本發(fā)明屬于代謝組學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。具體涉及一種肉質(zhì)評定的代謝組學(xué)方法。

背景技術(shù)：
我國人均肉的食用量從1978年的9公斤增至2014年的66公斤，增加了7倍以上。2014年我國豬肉總產(chǎn)量達(dá)5671萬噸，占肉類總產(chǎn)量的65％，占全球豬肉總產(chǎn)量的50％左右，為國民經(jīng)濟(jì)增長和人民生活水平的提高做出了重要貢獻(xiàn)。經(jīng)過畜牧業(yè)30多年的蓬勃發(fā)展，我國在豬肉供應(yīng)方面基本解決了吃肉難的問題。但隨著人們生活水平的提高，消費(fèi)者對豬肉品質(zhì)的要求越來越高，養(yǎng)豬業(yè)經(jīng)歷著從數(shù)量增長向數(shù)量和質(zhì)量并重發(fā)展的轉(zhuǎn)變。然而，長期以來對“快長”和“高產(chǎn)”的盲目追求導(dǎo)致豬肉品質(zhì)的顯著下降。系水力降低，嫩度、風(fēng)味下降，嚴(yán)重影響冷鮮肉的貨架期以及肉的加工性能，不僅引起廣大消費(fèi)者的抱怨，還造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前我國豬肉出口占總產(chǎn)量的比重不到3％，而且豬肉進(jìn)口量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過出口量，這與世界第一養(yǎng)豬大國的地位極不相稱。由此，在保障豬肉數(shù)量穩(wěn)步增加的同時(shí)，提高豬肉品質(zhì)，是滿足人民日益增長的對優(yōu)質(zhì)豬肉的需求、增強(qiáng)我國豬肉產(chǎn)品在國際市場的競爭力和確保養(yǎng)豬業(yè)可持續(xù)發(fā)展的關(guān)鍵。與肉質(zhì)相關(guān)的成分分析研究中，最為普遍的方法是氨基酸和短鏈脂肪酸的檢測方法。由于進(jìn)行氨基酸檢測時(shí)，需要高溫(110℃)和強(qiáng)酸條件下消解2，無法保留肌肉代謝物的原貌，比如肌糖原。特別是長鏈、中鏈和短鏈脂肪酸，而脂肪酸的檢測方法也不能同時(shí)檢測氨基酸等其他的代謝物。在肉質(zhì)的評定中，甲酸、乙酸、丙酸和丁酸等短鏈脂肪酸是十分重要的風(fēng)味物質(zhì)。隨著代謝組學(xué)研究的不斷深入和研究領(lǐng)域的不斷拓展，組織代謝組學(xué)研究也成為了目前代謝組學(xué)的熱點(diǎn)應(yīng)用領(lǐng)域之一。代謝組的研究方法，不僅可以對肌肉中肌酸和氨基酸等主要組成成分進(jìn)行表征，也能對肌間脂肪中含有的短鏈脂肪酸等風(fēng)味物質(zhì)進(jìn)行表征，還能對影響肉質(zhì)的乳酸等物質(zhì)進(jìn)行表征。通過代謝組學(xué)的方法對肉質(zhì)進(jìn)行評定，一方面可以對代謝物進(jìn)行定性定量，另一方面，也為肉質(zhì)的指紋圖譜建立提供了新的可利用途徑。目前關(guān)于肉質(zhì)代謝組的研究剛剛起步，尚有諸多方法學(xué)問題有待解決。一方面，肉質(zhì)的評定的指標(biāo)很多，傳統(tǒng)指標(biāo)包括肉色、肌肉系水力、風(fēng)味、肌肉pH值、滴水損失、大理石紋、嫩度、風(fēng)味、多汁性等，肌肉代謝組學(xué)分析結(jié)果與這些傳統(tǒng)指標(biāo)之間是什么樣的關(guān)系？代謝物是否能夠提取完全就會對代謝組學(xué)技術(shù)用于肉質(zhì)評定產(chǎn)生較大的影響，這就要找到適用于肉質(zhì)代謝組學(xué)分析的提取方法。另一方面，還要建立不同部位和不同等級肉質(zhì)的代謝組學(xué)指紋圖譜。這需要找到適合于不同部位和不同肉質(zhì)等級的肌肉進(jìn)行提取的方法。由于代謝組學(xué)分析需要保持代謝物的原貌而且力圖檢測到盡量多的代謝物，這就需要對目前存在的提取方法進(jìn)行篩選和優(yōu)化，避免過于劇烈(高溫、強(qiáng)酸、強(qiáng)堿等)、操作過于繁瑣和提取效率較低的提取方法，進(jìn)而找到適合于肉質(zhì)評定代謝組學(xué)分析的提取方法。所以，對于基于NMR的代謝組學(xué)研究中，找到針對于肉質(zhì)分析的提取方法是十分必要的?，F(xiàn)有陸寬等采用的肌肉中氨基酸提取方法。具體方法如下：稱取新鮮雞肉0.5g置于安培瓶中，加入6mol/L鹽酸10ml后混勻，密封。110℃消化24h，采用去離子水定容至10mL，吸取1mL于5mL容量瓶內(nèi)，40-50℃真空干燥，殘留物用1mL水溶解，再干燥，反復(fù)進(jìn)行兩次，最后蒸干，用pH值2.2的緩沖液1mL溶解，經(jīng)0.25m微孔濾膜過濾，用L-8800型全自動氨基酸分析儀測定16種氨基酸(Phe、Thr、Ser、Glu、Pro、Gly、Ala、Val、Met、Leu、Ile、Tyr、Asp、His、Lys和Arg)的含量，然后乘以稀釋倍數(shù)換算成肉中氨基酸的含量。但采用濃鹽酸高溫消解肌肉中蛋白質(zhì)和氨基酸，具有耗時(shí)，環(huán)境污染大等缺點(diǎn)?，F(xiàn)有肉和肉制品脂肪酸提取方法。郭建鳳等取肌肉樣品100g，置于50mL燒瓶中，加入2％氫氧化鈉甲醇溶液4mL，然后將冷凝管固定于燒瓶上，水浴上回流，直至沒有脂肪滴下。再加15％三氟化硼甲醇溶液5mL到沸騰的溶液中，加庚烷2mL，繼續(xù)沸騰1min后，停止加熱。冷卻至室溫后，移去冷凝管，加入少量飽和氯化鈉溶液并輕搖燒瓶數(shù)次，繼續(xù)加入飽和氯化鈉溶液至燒瓶頸部。吸取上層庚烷溶液約1mL于試管中，加適量無水硫酸鈉脫水。此溶液含脂肪酸甲酯約100mg/mL，取0.1mL立即采用氣相色譜儀(VARIANCP-3800，美國)測定脂肪酸甲酯的濃度，最后經(jīng)過換算得到棕櫚酸、硬脂酸、油酸和亞油酸濃度。但采用三氟化硼和甲醇提取脂肪酸，操作較為繁瑣，具有毒性大、耗時(shí)較長，環(huán)境污染大等缺點(diǎn)。雖然可以同時(shí)測定棕櫚酸、硬脂酸、油酸和亞油酸的濃度，但不能同時(shí)檢測甲酸、乙酸、丙酸和丁酸等短鏈脂肪酸，也不能同時(shí)檢測氨基酸以及其他的化合物。現(xiàn)有技術(shù)包括氨基酸提取工藝、脂肪酸提取工藝等，提取操作程序復(fù)雜，耗時(shí)較長，由于使用大量有毒試劑和有機(jī)溶劑，成本高，環(huán)境污染較大，也無法實(shí)現(xiàn)肌肉所有組分的同時(shí)檢測。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明旨在克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種肉質(zhì)評定的代謝組學(xué)方法。為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供的技術(shù)方案為：所述肉質(zhì)評定的代謝組學(xué)方法包括如下步驟：(1)將肉樣品加入提取溶液中，液氮速凍后超聲處理，解凍后進(jìn)行肉樣品破碎，得破碎后的肉樣品；將破碎后的肉樣品再重復(fù)進(jìn)行液氮速凍、超聲處理、解凍和破碎過程，重復(fù)1—5次，優(yōu)選3次，得肉樣品液；所述肉樣品與提取溶液的質(zhì)量體積比為(2—20):1，質(zhì)量體積比中質(zhì)量單位為g，體積單位為mL；所述提取溶液為氯仿、乙腈和水的混合液，乙腈和水的混合液，氯仿、甲醇和水的混合液，或者甲醇和水的混合液中的一種；所述氯仿、乙腈和水的混合液中，氯仿、乙腈和水的體積比為1:(0.8—1.2):(0.8—1.2)；所述乙腈和水的混合液中，乙腈和水的體積比為1:(0.8—1.2)；所述氯仿、甲醇和水的混合液中，氯仿、甲醇和水的體積比為1:(0.8—1.2):(0.8—1.2)；所述甲醇和水的混合液中，甲醇和水的體積比為1:(0.8—1.2)；(2)收集肉樣品液中的水相，將水相于液氮速凍、干燥后，與磷酸鹽緩沖液混合，然后離心，取上清液進(jìn)行核磁共振檢測或高效液相-質(zhì)譜聯(lián)用檢測，以評定肉質(zhì)；所述磷酸鹽緩沖液體積與水相被收集初始體積之比為1：(0.4—0.7)。優(yōu)選地，步驟(1)中所述氯仿、乙腈和水的混合液中，氯仿、乙腈和水的體積比為1:1:1；所述乙腈和水的混合液中，乙腈和水的體積比為1:1；所述氯仿、甲醇和水的混合液中，氯仿、甲醇和水的體積比為1:1:1；所述甲醇和水的混合液中，甲醇和水的體積比為1:1。優(yōu)選地，步驟(1)中所述提取溶液為氯仿、乙腈和水的混合液。優(yōu)選地，步驟(1)中所述肉樣品與提取溶液的質(zhì)量體積比為10:1。優(yōu)選地，步驟(1)中超聲處理?xiàng)l件為20—22KHz，2—5min。優(yōu)選地，步驟(2)所述磷酸鹽緩沖液(pH值7.0—8.0，優(yōu)選pH值7.6；0.005—0.1％TSP，優(yōu)選0.01％TSP；10—100％重水，優(yōu)選100％重水)濃度為0.1M或1M。本發(fā)明所述的核磁共振檢測為常規(guī)方法。本發(fā)明采用氯仿、乙腈和水混合液提取，采用核磁共振分析的代謝組學(xué)新方法，不僅保證了肉質(zhì)代謝物組成的原貌，將核磁譜峰漂移減小到最低程度，提高了核磁譜圖的質(zhì)量，同時(shí)簡化了提取工藝流程，并通過代謝組學(xué)分析很好對不同肉質(zhì)進(jìn)行了區(qū)分?？蓹z測代謝物42種，其中氨基酸19種，短鏈脂肪酸3種，味覺相關(guān)代代謝物7種，三羧酸循環(huán)代謝物5種，脂質(zhì)代謝物8種。整個(gè)提取過程僅需24h，譜峰漂移受pH值影響很小。采用此提取方法，對背最長肌、腰大肌和股大肌的組成進(jìn)行了全譜分析，很好地進(jìn)行了代謝組學(xué)區(qū)分，建立了相應(yīng)的代謝指紋圖譜。采用主成分分析技術(shù)，對不同肉質(zhì)進(jìn)行了很好的區(qū)分，該提取方法不僅提高了代謝物的提取率，提高了核磁譜圖的質(zhì)量，而且簡化了提取流程，實(shí)現(xiàn)了肉質(zhì)的代謝組學(xué)評定?？傊?，本發(fā)明為了在既保證肌肉代謝物提取率的前提下，又最大程度的簡化提取工藝，降低提取成本。本發(fā)明采用氯仿、乙腈和水混合液的提取法替代鹽酸消解和脂肪酸提取法，同時(shí)簡化提取流程，盡量減少操作對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，保持肌肉代謝物組成的原貌。并在樣品凍干后采用磷酸緩沖液溶解后進(jìn)行核磁共振測定，以保證核磁譜峰漂移最小，最終達(dá)到既保證水溶性代謝物的提取效率最高，又能夠很好對不同肉質(zhì)進(jìn)行區(qū)分，為肉質(zhì)的評定提供一種新的代謝組學(xué)分析方案。附圖說明圖1為NMR譜積分后主成分分析的得分圖(pH值7.0(■）、7.2(▲)、7.4(●)、7.6(◇)、7.8(○)、8.0(□))，從三維空間的分布來看，pH值從7.0到8.0，在7.4、7.6和7.8出現(xiàn)了明顯的聚類；圖2為提取磷酸鹽緩沖液中重水含量為5％、10％、50％和100％的壓水峰核磁譜圖(1為5％重水，2為10％重水，3為50％重水，4為100％重水)；圖3為提取緩沖液中TSP濃度為0.01％、0.05％和0.1％的譜峰；圖4為豬背最長肌一維NMR標(biāo)準(zhǔn)圖譜，檢測到代謝物包括：1，Isoleucine；2，Leucine；3，Valine；4，Lysine；5，Alanine；6，Arginine；7，Methionine；8，Glutamate；9，Glutamine；10，Proline；11，Threonine；12，Glycine；13，Tyrosine；14，1-methylhistidine；15，Phenylalanine；16，Creatine；17，Creatinine；18，Lactate；19，Pyruvate；20，Succinate；21，F(xiàn)umarate；22，β-Glucose；23，α-Glucose；24，Acetate；25，β-Hydroxyisobutyrate；26，F(xiàn)ormate；27，Trimethylamine；28，TMAO；29，myo-Inositol；30，Histidine；31，Choline；32，GPC；33，Lipids(triglyceridesandfattyacids)；34，Unsaturatedlipids；35，LDL；36，VLDL；37，Dimethylamine；38，Albumin；39，α-Ketoglutarate；40，Aspartate；41，Guanine；42，Adenosine；圖5為豬背最長肌(■)、腰大肌(▲)和股大肌(●)代謝組分析的得分圖。具體實(shí)施方式1實(shí)驗(yàn)方法1.1肉樣品豬背最長肌、腰大肌、股大肌1.2實(shí)驗(yàn)設(shè)備分析天平(SartoriusBS110S)，德國Sartorius公司；微量加樣器，美國Thermo公司；酸度計(jì)(HANNApH211型)，意大利HANNA公司；漩渦振蕩器(SI-Vortex-Genie2型)，美國ScientificIndustries公司；低溫冷凍大容量離心機(jī)(AnkeDL-4000B型)，上海安亭科學(xué)儀器廠；超低溫冰箱(SANYOUltralowfreezer)，日本SANYO公司；BrukerAvanceDRX-600高分辨核磁共振譜儀，德國BrukerBiospin公司。1.3本發(fā)明樣品提取方法如下：稱量新鮮(或-80℃冷凍儲存后解凍)的肉樣0.1g，加入到2mL離心管中，加入氯仿、乙腈和水(1：1：1)混合溶液1mL，液氮速凍后，超聲(20KHz，2min)，解凍后，置于組織破碎儀中(20Hz，30s)，如此反復(fù)凍融、超聲和破碎處理3個(gè)循環(huán)。分別收集水相和油相至2mL離心管中，水相采用液氮速凍后，置于冷凍干燥機(jī)(-40℃)12h，在凍干的離心管中加入0.1M磷酸鹽緩沖液(pH值7.6，0.01％TSP，100％重水)1.0mL。最后，4℃，12000rpm離心10min，取上清液0.8mL加入5mm核磁管經(jīng)核磁共振檢測。1.4本發(fā)明核磁共振檢測方法如下：在BrukerAvanceDRX-600高分辨核磁共振譜儀(BrukerBiospin,Rheinstetten,Germany)上進(jìn)行NMR檢測，1H頻率為600.11MHz，配備三共振高分辨探頭。采樣溫度為298K，采樣次數(shù)為128次，譜寬20ppm。每個(gè)樣品采樣前控溫至少5分鐘，每個(gè)樣品的90°脈沖寬度調(diào)整為10μs左右，等待時(shí)間(Recycledelay，RD)為2s(期間進(jìn)行預(yù)飽和壓水)。每個(gè)樣品分別進(jìn)行預(yù)飽和壓水峰的NOESYPR1D(RD-90°-t1-90°-tm-90°-ACQ)實(shí)驗(yàn)，其中脈沖延遲時(shí)間t1為3μs，混合時(shí)間tm為100ms，在tm和弛豫延遲期間進(jìn)行預(yù)飽和壓水。采用Amix(V3.9.15,BrukerBiospin,Germany)軟件對肉提取液的1HNOESY譜進(jìn)行自動積分。為了消除殘余水峰對分析造成的影響，將水峰所在的δ4.55-5.16區(qū)間的積分值去掉。將NMR譜的δ0.5-4.55和δ5.16-8.5ppm區(qū)間的積分值進(jìn)行歸一化處理(每個(gè)區(qū)間的積分值與總積分值的比值)，積分間隔0.002ppm。隨后將歸一化的數(shù)據(jù)導(dǎo)入SIMCA-P+11.0軟件包(Umetrics,Sweden)進(jìn)行多變量分析。首先通過主成分分析法對樣品的群體聚類情況進(jìn)行分析，PCA結(jié)果用得分圖來表示。1.5pH值對肉中主要代謝物化學(xué)位移的影響評價(jià)采用TopSpin3.2軟件觀察并記錄肉提取液中的主要代謝物，如，氨基酸類(亮氨酸、丙氨酸、組氨酸、甘氨酸等)、有機(jī)酸(甲酸、乙酸、丁酸和乳酸等)、葡萄糖(α-葡萄糖和β-葡萄糖)的化學(xué)位移，研究它們隨著pH變化時(shí)的變化幅度。PCA的得分圖如圖1所示，由于培養(yǎng)上清的成分基本一致，導(dǎo)致樣品之間的不同聚類主要來至pH值的變化，樣品點(diǎn)之間的距離也就代表了pH值對肉提取物中代謝物化學(xué)位移的影響，距離近則影響小，距離遠(yuǎn)則影響大。從圖1中可知，隨著pH值從7.0變化到8.0，樣品在得分圖的PC1維、PC2維和PC3維表現(xiàn)為分布的連續(xù)變化。如果以得分圖上點(diǎn)的距離代表pH值對代謝物化學(xué)位移的影響，則可發(fā)現(xiàn)如下變化：從pH值7.0到pH值7.4，樣品點(diǎn)分布的變化較大，而從pH值7.4到pH值7.8，則變化相對較小。而且，在得分圖上明顯出現(xiàn)一個(gè)聚類，即pH值7.4到pH值7.8(如圖1所示，●、◇和○所在的聚類)。這可能與肉組成中主要以氨基酸和有機(jī)酸等偏酸性化合物為主有關(guān)，偏酸性化合物在中性和堿性環(huán)境中，其核磁波譜化學(xué)位移會比較穩(wěn)定。因此，本方法中所述的磷酸鹽緩沖液pH值條件為7.0-8.0，更優(yōu)選7.6。1.6不同提取方法之間的提取效率比較1.6.1提取溶液與樣品比例的優(yōu)化由于提取溶液與肉樣的比例越大，提取代謝物的效率會越高，但是會增加提取液的體積從而影響冷凍干燥的時(shí)間，也會影響批量操作的便利性和導(dǎo)致試劑的浪費(fèi)。通過比較實(shí)際批量操作過程中的速度和便利性(提取溶液與肉比例為20：1、10：1、5：1和2：1)之間的信噪比。結(jié)果表明，提取溶液與肉比例最優(yōu)為10：1。1.6.2提取溶液組成的優(yōu)化(見表1)常見組織提取液為氯仿、乙腈和水的混合物或者氯仿、甲醇和水的混合物。在溶液與樣品比例為10：1的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步優(yōu)化提取溶液的組成。去除譜圖中的4.55-5.16ppm水峰后，以0.002ppm的積分區(qū)間采用Amix(Bruker,Germany)軟件對壓水的NOESY1H譜的8.5-5.16ppm和4.55-0.5ppm以進(jìn)行自動積分(絕對值)，并以TSP的積分值(0.018ppm至-0.018ppm)為1進(jìn)行歸一化，以不同混合提取溶液的歸一化積分值之和評價(jià)提取效率。不同混合提取溶液的產(chǎn)量如表1所示，氯仿、乙腈和水(1：1：1)的產(chǎn)量最高。因此，所述的提取溶液組成為氯仿、乙腈和水(1：1：1)、乙腈和水(1：1)、氯仿、甲醇和水(1：1：1)、甲醇和水(1：1)，更優(yōu)選氯仿、乙腈和水(1：1：1)。表1不同混合提取溶液之間的產(chǎn)量比較注：ab，代表不同混合提取溶液之間的積分值的差異顯著性(P<0.05)*以氯仿、乙腈和水(1：1：1)提取積分值為100％換算得到的提取率。1.6.3破碎處理方式的優(yōu)化(見表2)在氯仿、乙腈和水(1：1：1)提取液的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步優(yōu)化破碎處理方式。去除譜圖中的4.55-5.16ppm水峰后，以0.002ppm的積分區(qū)間采用Amix(Bruker,Germany)軟件對壓水的NOESY1H譜的8.5-5.16ppm和4.55-0.5ppm以進(jìn)行自動積分(絕對值)，并以TSP的積分值(0.018ppm至-0.018ppm)為1進(jìn)行歸一化，以不同提取方法的歸一化積分值之和評價(jià)提取效率。凍融、超聲和破碎循環(huán)次數(shù)不同的產(chǎn)量如表2所示，隨著循環(huán)次數(shù)從高至低依次為：循環(huán)4次>循環(huán)3次>循環(huán)2次>循環(huán)1次，說明隨著循環(huán)次數(shù)的增加，提取效率會增加，循環(huán)次數(shù)從1次增加到3次，提取效率有顯著提高(P<0.05)，而循環(huán)次數(shù)從3次增加到4次，沒有明顯差異(P>0.05)。說明循環(huán)3次可以達(dá)到最優(yōu)化循環(huán)次數(shù)。因此，所述的破碎處理方式為凍融、超聲和破碎1-4個(gè)循環(huán)，更優(yōu)選3個(gè)循環(huán)。表2凍融、超聲和破碎循環(huán)次數(shù)不同之間的產(chǎn)量比較注：abc，代表不同提取次數(shù)之間的積分值的差異顯著性(P<0.05)1.6.4重復(fù)提取次數(shù)的優(yōu)化(見表3)在溶液與肉樣破碎處理方式為凍融、超聲和破碎循環(huán)3次的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步破碎提取處理次數(shù)。去除譜圖中的4.55-5.16ppm水峰后，以0.002ppm的積分區(qū)間采用Amix(Bruker,Germany)軟件對壓水的NOESY1H譜的8.5-5.16ppm和4.55-0.5ppm以進(jìn)行自動積分(絕對值)，并以TSP的積分值(0.018ppm至-0.018ppm)為1進(jìn)行歸一化，以不同提取次數(shù)合并收集水相核磁譜圖的歸一化積分值之和評價(jià)提取效率。提取次數(shù)不同的產(chǎn)量如表3所示，隨著提取次數(shù)從高至低依次為：5次>4次>3次>2次>1次，說明隨著提取次數(shù)的增加，提取效率會增加，提取次數(shù)從1次增加到3次，提取效率有顯著提高(P<0.05)，達(dá)到了95％以上，而提取次數(shù)從3次增加到5次，沒有明顯差異(P>0.05)。說明提取液收集3次可以達(dá)到最優(yōu)化提取次數(shù)。因此，所述的提取次數(shù)為1-5次，更優(yōu)選3次。表3不同提取次數(shù)之間的產(chǎn)量比較注：abc，代表不同提取次數(shù)之間的積分值的差異顯著性(P<0.05)*以第5次提取積分值為100％換算得到的提取率。1.6.5重水含量的優(yōu)化提取磷酸鹽緩沖溶液中重水的含量直接與核磁檢測過程中的壓水的難易程度相關(guān)，水峰面積小時(shí)，核磁譜圖的質(zhì)量較高。如圖2所示，重水含量為10％和20％時(shí)壓水峰面積較大，重水含量為50％時(shí)壓水峰面積較小，100％時(shí)面積最小。因此，提取緩沖溶液中重水的含量最優(yōu)選為100％。1.6.6TSP內(nèi)標(biāo)含量的優(yōu)化TSP作為核磁檢測過程中的內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，其濃度應(yīng)該與提取液所含物質(zhì)的濃度相匹配。如圖3所示，采樣次數(shù)為128次，從TSP濃度0.01、0.05到0.1％，峰面積成比例增加。TSP濃度為0.1％時(shí)，其譜峰遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于樣品中的其他物質(zhì)峰強(qiáng)度。因此，綜合以上實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，更優(yōu)選的TSP內(nèi)標(biāo)濃度應(yīng)為0.01％。1.7在上述最優(yōu)化提取方法下的肉核磁共振譜圖結(jié)果豬背最長肌一維NMR標(biāo)準(zhǔn)圖譜見圖4所示，從豬背最長肌核磁譜圖中指認(rèn)大約42種代謝物，其中氨基酸19種，短鏈脂肪酸3種，味覺相關(guān)代代謝物7種，三羧酸循環(huán)代謝物5種，脂質(zhì)代謝物8種。由此建立了豬背最長肌的代謝指紋圖譜。1.8在上述最優(yōu)化提取方法下的肌肉核磁共振譜圖結(jié)果采用以上方法提取方法對豬背最長肌、腰大肌和股大肌提取后，測得的代謝物數(shù)據(jù)進(jìn)行代謝組學(xué)分析，得分圖見圖5所示，三種不同肉質(zhì)的肉明顯分為三個(gè)聚類，從PC1維上，股大肌與背最長肌和腰大肌明顯分開，說明在成分上差別相對較大，而背最長肌和腰大肌相對股大肌較為接近。