游離PSA、Abeta42、Abeta40、Abeta38、tau、心肌肌鈣蛋白I、心肌肌鈣蛋白T、HIV p24、C-肽和/或FGF21。

2.權利要求1的方法,其中所述捕獲試劑是抗體、抗原、配體、受體、寡核苷酸、半抗原、表位、模擬表位或適體。

3.權利要求1的方法,其中所述第一檢測試劑是抗體、抗原、配體、受體、寡核苷酸、半抗原、表位、模擬表位或適體。

4.權利要求1的方法,其中所述第二檢測試劑是抗體、抗原、配體、受體、寡核苷酸、半抗原、表位、模擬表位或適體。

5.權利要求1的方法,其中所述捕獲試劑以及所述第一和第二檢測試劑是針對分析物的抗體。

6.權利要求1的方法,其中所述錨定寡核苷酸序列包含單鏈寡核苷酸序列。

7.權利要求1的方法,其中所述延伸序列還包含一個或多個檢測序列,且測量步驟還包含將所述延伸序列與互補于所述一個或多個檢測序列的多種經(jīng)標記的探針接觸。

8.權利要求1的方法,其中所述延伸步驟包含將所述探針結合到模板核酸序列,形成環(huán)形核酸模板,并通過滾環(huán)擴增延伸所述環(huán)形模板。

9.權利要求1的方法,其中延伸的探針在探針延伸后仍定位于所述表面上。

10.權利要求9的方法,其中所述復合物在延伸步驟后仍結合到所述表面。

11.權利要求10的方法,其中所述延伸的探針在所述表面上復合物的位置的小于100um的位置處結合到所述錨定試劑。

12.權利要求1的方法,其中延伸步驟包括PCR(聚合酶鏈式反應)、LCR(連接酶鏈式反應)、SDA(單鏈置換擴增)、3SR(自動維持合成反應),或等溫擴增方法。

13.權利要求12的方法,其中所述延伸步驟包括等溫擴增方法。

14.權利要求13的方法,其中所述等溫擴增方法是解旋酶依賴性擴增或滾環(huán)擴增(RCA)。

15.權利要求1的方法,其中延伸過程包括將在步驟(a)中形成的所述復合物與連接子(connector)序列接觸,其中所述連接子序列包含(i)與所述第二探針互補的內(nèi)部序列和(ii)與所述第一探針的非重疊區(qū)互補的雙末端序列(two end sequences)。

16.權利要求15的方法,還包括連接所述連接子寡核苷酸的雙末端序列以形成與所述第一和第二探針兩者雜交的環(huán)形靶序列。

17.權利要求1的方法,其中延伸過程包括將在步驟(a)中形成的所述復合物與第一連接子寡核苷酸序列和第二連接子寡核苷酸序列接觸,所述第一連接寡核苷酸序列包含互補于所述第一探針的第一區(qū)域和所述第二探針上的第一區(qū)域的第一連接子探針序列,所述第二連接子寡核苷酸包含互補于所述第一探針的第二非重疊性區(qū)域和所述第二探針的第二非重疊性區(qū)域的第二探針序列。

18.權利要求17的方法,還包括連接所述第一和第二連接子寡核苷酸以形成與所述第一和第二探針兩者雜交的環(huán)形靶序列。

19.權利要求1的方法,其中所述表面包含顆粒。

20.權利要求1的方法,其中所述表面包含多孔板的孔。

21.權利要求1的方法,其中所述表面包含多個不同的結合域,且所述捕獲試劑和所述錨定試劑位于所述表面上的兩個不同的結合域上。

22.權利要求20的方法,其中所述孔包含多個不同的結合域,且所述捕獲試劑和所述錨定試劑位于所述孔內(nèi)的兩個不同的結合域上。

23.權利要求1的方法,其中所述表面包含多個不同的結合域,且所述捕獲試劑和所述錨定試劑位于所述表面上的相同的結合域上。

24.權利要求20的方法,其中所述孔包含多個不同的結合域,且所述捕獲試劑和所述錨定試劑位于所述孔內(nèi)的相同的結合域上。

25.權利要求1的方法,其中所述捕獲試劑和所述錨定試劑在所述表面上小于10nm。

26.權利要求1的方法,其中所述表面包含電極,且測量步驟還包括向所述電極施加電壓波形以產(chǎn)生電化學發(fā)光信號。

27.權利要求19的方法,還包括在電極上收集顆粒并向電極施加電壓波形以產(chǎn)生電化學發(fā)光信號。

28.權利要求1的方法,其中測量步驟還包括將所述延伸序列結合具有可檢測標記的檢測探針,測量所述可檢測標記并將所述測量與所述樣品中的分析物的量相關聯(lián),其中所述檢測探針包含與所述延伸序列的區(qū)域互補的核酸序列。

29.根據(jù)權利要求28的方法,其中通過光散射、光吸收、熒光、化學發(fā)光、電化學發(fā)光、生物發(fā)光、磷光、放射性、磁場或其組合的測量來測量所述可檢測標記。

30.根據(jù)權利要求29的方法,其中所述可檢測標記是ECL標記,且所述測量步驟包含測量ECL信號。

31.用于檢測樣品中感興趣的分析物的試劑盒,其在一個或多個小瓶、容器或隔室中包括:

a.表面,包含(i)用于所述分析物的捕獲試劑,和(ii)包含錨定寡核苷酸序列的錨定試劑;

b.連接到第一核酸探針的用于所述分析物的第一檢測試劑;和

c.連接到第二核酸探針的用于所述分析物的第二檢測試劑

其中所述分析物是G-CDF、GM-CSF、IFNgamma、IL-lbeta、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-12/23p40、IL12p70、IL-17A、IL21、IL-22、IL-23、IL-31、IL-33、TNFalpha、TSLP、VEGF、復合PSA、游離PSA、Abeta42、Abeta40、Abeta38、tau、心肌肌鈣蛋白I、心肌肌鈣蛋白T、HIV p24、C-肽和/或FGF21。

32.權利要求31的試劑盒,其中所述捕獲試劑包含抗體、抗原、配體、受體、寡核苷酸、半抗原、表位、模擬表位或適體。

33.權利要求31的試劑盒,其中所述第一檢測試劑包含抗體、抗原、配體、受體、寡核苷酸、半抗原、表位、模擬表位或適體。

34.權利要求31的試劑盒,其中所述第二檢測試劑包含抗體、抗原、配體、受體、寡核苷酸、半抗原、表位、模擬表位或適體。

35.權利要求31的試劑盒,其中所述表面包含顆粒。

36.權利要求31的試劑盒,其中所述表面包含多孔板的孔。

37.權利要求31的試劑盒,其中所述表面包含多個不同的結合域,且所述捕獲試劑和所述錨定試劑位于所述表面上的兩個不同的結合域上。

38.權利要求36的試劑盒,其中所述孔包含多個不同的結合域,且所述捕獲試劑和所述錨定試劑位于所述孔內(nèi)的兩個不同的結合域上。

39.權利要求31的試劑盒,其中所述表面包含多個不同的結合域,且所述捕獲試劑和所述錨定試劑位于所述表面上的相同的結合域上。

40.權利要求36的試劑盒,其中所述孔包含多個不同的結合域,且所述捕獲試劑和所述錨定試劑位于所述孔內(nèi)的相同的結合域上。

41.權利要求31的試劑盒,其中所述捕獲試劑和所述錨定試劑在所述表面上10-100nm內(nèi)。

42.權利要求31的試劑盒,其中所述表面包含電極。

43.權利要求1的方法,其中所述分析物是選自肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumonia)、鮑氏不動桿菌(Acinetobacter baumannii)、銅綠假單胞菌(Pseudomon asaeruginosa)、腸桿菌屬(Enterobacter)物種,以及腸外致病性大腸桿菌(Escherichia coli.)的與醫(yī)療保健相關的感染(health care associated infection)。

44.權利要求31的試劑盒,其中標志物是選自肺炎克雷伯菌、鮑氏不動桿菌、銅綠假單胞菌、腸桿菌屬,以及腸外致病性大腸桿菌的與醫(yī)療保健相關的感染。

45.權利要求1的方法,其中所述分析物是50S核糖體蛋白L20、30S核糖體蛋白S7、30S核糖體蛋白S2、50S核糖體蛋白L21、50S核糖體蛋白L17、30S核糖體蛋白S4、50S核糖體蛋白L15、30S核糖體蛋白S5、50S核糖體蛋白L16、30S核糖體蛋白S3、50S核糖體蛋白L22、50S核糖體蛋白L4、核糖體蛋白L25、50S核糖體蛋白L5、30S核糖體蛋白S2、核糖體蛋白L30、L31和L32及其組合。

46.權利要求1的方法,其中所述分析物是延伸因子EF-TU、ACP、酰基載體蛋白、RplL、核糖體蛋白GroS(MopB,65,000)、分子伴侶系統(tǒng)Gro-EL-Gro-ES和GapA的組分、糖酵解中的酶及其組合。

47.權利要求31的試劑盒,其中所述分析物是50S核糖體蛋白L20、30S核糖體蛋白S7、30S核糖體蛋白S2、50S核糖體蛋白L21、50S核糖體蛋白L17、30S核糖體蛋白S4、50S核糖體蛋白L15、30S核糖體蛋白S5、50S核糖體蛋白L16、30S核糖體蛋白S3、50S核糖體蛋白L22、50S核糖體蛋白L4、核糖體蛋白L25、50S核糖體蛋白L5、30S核糖體蛋白S2、核糖體蛋白L30、L31和L32,及其組合。

48.權利要求31的試劑盒,其中所述分析物是延伸因子EF-TU、ACP、?;d體蛋白、RplL、核糖體蛋白GroS(MopB,65,000)、分子伴侶系統(tǒng)Gro-EL-Gro-ES和GapA的組分、糖酵解中的酶,及其組合。

49.檢測樣品中感興趣的分析物的方法,包括:

a.在足以形成分析物復合物的條件下濃縮所述樣品,所述分析物復合物包括結合第一檢測試劑的分析物,其中所述第一檢測試劑連接到第一核酸探針;

b.將步驟(a)中形成的所述分析物復合物結合到:(i)表面上的捕獲試劑,所述表面包含用于所述分析物的捕獲試劑,和包含錨定寡核苷酸序列的錨定試劑;和(ii)與第二核酸探針連接的用于所述分析物的第二檢測試劑;從而在所述表面上形成復合物,所述復合物包含所述捕獲試劑、所述分析物以及所述第一和所述第二檢測試劑;

c.使用需要所述第一和所述第二探針接近的延伸過程,延伸所述第二探針以形成包含錨定序列互補體的延伸序列,所述錨定序列互補體與所述錨定序列互補;

d.將所述錨定序列與所述錨定序列互補體雜交;和

e.測量結合到所述表面的延伸序列的量。

50.權利要求49的方法,其中濃縮步驟(a)還包含

(i)將包括所述分析物的樣品與固相接觸,所述固相連接至與所述第一核酸探針的至少一部分互補的靶向劑,從而形成濃縮復合物,所述濃縮復合物包含通過所述第一核酸探針和所述靶向劑之間的結合反應而結合到固相的分析物;

(ii)收集所述濃縮復合物;

(iii)從所述濃縮復合物分離所述樣品的未結合的組分;和

(iv)釋放所述濃縮復合物以將所述固相與所述分析物分離以形成所述分析物復合物。

51.用于檢測樣品中感興趣的分析物的試劑盒,其在一個或多個小瓶、容器或隔室中包括:

a.表面,包含(i)用于所述分析物的捕獲試劑,和(ii)包含錨定寡核苷酸序列的錨定試劑;

b.連接到第一核酸探針的用于所述分析物的第一檢測試劑;

c.連接到第二核酸探針的用于所述分析物的第二檢測試劑;和

d.固相,其包含與所述第一核酸探針的至少一部分互補的靶向劑。

52.權利要求51的試劑盒,其中所述固相是顆粒。

53.權利要求51的試劑盒,其中所述捕獲試劑包含抗體、抗原、配體、受體、寡核苷酸、半抗原、表位、模擬表位或適體。

54.權利要求51的試劑盒,其中所述第一檢測試劑包含抗體、抗原、配體、受體、寡核苷酸、半抗原、表位、模擬表位或適體。

55.權利要求51的試劑盒,其中所述第二檢測試劑包含抗體、抗原、配體、受體、寡核苷酸、半抗原、表位、模擬表位或適體。

56.權利要求51的試劑盒,其中所述表面包含多孔板的孔。

57.權利要求56的試劑盒,其中所述表面包含多個不同的結合域,且所述捕獲試劑和所述錨定試劑位于所述表面上的兩個不同的結合域上。

58.權利要求56的試劑盒,其中所述孔包含多個不同的結合域,且所述捕獲試劑和所述錨定試劑位于所述孔內(nèi)的兩個不同的結合域上。

59.權利要求56的試劑盒,其中所述表面包含多個不同的結合域,且所述捕獲試劑和所述錨定試劑位于所述表面上的相同的結合域上。

60.權利要求59的試劑盒,其中所述孔包含多個不同的結合域,且所述捕獲試劑和所述錨定試劑位于所述孔內(nèi)的相同的結合域上。

61.權利要求51的試劑盒,其中所述捕獲試劑和所述錨定試劑在所述表面上的10-100nm內(nèi)。

62.權利要求51的試劑盒,其中所述表面包含電極。

63.檢測樣品中感興趣的分析物的方法,包括:

a.將所述分析物結合到:(i)顆粒上的捕獲試劑,所述顆粒包含用于所述分析物的所述捕獲試劑,和包含錨定寡核苷酸序列的錨定試劑;(ii)連接到第一核酸探針的用于所述分析物的第一檢測試劑;和(iii)連接到第二核酸探針的用于所述分析物的第二檢測試劑;從而在所述表面上形成復合物,所述復合物包含所述結合試劑、所述分析物以及所述第一和所述第二檢測試劑;

b.使用要求所述第一和所述第二探針接近的延伸過程,延伸所述第二探針以形成包含錨定序列互補體的延伸序列,所述互補體與錨定序列互補,其中所述延伸過程在所述顆粒通過重力沉降到多孔板的孔的所述表面上的過程中或之后進行;

c.將所述錨定序列與所述錨定序列互補體雜交;和

d.測量結合到所述顆粒的延伸序列的量。

64.權利要求63的方法,其中所述捕獲試劑是抗體、抗原、配體、受體、寡核苷酸、半抗原、表位、模擬表位或適體。

65.權利要求64的方法,其中所述第一檢測試劑是抗體、抗原、配體、受體、寡核苷酸、半抗原、表位、模擬表位或適體。

66.權利要求65的方法,其中所述第一檢測試劑是抗體。

67.權利要求63的方法,其中所述第二檢測試劑是抗體、抗原、配體、受體、寡核苷酸、半抗原、表位、模擬表位或適體。

68.權利要求63的方法,其中所述捕獲試劑以及所述第一和第二檢測試劑是對所述分析物的抗體。

69.權利要求63的方法,其中所述錨定寡核苷酸序列包含單鏈寡核苷酸序列。

70.權利要求63的方法,其中所述延伸序列還包含一個或多個檢測序列,且測量步驟還包括將所述延伸序列與互補于所述一個或多個檢測序列的多種標記的探針接觸。

71.權利要求63的方法,其中延伸步驟包括PCR(聚合酶鏈式反應)、LCR(連接酶鏈式反應)、SDA(單鏈置換擴增)、3SR(自動維持合成反應),或等溫擴增方法。

72.權利要求71的方法,其中所述延伸步驟包括等溫擴增方法。

73.權利要求72的方法,其中所述等溫擴增方法是解旋酶依賴性擴增或滾環(huán)擴增(RCA)。

74.檢測樣品中感興趣的分析物的方法,包括:

a.將所述分析物結合到:(i)顆粒上的捕獲試劑,所述顆粒包含用于所述分析物的捕獲試劑;(ii)連接到第一核酸探針的用于所述分析物的第一檢測試劑;和(iii)連接到第二核酸探針的用于分析物的第二檢測試劑;從而在所述表面上形成復合物,所述復合物包含所述結合試劑、所述分析物以及所述第一和所述第二檢測試劑;

b.使用要求所述第一和所述第二探針接近的延伸過程,延伸所述第二探針以形成包含錨定序列互補體的延伸序列,所述錨定序列互補體與錨定序列互補,其中所述延伸過程在所述顆粒通過重力沉降到多孔板的孔的所述表面上的過程中或之后進行;

c.測量結合到所述顆粒的延伸序列的量。

75.權利要求74的方法,其中所述捕獲試劑是抗體、抗原、配體、受體、寡核苷酸、半抗原、表位、模擬表位或適體。

76.權利要求74的方法,其中所述第一檢測試劑是抗體、抗原、配體、受體、寡核苷酸、半抗原、表位、模擬表位或適體。

77.權利要求74的方法,其中所述第二檢測試劑是抗體、抗原、配體、受體、寡核苷酸、半抗原、表位、模擬表位或適體。

78.權利要求74的方法,其中所述捕獲試劑以及所述第一和所述第二檢測試劑是對所述分析物的抗體。

79.權利要求74的方法,其中所述延伸序列還包含一個或多個檢測序列,且測量步驟還包括將所述延伸序列與互補于所述一個或多個檢測序列的多種標記的探針接觸。

80.權利要求74的方法,其中延伸步驟包括PCR(聚合酶鏈式反應)、LCR(連接酶鏈式反應)、SDA(單鏈置換擴增)、3SR(自動維持合成反應),或等溫擴增方法。

81.權利要求80的方法,其中所述延伸步驟包括等溫擴增方法。

82.權利要求81的方法,其中所述等溫擴增方法是解旋酶依賴性擴增或滾環(huán)擴增(RCA)。

83.檢測樣品中的外來體的方法,包括:

a.將所述外來體結合到:(i)表面上的捕獲試劑,所述表面包含針對所述外來體的捕獲試劑,和包含錨定寡核苷酸序列的錨定試劑;(ii)連接到第一核酸探針的用于所述外來體的第一檢測試劑;和(iii)連接到第二核酸探針的用于所述外來體的第二檢測試劑;從而在所述表面上形成復合物,所述復合物包含所述結合試劑、所述外來體以及所述第一和所述第二檢測試劑;

b.使用要求所述第一和所述第二探針接近的延伸過程,延伸所述第二探針以形成包含錨定序列互補體的延伸序列,所述互補體與所述錨定序列互補;

c.將所述錨定序列與所述錨定序列互補體雜交;和

d.測量結合到所述表面的延伸序列的量。

84.權利要求83的方法,其中所述捕獲試劑是抗體、抗原、配體、受體、寡核苷酸、半抗原、表位、模擬表位或適體。

85.權利要求83的方法,其中所述第一檢測試劑是抗體、抗原、配體、受體、寡核苷酸、半抗原、表位、模擬表位或適體。

86.權利要求83的方法,其中所述第二檢測試劑是抗體、抗原、配體、受體、寡核苷酸、半抗原、表位、模擬表位或適體。

87.權利要求83的方法,其中所述捕獲試劑以及所述第一和第二檢測試劑是對外來體表面中或表面上的靶分子的抗體。

88.權利要求87的方法,其中所述捕獲試劑結合選自CD9、CD63、CD81、Hsp70、PDCD6IP或Tsg101的共有外來體靶蛋白。

89.權利要求87的方法,其中所述第一或第二檢測試劑中的至少一種是對外來體表面中或表面上的疾病特異性靶分子的抗體。

90.權利要求83的方法,其中所述第一和所述第二檢測試劑各自結合相互作用的外來體靶分子。

91.權利要求90的方法,其中所述相互作用的靶分子包括配體-受體對和/或mRNA分子和RNA結合蛋白。

92.權利要求83的方法,其中所述延伸序列還包含一個或多個檢測序列,且測量步驟還包括將所述延伸序列與互補于所述一個或多個檢測序列的多種標記的探針接觸。

93.權利要求83的方法,其中延伸步驟包括將所述探針結合到模板核酸序列,形成環(huán)形核酸模板,以及通過滾環(huán)擴增延伸所述環(huán)形模板。

94.根據(jù)權利要求83的方法,其中所述延伸的探針在探針延伸之后仍定位在所述表面上。

95.權利要求94的方法,其中所述復合物在延伸步驟后仍結合到所述表面。

96.權利要求94的方法,其中所述延伸的探針在所述表面上的復合物位置的小于100um的位置處結合到所述錨定試劑。

97.權利要求83的方法,其中所述延伸步驟包括PCR(聚合酶鏈式反應)、LCR(連接酶鏈式反應)、SDA(單鏈置換擴增)、3SR(自動維持合成反應),或等溫擴增方法。

98.權利要求97的方法,其中所述延伸步驟包括等溫擴增方法。

99.權利要求98的方法,其中所述等溫擴增方法是解旋酶依賴性擴增或滾環(huán)擴增(RCA)。

100.權利要求83的方法,其中所述延伸過程包括將在步驟(a)中形成的所述復合物與連接子序列接觸,所述連接子序列包含(i)與第二探針互補的內(nèi)部序列和(ii)與第一探針的非重疊區(qū)互補的雙末端序列。

101.權利要求100的方法,還包括連接所述連接子寡核苷酸的雙末端序列以形成與所述第一和第二探針兩者雜交的環(huán)形靶序列。

102.權利要求83的方法,其中所述延伸過程包括將在步驟(a)中形成的所述復合物與第一連接子寡核苷酸序列和第二連接子寡核苷酸序列接觸,所述第一連接子寡核苷酸序列包含互補于所述第一探針的第一區(qū)域和所述第二探針上的第一區(qū)域的第一連接子探針序列,所述第二連接子寡核苷酸包含互補于所述第一探針的第二非重疊區(qū)域和所述第二探針的第二非重疊區(qū)域的第二探針序列。

103.權利要求102的方法,還包括連接所述第一和第二連接子寡核苷酸以形成與所述第一和第二探針兩者雜交的環(huán)形靶序列。

104.權利要求83的方法,其中所述樣品包含純化的外來體。

105.權利要求83的方法,其中測量步驟還包括對存在于所述表面上的擴增子成像。

106.權利要求105的方法,其中用多個熒光探針來標記所述擴增子,并且之后的所述測量步驟包括所述外來體的熒光染色,對熒光標記的擴增子和染色的外來體成像,以及將成像步驟與結果相關聯(lián)。

107.用于檢測樣品中的感興趣的外來體的試劑盒,其在一個或多個小瓶、容器或隔室中包括:

a.表面,包含(i)用于外來體的捕獲試劑,和(ii)包含錨定寡核苷酸序列的錨定試劑;

b.連接到第一核酸探針的用于所述外來體的第一檢測試劑;和

c.連接到第二核酸探針的用于所述外來體的第二檢測試劑。

108.權利要求107的試劑盒,其中所述捕獲試劑包含抗體、抗原、配體、受體、寡核苷酸、半抗原、表位、模擬表位,或適體。

109.權利要求107的試劑盒,其中所述第一檢測試劑包含抗體、抗原、配體、受體、寡核苷酸、半抗原、表位、模擬表位,或適體。

110.權利要求107的試劑盒,其中所述第二檢測試劑包含抗體、抗原、配體、受體、寡核苷酸、半抗原、表位、模擬表位,或適體。

111.權利要求107的試劑盒,其中所述表面包含顆粒。

112.權利要求107的試劑盒,其中所述表面包含多孔板的孔。

113.權利要求107的試劑盒,其中所述表面包含多個不同的結合域,且所述捕獲試劑和所述錨定試劑位于所述表面上的兩個不同的結合域上。

114.權利要求112的試劑盒,其中所述孔包含多個不同的結合域,且所述捕獲試劑和所述錨定試劑位于所述孔內(nèi)的兩個不同的結合域上。

115.權利要求113的試劑盒,其中所述表面包含多個不同的結合域,且所述捕獲試劑和所述錨定試劑位于表面上的相同的結合域上。

116.權利要求112的試劑盒,其中所述孔包含多個不同的結合域,且所述捕獲試劑和所述錨定試劑位于所述孔內(nèi)的相同的結合域上。

117.權利要求107的試劑盒,其中所述捕獲試劑和所述錨定試劑在所述表面上的10-100nm內(nèi)。

118.權利要求107的試劑盒,其中所述表面包含電極。

119.權利要求107的試劑盒,其中所述捕獲試劑結合選自CD9、CD63、CD81、Hsp70、PDCD6IP或Tsg101的共有外來體靶蛋白。

120.權利要求107的試劑盒,其中所述第一和第二檢測試劑各自結合相互作用的外來體靶蛋白。

121.權利要求102的試劑盒,其中相互作用的靶分子包括配體-受體對和/或mRNA分子和RNA結合蛋白。

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