本申請(qǐng)屬于食品檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)，涉及一種粉枝莓果實(shí)香氣成分檢測(cè)方法。

背景技術(shù)：
粉枝莓是薔薇科懸鉤子屬植物中的一種落葉性野生果木，在西藏的分布主要集中于察隅、波密、林芝、米林、拉薩等地。其果實(shí)味甜，聚合漿果，橘紅色，營(yíng)養(yǎng)成分豐富，有機(jī)酸、鐵和鋅含量均高于普通水果數(shù)倍，蛋白質(zhì)、氨基酸和維生素含量也遠(yuǎn)高于普通水果，除可被生食外，也可制作果醬、果汁和釀酒等，具有較高的開(kāi)發(fā)利用價(jià)值。香氣成分是構(gòu)成水果風(fēng)味的重要物質(zhì)，也是決定果實(shí)品質(zhì)的主要因素，研究其香氣成分有助于了解果實(shí)的風(fēng)味化學(xué)組成，對(duì)品種的選育、粉枝莓果實(shí)深加工以及產(chǎn)品質(zhì)量控制都具有重要的意義。氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(GC-MS)廣泛用于果實(shí)香氣成分的測(cè)定，為香氣成分的研究提供了更簡(jiǎn)便和準(zhǔn)確的方法，但前處理時(shí)通常需要通過(guò)水蒸氣蒸餾、液-液萃取、超臨界萃取等技術(shù)，這些技術(shù)都不同程度地存在著所需樣品量大、耗時(shí)長(zhǎng)、高溫或使用大量有機(jī)溶劑等缺陷。固相微萃取(SPME)技術(shù)是一種新型的無(wú)溶劑樣品預(yù)處理技術(shù)，這種技術(shù)集取樣、萃取、濃縮和進(jìn)樣為一體，具有操作簡(jiǎn)單、樣品用量小、無(wú)需使用溶劑、萃取樣品后可直接色譜進(jìn)樣等優(yōu)點(diǎn)，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于食品、環(huán)境、醫(yī)藥等領(lǐng)域。萃取裝置的核心部件是其用于吸附香氣物質(zhì)的纖維頭，不同種類(lèi)涂層的纖維頭有著不同的性能，對(duì)不同揮發(fā)物的萃取效果影響很大，所以纖維頭的選擇是決定香氣成分分析的關(guān)鍵。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
有鑒于此，本申請(qǐng)所要解決現(xiàn)有香氣成分檢測(cè)方法所需樣品量大、耗時(shí)長(zhǎng)、高溫或使用大量有機(jī)溶劑等缺陷，提供一種頂空固相微萃取(HS-SPME)結(jié)合氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)的粉枝莓果實(shí)香氣成分檢測(cè)方法。為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本申請(qǐng)公開(kāi)了一種粉枝莓果實(shí)香氣成分檢測(cè)方法，將頂空固相微萃取結(jié)合氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用，對(duì)粉枝莓果實(shí)香氣成分進(jìn)行檢測(cè)，包括以下步驟：(1)固相微萃取纖維頭的前處理：取PA萃取纖維頭插入氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀的進(jìn)樣口，250℃，老化30min，然后進(jìn)行空白實(shí)驗(yàn)，直至無(wú)色譜峰出現(xiàn)；(2)頂空固相微萃取提取揮發(fā)性成分：取粉枝莓新鮮果實(shí)，勻漿后置于固相微萃取儀頂空瓶中，用手動(dòng)進(jìn)樣器將步驟(1)中的前處理后的所述PA萃取纖維頭插入所述頂空瓶?jī)?nèi)，40-60℃平衡10min，再頂空萃取30-40min，取出所述PA萃取纖維頭，立即插入氣相色譜儀進(jìn)樣口，進(jìn)樣口溫度為240-260℃，解析3-5min，進(jìn)樣模式為不分流進(jìn)樣；(3)氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用對(duì)粉枝莓果實(shí)香氣成分的定性分析：通過(guò)化學(xué)工作站檢索NIST05和NIST05s標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖庫(kù)，同時(shí)結(jié)合有關(guān)質(zhì)譜圖文獻(xiàn)解析，確定粉枝莓果實(shí)香氣成分；(4)氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用對(duì)粉枝莓果實(shí)香氣成分的定量分析：通過(guò)化學(xué)工作站數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，按峰面積歸一化法進(jìn)行計(jì)算，求出各組分的相對(duì)百分含量。進(jìn)一步的，所述氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析條件為：色譜條件：色譜柱為RTX-5MS彈性石英毛細(xì)管柱；進(jìn)樣口溫度240-260℃；載氣為氦氣，純度≥99.999％，柱流速0.9-1.0mL·min-1，不分流；程序升溫：初始溫度50-60℃，保持1min，以6℃·min-1升至180℃，保持1min，再以20℃·min-1升至200-220℃，保持5min；質(zhì)譜條件：離子化方式為EI；離子源溫度220-250℃；傳輸線(xiàn)溫度250-270℃；電子能量70eV；掃描方式為全掃描；掃描質(zhì)量范圍為35-500m/z。進(jìn)一步的，所述步驟(2)中所述PA萃取纖維頭在頂空瓶中的平衡溫度為60℃，所述頂空萃取時(shí)間為30min，所述進(jìn)樣口溫度為250℃，解析時(shí)間為3min。進(jìn)一步的，所述色譜條件：色譜柱為RTX-5MS彈性石英毛細(xì)管柱；進(jìn)樣口溫度250℃；載氣為氦氣，純度≥99.999％，柱流速0.9mL·min-1，不分流；程序升溫：初始溫度60℃，保持1min，以6℃·min-1升至180℃，保持1min，再以20℃·min-1升至200℃，保持5min。進(jìn)一步的，所述質(zhì)譜條件：離子化方式為EI；離子源溫度220℃；傳輸線(xiàn)溫度250℃；電子能量70eV；掃描方式為全掃描；掃描質(zhì)量范圍為35-500m/z。進(jìn)一步的，所述空白試驗(yàn)方法為將所述PA萃取纖維頭插入空白頂空瓶?jī)?nèi)，40-60℃平衡10min，再頂空萃取30-40min，取出所述PA萃取纖維頭，立即插入氣相色譜儀進(jìn)樣口，進(jìn)樣口溫度為240-260℃，解析3-5min，進(jìn)樣模式為不分流進(jìn)樣。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本申請(qǐng)可以獲得包括以下技術(shù)效果：1)本申請(qǐng)的檢測(cè)方法，樣品用量少，萃取過(guò)程中無(wú)需使用溶劑，萃取速度快，萃取樣品可直接進(jìn)行色譜檢測(cè)，操作簡(jiǎn)便、富集效率高。2)本申請(qǐng)的檢測(cè)方法，能夠簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)出粉枝莓果實(shí)香氣成分，為了解粉枝莓果實(shí)的風(fēng)味化學(xué)組成、指導(dǎo)粉枝莓的品種選育、開(kāi)展粉枝莓果實(shí)的深加工及產(chǎn)品質(zhì)量控制奠定基礎(chǔ)。當(dāng)然，實(shí)施本申請(qǐng)的任一產(chǎn)品必不一定需要同時(shí)達(dá)到以上所述的所有技術(shù)效果。附圖說(shuō)明此處所說(shuō)明的附圖用來(lái)提供對(duì)本申請(qǐng)的進(jìn)一步理解，構(gòu)成本申請(qǐng)的一部分，本申請(qǐng)的示意性實(shí)施例及其說(shuō)明用于解釋本申請(qǐng)，并不構(gòu)成對(duì)本申請(qǐng)的不當(dāng)限定。在附圖中：圖1為本申請(qǐng)粉枝莓果實(shí)香氣成分檢測(cè)方法實(shí)施例中三種固相微萃取纖維頭對(duì)粉枝莓果實(shí)香氣成分分析的總離子流圖。具體實(shí)施方式以下將配合附圖及實(shí)施例來(lái)詳細(xì)說(shuō)明本申請(qǐng)的實(shí)施方式，藉此對(duì)本申請(qǐng)如何應(yīng)用技術(shù)手段來(lái)解決技術(shù)問(wèn)題并達(dá)成技術(shù)功效的實(shí)現(xiàn)過(guò)程能充分理解并據(jù)以實(shí)施。實(shí)施例一、儀器與材料氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(QP2010plusGC-MS，日本Shimadzu公司)；100μmPDMS(聚二甲基硅氧烷)纖維頭、7μmPDMS(聚二甲基硅氧烷)纖維頭、85μmPA(聚丙烯酸酯)纖維頭，美國(guó)Supelco公司；成熟粉枝莓果實(shí)(采自西藏林芝八一鎮(zhèn))。二、檢測(cè)方法2.1固相微萃取纖維頭的前處理分別取PDMS(7μm)、PDMS(100μm)和PA(85μm)三種萃取纖維頭插入氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀的進(jìn)樣口，250℃，老化30min，然后進(jìn)行空白實(shí)驗(yàn)。將老化后的PDMS(7μm)、PDMS(100μm)和PA(85μm)三種萃取纖維頭分別插入空白頂空瓶?jī)?nèi)，60℃平衡10min，再頂空萃取30min，取出三種萃取纖維頭，立即分別插入氣相色譜儀進(jìn)樣口，進(jìn)樣口溫度為250℃，解析3min，進(jìn)樣模式為不分流進(jìn)樣。重復(fù)老化步驟和空白試驗(yàn)，直至無(wú)色譜峰出現(xiàn)即為前處理完成。2.2頂空固相微萃取提取揮發(fā)性成分稱(chēng)取粉枝莓新鮮果實(shí)5.0g，勻漿，裝入15mL帶有聚四氟乙烯密封的頂空瓶中，密封。分別將老化后的PDMS(7μm)、PDMS(100μm)和PA(85μm)萃取纖維頭的固相萃取針穿過(guò)密封塞插入頂空瓶中，推出萃取頭，60℃水浴平衡10min，再頂空萃取30min，然后將三種萃取纖維頭取出，分別立即插入氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC-MS)進(jìn)樣口，進(jìn)樣口溫度250℃，解析3min，不分流進(jìn)樣，進(jìn)行GC-MS檢測(cè)。2.3氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析條件色譜條件：色譜柱：RTX-5MS(0.25mm×30m，0.25μm)彈性石英毛細(xì)管柱，日本Shimadzu公司；進(jìn)樣口溫度：250℃；載氣：氦氣，純度≥99.999％，柱流速0.9mL·min-1，不分流；程序升溫：初始溫度60℃，保持1min，以6℃·min-1升至180℃，保持1min，再以20℃·min-1升至200℃，保持5min。質(zhì)譜條件：離子源溫度220℃；傳輸線(xiàn)溫度250℃；離子化方式：EI；電子能量：70eV；掃描方式：全掃描；掃描質(zhì)量范圍：35-500m/z。2.4香氣成分的定性與定量分析各組分通過(guò)NIST05和NIST05s質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)檢索，根據(jù)質(zhì)譜的匹配度和文獻(xiàn)已報(bào)道物質(zhì)進(jìn)行核對(duì)解析，確定粉枝莓果實(shí)香氣成分；同時(shí)通過(guò)化學(xué)工作站數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，采用峰面積歸一化法計(jì)算粉枝莓果實(shí)香氣成分的相對(duì)含量。三、結(jié)果采用三種固相微萃取纖維頭分別進(jìn)行粉枝莓樣品SPME-GC/MS的全掃描分析，總離子流圖見(jiàn)圖1，圖中A為85μmPA纖維頭檢測(cè)結(jié)果；B為100μmPDMS纖維頭檢測(cè)結(jié)果；C為7μmPDMS纖維頭檢測(cè)結(jié)果。由圖1可見(jiàn)，在其它條件相同的情況下，85μmPA纖維頭的靈敏度最高、檢出物質(zhì)最多，100μmPDMS纖維頭的靈敏度和檢出物質(zhì)居中，7μmPDMS纖維頭靈敏度最低，檢出物質(zhì)最少。采用SPME-GC/MS對(duì)粉枝莓果實(shí)香氣成分進(jìn)行分析，共鑒定出27種香氣成分(表1)，其中醇類(lèi)11種、醛類(lèi)8種、羧酸類(lèi)5種、酮類(lèi)2種、烯類(lèi)1種，分別占已檢出香氣成分總數(shù)的40.7％、29.6％、18.5％、7.4％、3.7％，說(shuō)明醇類(lèi)、醛類(lèi)和羧酸類(lèi)物質(zhì)在粉枝莓果實(shí)香味中起重要作用。表1SPME-GC-MS鑒定的粉枝莓果實(shí)香氣成分表1表明，85μmPA纖維頭檢出的物質(zhì)最多(24種)，其余依次是100μmPDMS(19種)和7μmPDMS(6種)。三種纖維頭均檢出了橙花醇、橙花醛、香葉醇、香葉醛、香葉酸和月桂醇6種香氣成分，其中橙花醇、橙花醛、香葉醇、香葉醛和香葉酸的含量相對(duì)較高(表2)，是粉枝莓果實(shí)的特征香氣成分。表2不同纖維頭對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響如表2所示，使用85μmPA纖維頭檢測(cè)到的6種物質(zhì)總峰面積之和分別是100μmPDMS和7μmPDMS的2.1和16.3倍，這意味著85μmPA纖維頭對(duì)粉枝莓樣品有著最大吸附。本申請(qǐng)的檢測(cè)方法，樣品用量少，萃取過(guò)程中無(wú)需使用溶劑，萃取速度快，萃取樣品可直接進(jìn)行色譜檢測(cè)，操作簡(jiǎn)便、富集效率高。能夠簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)出粉枝莓果實(shí)香氣成分，為了解粉枝莓果實(shí)的風(fēng)味化學(xué)組成、指導(dǎo)粉枝莓的品種選育、開(kāi)展粉枝莓果實(shí)的深加工及產(chǎn)品質(zhì)量控制奠定基礎(chǔ)。如在說(shuō)明書(shū)及權(quán)利要求當(dāng)中使用了某些詞匯來(lái)指稱(chēng)特定成分或方法。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)可理解，不同地區(qū)可能會(huì)用不同名詞來(lái)稱(chēng)呼同一個(gè)成分。本說(shuō)明書(shū)及權(quán)利要求并不以名稱(chēng)的差異來(lái)作為區(qū)分成分的方式。如在通篇說(shuō)明書(shū)及權(quán)利要求當(dāng)中所提及的“包含”為一開(kāi)放式用語(yǔ)，故應(yīng)解釋成“包含但不限定于”。“大致”是指在可接收的誤差范圍內(nèi)，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠在一定誤差范圍內(nèi)解決所述技術(shù)問(wèn)題，基本達(dá)到所述技術(shù)效果。說(shuō)明書(shū)后續(xù)描述為實(shí)施本申請(qǐng)的較佳實(shí)施方式，然所述描述乃以說(shuō)明本申請(qǐng)的一般原則為目的，并非用以限定本申請(qǐng)的范圍。本申請(qǐng)的保護(hù)范圍當(dāng)視所附權(quán)利要求所界定者為準(zhǔn)。還需要說(shuō)明的是，術(shù)語(yǔ)“包括”、“包含”或者其任何其他變體意在涵蓋非排他性的包含，從而使得包括一系列要素的商品或者系統(tǒng)不僅包括那些要素，而且還包括沒(méi)有明確列出的其他要素，或者是還包括為這種商品或者系統(tǒng)所固有的要素。在沒(méi)有更多限制的情況下，由語(yǔ)句“包括一個(gè)……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的商品或者系統(tǒng)中還存在另外的相同要素。上述說(shuō)明示出并描述了本申請(qǐng)的若干優(yōu)選實(shí)施例，但如前所述，應(yīng)當(dāng)理解本申請(qǐng)并非局限于本文所披露的形式，不應(yīng)看作是對(duì)其他實(shí)施例的排除，而可用于各種其他組合、修改和環(huán)境，并能夠在本文所述申請(qǐng)構(gòu)想范圍內(nèi)，通過(guò)上述教導(dǎo)或相關(guān)領(lǐng)域的技術(shù)或知識(shí)進(jìn)行改動(dòng)。而本領(lǐng)域人員所進(jìn)行的改動(dòng)和變化不脫離本申請(qǐng)的精神和范圍，則都應(yīng)在本申請(qǐng)所附權(quán)利要求的保護(hù)范圍內(nèi)。