本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)是一種H-HCG快速免疫診斷層析試紙及其制備方法。

背景技術(shù)：

人絨毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotrophin簡(jiǎn)稱HCG)，是由胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞分泌的、分子量為36700的糖蛋白激素，它是由α和β二亞基組成。HCG是臨床妊娠及妊娠相關(guān)疾病檢查中最常用的標(biāo)記物，其生物免疫學(xué)特征主要由β亞基決定，為避免抗HCG抗體與其他多肽激素如FSH、LH和TSH等發(fā)生交叉反應(yīng)，盡管完整的HCG在妊娠期間被發(fā)現(xiàn)是最常見(jiàn)的形式，但是HCG在血、尿中以不同的形式存在，HCG的其它亞型或片段也呈現(xiàn)在孕婦的血液、尿液和唾液中，這些亞型或片段包括高糖基化人絨毛膜促性腺激素(H-HCG)、游離的HCG-α單位、游離的HCG-β單位、HCG-β核心片段和缺口HCG，它們分別具有不同的生物功能。但是，目前廣泛使用的檢測(cè)人HCG的檢測(cè)工具為HCG膠體金免疫層析檢測(cè)試紙，以及使用抗HCG的α和β鏈或β—HCG單克隆抗體檢測(cè)孕婦血清總HCG濃度的方法，所測(cè)得的HCG值均小于各種HCG組分的實(shí)際總和，并且不能完全和所有類型或亞型或片段的HCG結(jié)合，也不能提供各種亞型的信息，特別是它們的生物學(xué)功能和相關(guān)的臨床意義。

早期妊娠可分為正常妊娠和不正常妊娠，不正常妊娠包括異位妊娠和自然流產(chǎn)，發(fā)病率在我國(guó)分別為1％和10-15％左右，而且呈逐年上升趨勢(shì)，是孕產(chǎn)婦的主要死亡原因之一，已經(jīng)成為育齡女性重要的健康問(wèn)題。為了確定異位妊娠和自然流產(chǎn)，盡管我們對(duì)孕婦進(jìn)行孕酮和HCG水平的定量檢測(cè)，但是至今還沒(méi)有一種篩選方法能夠快速、準(zhǔn)確地即時(shí)診斷。也沒(méi)有單獨(dú)的快速、準(zhǔn)確地即時(shí)診斷方法來(lái)區(qū)分早期正常妊和不正常妊娠。當(dāng)前臨床上通用的方法是，一是超聲檢查，二是HCG倍增試驗(yàn)來(lái)確定異位妊娠的存在。通過(guò)經(jīng)陰道超聲，看是否存在胚胎囊來(lái)判斷胚胎存在，通過(guò)腹部超聲則是看有無(wú)異位的妊娠存在。但是采用超聲在早期檢查胚胎、胚胎囊的方法適合于5-8周妊娠(約停經(jīng)后1-4周)，當(dāng)有異位妊娠癥狀的孕婦就診時(shí)往往已經(jīng)錯(cuò)過(guò)了超聲檢查的時(shí)機(jī)，另依賴HCG倍增試驗(yàn)來(lái)分析，如二天內(nèi)孕婦血中HCG水平?jīng)]有倍增，則表明異位妊娠。相反自然流產(chǎn)者就不能采用上述二種分析方法了。測(cè)量每二天HCG的倍增率已成為標(biāo)準(zhǔn)的婦產(chǎn)科檢查方法，在二天內(nèi)下降的HCG的水平和不倍增常常表明妊娠失敗。然而該方法有其不足之處，其一孕婦需要就診二次，其二需要抽血二次檢測(cè)HCG水平二次以上，其三檢測(cè)結(jié)果受限制，大量不同的文獻(xiàn)報(bào)道檢測(cè)的敏感性為62-78％，假陽(yáng)性率高達(dá)26-40％。

檢測(cè)高糖基化人絨毛膜促性腺激素(H-HCG)水平，能夠很好的監(jiān)測(cè)或區(qū)分早期妊娠的為正常妊娠和不正常妊娠，因?yàn)镠-HCG是妊娠早期正常分泌的一種激素，其功能為完成胎盤向子宮內(nèi)膜的植入，因此對(duì)于正常妊娠而言，H-HCG分泌的不足會(huì)使胎盤植入和生長(zhǎng)障礙，引起胎盤發(fā)育不良而導(dǎo)致流產(chǎn)。研究顯示，妊娠4～7周時(shí)(據(jù)末次月經(jīng))血清H-HCG預(yù)測(cè)流產(chǎn)的效率高于常規(guī)HCG檢查。Sasaki等檢測(cè)妊娠7天左右時(shí)(據(jù)LH峰)的H-HCG和總HCG的比值來(lái)預(yù)測(cè)流產(chǎn)，獲得了100％的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和75％的陰性預(yù)測(cè)值。另一項(xiàng)對(duì)體外受精(IVF)妊娠婦女的研究表明，胚胎植入3周后的H-HCG檢測(cè)預(yù)測(cè)IVF后妊娠結(jié)局效果優(yōu)于常規(guī)HCG檢查，并能區(qū)分流產(chǎn)原因是胚胎植入失敗還是臨床自然流產(chǎn)，Strom等對(duì)IVF術(shù)后第6天的血清和子宮組織的檢測(cè)也發(fā)現(xiàn)，H-HCG對(duì)成功妊娠的診斷有100％的敏感度和特異度。并能鑒別生化妊娠。Cole在最近的研究中發(fā)現(xiàn)，成功妊娠和自然流產(chǎn)者的血清HCG濃度并沒(méi)有太大差異，但自然流產(chǎn)妊娠婦女血清H-HCG濃度明顯低于成功妊娠者，而生化妊娠的血清H-HCG水平則更低。H-HCG的檢測(cè)在早孕、異位妊娠、早期流產(chǎn)、腫瘤監(jiān)測(cè)等方面具有其優(yōu)異性以及重要的臨床意義。因此，研究H-HCG，如何將其應(yīng)用于產(chǎn)品中，來(lái)制備一種檢測(cè)速度快、且方便的產(chǎn)品迫在眉睫。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明為了解決上述技術(shù)缺陷，提供一種H-HCG快速免疫診斷層析試紙及其制備方法，此方法方便、快捷、準(zhǔn)確性高，且此試紙適合于早期正常妊娠和不正常妊娠的診斷和鑒別診斷，在早孕、異位妊娠、早期流產(chǎn)、腫瘤監(jiān)測(cè)等方面具有重要的臨床意義。

本發(fā)明一方面，提供一種H-HCG快速免疫診斷試紙，包括：依次連接的樣本墊、包被有檢測(cè)T線與質(zhì)控C線的硝酸纖維素膜、吸樣墊，且所述樣本墊、所述硝酸纖維素膜、所述吸樣墊依次搭接、粘貼在一支撐板上；

優(yōu)選地，H-HCG快速免疫診斷試紙還包括一結(jié)合墊，且所述結(jié)合墊設(shè)置在所述樣本墊與所述硝酸纖維素膜之間，使得所述樣本墊與所述結(jié)合墊、所述硝酸纖維素膜、所述吸樣墊構(gòu)成單通道試紙；

或者

H-HCG快速免疫診斷試紙還包括一纖維隔離薄膜、一結(jié)合墊和一加液墊，且所述纖維隔離薄膜兩端分別搭接在所述樣本墊、所述硝酸纖維素膜上方，所述結(jié)合墊兩端分別搭接在所述纖維隔離薄膜、所述硝酸纖維素膜上方，所述加液墊兩端分別搭接在所述纖維隔離薄膜、所述結(jié)合墊上方，使得所述樣本墊與所述纖維隔離薄膜、所述結(jié)合墊、所述加液墊、所述硝酸纖維素膜、所述吸樣墊構(gòu)成雙通道試紙。

進(jìn)一步地，

所述結(jié)合墊上設(shè)置有H-HCG異性抗體B207或B152，所述硝酸纖維素膜上的所述檢測(cè)T線包被有H-HCG特異性抗體B152或B207，所述質(zhì)控C線含有羊抗鼠多克隆抗體；

或者，

所述結(jié)合墊上設(shè)置有抗α-HCG或β-HCG的抗體，或者抗完整HCG抗體，或者設(shè)置有H-HCG特異性抗體B207或B152；檢測(cè)T線由檢測(cè)線T1、檢測(cè)線T2組成，且所述檢測(cè)線T1包被有抗α-HCG或β-HCG的抗體，或者抗完整HCG抗體、檢測(cè)線T2上包被有H-HCG特異性抗體B152或B207，或者檢測(cè)線T1上包被有H-HCG特異性抗體B152或B207，檢測(cè)線T2上包被有抗α-HCG或β-HCG的抗體，或者抗完整HCG抗體；適合于免疫競(jìng)爭(zhēng)法，所述硝酸纖維素膜(3)T線上包被有H-HCG抗原或相反，結(jié)合墊(2)上設(shè)置有H-HCG抗原，T線上包被有H-HCG特異性抗體。

本發(fā)明第二方面，提供第一方面所述一種H-HCG快速免疫診斷層析試紙的制備方法，包括如下步驟：

①、樣本墊的制備：配制樣本墊處理液，再將經(jīng)剪裁后的玻璃纖維膜或無(wú)紡布置于樣本墊處理液中室溫浸泡、烘干、備用；

②、結(jié)合墊的制備：配制結(jié)合墊處理液、金標(biāo)抗體，將結(jié)合墊原料置于結(jié)合墊處理液中室溫浸泡、烘干，再用劃膜噴金機(jī)將金標(biāo)抗體噴于經(jīng)浸泡后的結(jié)合墊原料、烘干備用；

③、硝酸纖維素膜包被：配制包被緩沖液，用包被緩沖液分別稀釋羊抗鼠多克隆抗體、抗α-HCG或β-HCG的抗體，或者抗完整HCG抗體(或者它們可以是單克隆抗體、多克隆抗體或抗體的多種片段)、H-HCG單克隆抗體B207或B152至0.1-20mg/ml，獲得質(zhì)控C線、檢測(cè)線T1、檢測(cè)線T2或者質(zhì)控C線、檢測(cè)線T2、檢測(cè)線T1、或者質(zhì)控C線、檢測(cè)T線；

④、試紙的制備：

單通道試紙：在常溫的干燥室內(nèi)，取所述支撐板，先將上述包被的所述硝酸纖維素膜貼合于所述支撐板的中部，再在硝酸纖維素膜兩側(cè)分別粘貼所述結(jié)合墊、所述吸樣墊，且在所述結(jié)合墊與所述硝酸纖維素膜相對(duì)的一側(cè)粘貼所述樣本墊，最后采用裁剪機(jī)剪切所述支撐板；

雙通道試紙：所述硝酸纖維素膜一側(cè)粘貼所述吸樣墊，且所述吸樣墊一側(cè)與所述硝酸纖維素膜搭接，另一側(cè)邊緣與所述支撐板平齊，所述硝酸纖維素膜另一側(cè)與所述樣本墊搭接，使得待測(cè)樣本依次通過(guò)所述樣本墊、所述硝酸纖維素膜、所述吸樣墊形成第一水平流動(dòng)通道；

將所述纖維隔離薄膜兩端分別搭接在所述樣本墊、所述硝酸纖維素膜上方，所述結(jié)合墊兩端分別搭接在所述纖維隔離薄膜、所述硝酸纖維素膜上方，所述加液墊兩端分別搭接在纖維隔離薄膜、所述結(jié)合墊上方，使得檢測(cè)過(guò)程中緩沖液依次通過(guò)所述加液墊、所述結(jié)合墊、所述硝酸纖維素膜、所述吸樣墊形成第二水平流動(dòng)通道，最后采用裁剪機(jī)剪切所述支撐板。

優(yōu)選地，所述步驟①中，樣本處理液的制備方法為：稱取0.5g±0.05gBSA于燒杯中，加入70ml 10mM pH8.4硼酸鹽緩沖液溶解，加入吐溫-20，混勻，定容、濾膜過(guò)濾后備用。

優(yōu)選地，步驟②中，結(jié)合墊處理液的制備方法為：稱取0.1g±0.05gBSA，0.5g±0.05g海藻糖于燒杯中，加入70ml 10mM pH8.0硼酸鹽緩沖液溶解，加入吐溫-20，混勻、濾膜過(guò)濾后備用；所述金標(biāo)抗體中含抗α-HCG或β-HCG的抗體，或者抗完整HCG抗體，或者H-HCG異性抗體B207或B152。

所述步驟③中，包被緩沖液的制備方法為：取海藻糖于燒杯中，加入PBS溶解后再加入甲醇，混勻、定容、濾膜過(guò)濾后備用。

進(jìn)一步地，所述樣本墊材料為玻璃纖維膜或無(wú)紡布；所述吸樣墊由吸水濾紙構(gòu)成。

進(jìn)一步地，所述結(jié)合墊(2)由5-100nm膠體金或5-800nm納米材料或乳膠顆粒或碳顆?；蚱渌l(fā)光染料或酶結(jié)合抗HCG抗體或H-HCG抗體組成，或引用或結(jié)合親和素、生物素；所述結(jié)合墊(2)中標(biāo)記有特異性抗體的膠體金或纖維素納米顆粒，或者標(biāo)記有特異性抗體的膠體金—纖維素納米顆粒，或二者中添加有親和素或生物素。

本發(fā)明一種H-HCG快速免疫診斷層析試紙及其制備方法，其優(yōu)點(diǎn)是：

①、結(jié)合墊、硝酸纖維素膜上包被H-HCG異性抗體B207或B152、或者抗α-HCG或β-HCG的抗體，或者抗完整HCG抗體的設(shè)計(jì)，可通過(guò)人體H-HCG含量的體現(xiàn)如血液、尿液、唾液等樣本的檢測(cè)來(lái)獲知被檢測(cè)者是否懷孕、或者孕婦的胎盤功能是否良好以及預(yù)測(cè)流產(chǎn)等；且此H-HCG試紙適用于妊娠早期，特別是同房后5-7天或月經(jīng)過(guò)期當(dāng)天的前1-2天即可開(kāi)始檢測(cè)，可供各級(jí)醫(yī)療機(jī)構(gòu)對(duì)早孕婦女進(jìn)行初步診斷及婦女在家中自我檢測(cè)；

②、這種利用免疫層析試紙法快速檢測(cè)的診斷試劑，特別適合于早期正常妊娠和不正常妊娠的診斷和鑒別診斷，具有特異性強(qiáng)、敏感性高，具有安全、易保存、穩(wěn)定性好和應(yīng)用方便等優(yōu)點(diǎn)，在醫(yī)學(xué)快速診斷、健康體檢、普查以及家庭診斷方面、女性的醫(yī)學(xué)健康和優(yōu)生優(yōu)育方面有著較大的適用價(jià)值和臨床意義。

附圖說(shuō)明

圖1、圖2為一種H-HCG快速免疫診斷層析試紙單通道結(jié)構(gòu)示意圖；

圖3、圖4為一種H-HCG快速免疫診斷層析試紙雙通道結(jié)構(gòu)示意圖；

圖5為雙通道外套殼體結(jié)構(gòu)示意圖；

其中：

1、樣本墊，2、結(jié)合墊，21、加液墊，3、硝酸纖維素膜，31、檢測(cè)T線、32、檢測(cè)線T1，33、檢測(cè)線T2，34、質(zhì)控C線，4、吸樣墊，5、支撐板，6、纖維隔離薄膜，7、加樣孔，8、加液孔，9、硝酸纖維素膜視窗，10、吸樣墊視窗。

具體實(shí)施方式

一種H-HCG快速免疫診斷層析試紙，包括依次連接的樣本墊1、包被有檢測(cè)T線31與質(zhì)控C線34的硝酸纖維素膜3、吸樣墊4，且所述樣本墊1、所述硝酸纖維素膜3、所述吸樣墊4依次搭接、粘貼在一支撐板5上。

優(yōu)選地，H-HCG快速免疫診斷層析試紙：還包括一結(jié)合墊2，且所述結(jié)合墊2設(shè)置在所述樣本墊1與所述硝酸纖維素膜3之間，使得所述樣本墊1與所述結(jié)合墊2、所述硝酸纖維素膜3、所述吸樣墊4構(gòu)成單通道試紙(如圖1、圖2所示)。

優(yōu)選地，H-HCG快速免疫診斷層析試紙：還包括一纖維隔離薄膜6、一結(jié)合墊2和一加液墊21，且所述纖維隔離薄膜6兩端分別搭接在所述樣本墊1、所述硝酸纖維素膜3上方，所述結(jié)合墊2兩端分別搭接在所述纖維隔離薄膜6、所述硝酸纖維素膜3上方，所述加液墊21兩端分別搭接在纖維隔離薄膜6、所述結(jié)合墊2上方，使得所述樣本墊1與所述纖維隔離薄膜6，所述結(jié)合墊2、與所述加液墊21、所述硝酸纖維素膜3、所述吸樣墊4構(gòu)成雙通道試紙(如圖3、圖4所示)；

進(jìn)一步地，

所述結(jié)合墊2上設(shè)置有H-HCG異性抗體B207或B152，所述硝酸纖維素膜3上包被有H-HCG特異性抗體B152或B207，所述質(zhì)控C線34含有羊抗鼠多克隆抗體；

或者，

所述結(jié)合墊2上設(shè)置有抗α-HCG或β-HCG的抗體，或者抗完整HCG抗體，，或者設(shè)置有H-HCG特異性抗體B207或B152；檢測(cè)T線31由檢測(cè)線T1 32、檢測(cè)線T2 33組成，且所述檢測(cè)線T1 32包被有抗α-HCG或β-HCG的抗體，或者抗完整HCG抗體、檢測(cè)線T2 33上包被有H-HCG特異性抗體B152或B207，或者檢測(cè)線T1 32上包被有H-HCG特異性抗體B152或B207，檢測(cè)線T2 33上包被有抗α-HCG或β-HCG的抗體，或者抗完整HCG抗體；

或者，

適合于免疫競(jìng)爭(zhēng)法，所述硝酸纖維素膜3T線上包被有H-HCG抗原或相反，結(jié)合墊2上設(shè)置有H-HCG抗原，T線上包被有H-HCG特異性抗體。

優(yōu)選地，所述樣本墊1材料為玻璃纖維膜或無(wú)紡布；所述吸樣墊4由吸水濾紙構(gòu)成。

優(yōu)選地，所述結(jié)合墊2由5-100nm膠體金或5-800nm納米材料或乳膠顆?；蛱碱w粒或其它發(fā)光染料或酶結(jié)合抗HCG抗體或H-HCG抗體組成，或引用或結(jié)合親和素、生物素；所述結(jié)合墊2中標(biāo)記有特異性抗體的膠體金或纖維素納米顆粒，或者標(biāo)記有特異性抗體的膠體金—纖維素納米顆粒，或二者中添加有親和素或生物素。

所述檢測(cè)T線31具有固定抗體或者H-HCG抗原或加有生物素或親和素。

上述所述中，H-HCG特異性抗體B207和B152的用量在0.01-100mg/ml，抗α-HCG或β-HCG的抗體，或者抗完整HCG抗體的用量在0.01-100mg/ml。

本發(fā)明一種H-HCG快速免疫診斷層析試紙，具體有如下形式：

一、結(jié)合墊2含有H—HCG特異性抗體B207，檢測(cè)T線31為硝酸纖維素膜3上包被有H—HCG特異性抗體B152，質(zhì)控C線34為包被在硝酸纖維素膜3上的羊抗鼠多克隆抗體；

二、結(jié)合墊2含有H—HCG特異性抗體B207，檢測(cè)T線31為硝酸纖維素膜3上包被有H—HCG特異性抗體B207，質(zhì)控C線34為包被在硝酸纖維素膜3上的羊抗鼠多克隆抗體；

三、結(jié)合墊2含有H—HCG特異性抗體B152，檢測(cè)T線31為硝酸纖維素膜3上包被有H—HCG特異性抗體B207，質(zhì)控C線34為包被在硝酸纖維素膜3上的羊抗鼠多克隆抗體；

四、結(jié)合墊2含有H—HCG特異性抗體B152，檢測(cè)T線31為硝酸纖維素膜3上包被有H—HCG特異性抗體B152，質(zhì)控C線34為包被在硝酸纖維素膜3上的羊抗鼠多克隆抗體；

五、結(jié)合墊2含有H—HCG特異性抗體B207，檢測(cè)線T1 32為硝酸纖維素膜3上包被有抗α-HCG抗體，檢測(cè)線T2 33為硝酸纖維素膜3上包被有H—HCG特異性抗體B152，質(zhì)控C線34為包被在硝酸纖維素膜3上的羊抗鼠多克隆抗體；

六、結(jié)合墊2含有H—HCG特異性抗體B207，檢測(cè)線T1 32為硝酸纖維素膜3上包被有抗β-HCG抗體，檢測(cè)線T2 33為硝酸纖維素膜3上包被有H—HCG特異性抗體B152，質(zhì)控C線34為包被在硝酸纖維素膜3上的羊抗鼠多克隆抗體；

七、結(jié)合墊2含有H—HCG特異性抗體B207，檢測(cè)線T1 32為硝酸纖維素膜3上包被有H—HCG特異性抗體B152，檢測(cè)線T2 33為硝酸纖維素膜3上包被有抗β-HCG抗體，質(zhì)控C線34為包被在硝酸纖維素膜3上的羊抗鼠多克隆抗體；

八、結(jié)合墊2含有H—HCG特異性抗體B207，檢測(cè)線T1 32為硝酸纖維素膜3上包被有H—HCG特異性抗體B152，檢測(cè)線T2 33為硝酸纖維素膜3上包被有抗α-HCG抗體，質(zhì)控C線34為包被在硝酸纖維素膜3上的羊抗鼠多克隆抗體；

九、結(jié)合墊2含有H—HCG特異性抗體B207,檢測(cè)線T1 32為硝酸纖維素膜3上包被有抗α-HCG抗體，檢測(cè)線T2 33為硝酸纖維素膜3上包被有抗β-HCG抗體,質(zhì)控C線34為包被在硝酸纖維素膜3上的羊抗鼠多克隆抗體；

十、結(jié)合墊2含有H—HCG特異性抗體B207,檢測(cè)線T1 32為硝酸纖維素膜3上包被有抗β-HCG抗體，檢測(cè)線T2 33為硝酸纖維素膜3上包被有抗α-HCG抗體，質(zhì)控C線34為包被在硝酸纖維素膜3上的羊抗鼠多克隆抗體；

十一、結(jié)合墊2含有H—HCG特異性抗體B152，檢測(cè)線T1 32為硝酸纖維素膜3上包被有H—HCG特異性抗體B207，檢測(cè)線T2 33為硝酸纖維素膜3上包被有抗β-HCG抗體，質(zhì)控C線34為包被在硝酸纖維素膜3上的羊抗鼠多克隆抗體；

十二、結(jié)合墊2含有H—HCG特異性抗體B152，檢測(cè)線T1 32為硝酸纖維素膜3上包被有抗β-HCG抗體，檢測(cè)線T2 33為硝酸纖維素膜3上包被有h-HCG特異性抗體B207，質(zhì)控C線34為包被在硝酸纖維素膜3上的羊抗鼠多克隆抗體；

十三、結(jié)合墊2有H-HCG特異性抗體B152，檢測(cè)線T1 32為硝酸纖維素膜3上包被有抗α-HCG抗體,檢測(cè)線T2 33為硝酸纖維素膜3上包被有HCG特異性抗體B207，質(zhì)控C線34為包被在硝酸纖維素膜3上抗鼠多克隆的羊抗體；

十四、結(jié)合墊2有H-HCG特異性抗體B152，檢測(cè)線T1 32為硝酸纖維素膜3上包被有H—HCG特異性抗體B207，檢測(cè)線T2 33為硝酸纖維素膜3上包被有抗α-HCG抗體，質(zhì)控C線34為包被在硝酸纖維素膜3上抗鼠多克隆的羊抗體；

十五、結(jié)合墊2有H-HCG特異性抗體B152，檢測(cè)線T1 32為硝酸纖維素膜3上包被有抗α-HCG抗體,檢測(cè)線T2 33為硝酸纖維素膜3上包被有抗β-HCG抗體，質(zhì)控C線34為包被在硝酸纖維素膜3上抗鼠多克隆的羊抗體；

十六、結(jié)合墊2有H-HCG特異性抗體B152,檢測(cè)線T1 32為硝酸纖維素膜3上包被有抗β-HCG抗體,檢測(cè)線T2 33為硝酸纖維素膜3上包被有抗α-HCG抗體,，質(zhì)控C線34為包被在硝酸纖維素膜3上抗鼠多克隆的羊抗體；

十七、結(jié)合墊2有抗α-HCG抗體，檢測(cè)線T1 32為硝酸纖維素膜3上包被有H-HCG特異性抗體B207，檢測(cè)線T2 33為硝酸纖維素膜3上包被有H—HCG特異性抗體B152,質(zhì)控C線34為包被在硝酸纖維素膜3上抗鼠多克隆的羊抗體；

十八、結(jié)合墊2有抗α-HCG抗體，檢測(cè)線T1 32為硝酸纖維素膜3上包被有H-HCG特異性抗體B152，檢測(cè)線T2 33為硝酸纖維素膜3上包被有H-HCG特異性抗體B207，質(zhì)控C線34為包被在硝酸纖維素膜3上抗鼠多克隆的羊抗體；

十九、結(jié)合墊2有抗α-HCG抗體，檢測(cè)線T1 32為硝酸纖維素膜3上包被有抗β-HCG抗體,檢測(cè)線T2 33為硝酸纖維素膜3上包被有H-HCG特異性抗體B207，質(zhì)控C線34為包被在硝酸纖維素膜3上抗鼠多克隆的羊抗體；

二十、結(jié)合墊2有抗α-HCG抗體，檢測(cè)線T1 32為硝酸纖維素膜3上包被有抗β-HCG抗體，檢測(cè)線T2 33為硝酸纖維素膜3上包被有H-HCG特異性抗體B152，質(zhì)控C線34為包被在硝酸纖維素膜3上抗鼠多克隆的羊抗體；

二十一、結(jié)合墊2有抗α-HCG抗體,檢測(cè)線T1 32為硝酸纖維素膜3上包被有H-HCG特異性抗體B207，檢測(cè)線T2 33為硝酸纖維素膜3上包被有抗β-HCG抗體，質(zhì)控C線34為包被在硝酸纖維素膜3上抗鼠多克隆的羊抗體；

二十二、結(jié)合墊2有抗α-HCG抗體，檢測(cè)線T1 32為硝酸纖維素膜3上包被有H-HCG特異性抗體B152，檢測(cè)線T2 33為硝酸纖維素膜3上包被有抗β-HCG抗體,質(zhì)控C線34為包被在硝酸纖維素膜3上抗鼠多克隆的羊抗體；

二十三、結(jié)合墊2有抗β-HCG抗體，檢測(cè)線T1 32為硝酸纖維素膜3上包被有有H-HCG特異性抗體B207，檢測(cè)線T2 33為硝酸纖維素膜3上包被有H-HCG特異性抗體B152,質(zhì)控C線34為包被在硝酸纖維素膜3上抗鼠多克隆的羊抗體；

二十四、結(jié)合墊2有抗β-HCG抗體，檢測(cè)線T1 32為硝酸纖維素膜3上包被有H-HCG特異性抗體B152，檢測(cè)線T2 33為硝酸纖維素膜3上包被有H-HCG特異性抗體B207，質(zhì)控C線34為包被在硝酸纖維素膜3上抗鼠多克隆的羊抗體。

二十五、結(jié)合墊2有抗β-HCG抗體，檢測(cè)線T1 32為硝酸纖維素膜3上包被有抗α-HCG抗體,檢測(cè)線T2 33為硝酸纖維素膜3上包被有H-HCG特異性抗體B207，質(zhì)控C線34為包被在硝酸纖維素膜3上抗鼠多克隆的羊抗體。

二十六、結(jié)合墊2有抗β-HCG抗體，檢測(cè)線T1 32為硝酸纖維素膜3上包被有抗α-HCG抗體,檢測(cè)線T2 33為硝酸纖維素膜3上包被有H-HCG特異性抗體B152,質(zhì)控C線34為包被在硝酸纖維素膜3上抗鼠多克隆的羊抗體。

二十七、結(jié)合墊2有抗β-HCG抗體，檢測(cè)線T1 32為硝酸纖維素膜3上包被有H-HCG特異性抗體B207,檢測(cè)線T2 33為硝酸纖維素膜3上包被有抗α-HCG抗體,質(zhì)控C線34為包被在硝酸纖維素膜3上抗鼠多克隆的羊抗體。

二十八、結(jié)合墊2有抗β-HCG抗體，檢測(cè)線T1 32為硝酸纖維素膜3上包被有H-HCG特異性抗體B152，檢測(cè)線T2 33為硝酸纖維素膜3上包被有抗α-HCG抗體，質(zhì)控C線34為包被在硝酸纖維素膜3上抗鼠多克隆的羊抗體。

本發(fā)明一種H-HCG快速免疫診斷試紙還可以制作成卡、筆的形式。當(dāng)雙通道模式制成卡、筆的形式時(shí)，試紙外套有一外殼，外殼上設(shè)計(jì)有與所述樣本墊1、所述加液墊21、所述硝酸纖維素膜3、所述吸樣墊4分別對(duì)應(yīng)的加樣孔7、加液孔8、硝酸纖維素膜視窗9、吸樣墊視窗10(如圖5所示)。

實(shí)施例一：

所述一種H-HCG快速免疫診斷層析試紙的制備方法，包括如下步驟：

主要原料如下：

試劑：氯金酸、檸檬酸三鈉、抗α-HCG或β-HCG的抗體，H-HCG特異性抗體B207或B152；、BSA、海藻糖、NaCl、Na2HPO4·12H2O、NaH2PO4·2H2O、硼酸、硼砂、吐溫-20、Triton X-100、蔗糖、超純水；

耗材：硝酸纖維素膜(NC膜)、8975玻璃纖維、GF-06玻璃纖維、吸水墊、底板、容量瓶、錐形瓶、EP管、槍頭。

一、制備前的準(zhǔn)備：

1.1 2％檸檬酸三納溶液配制

稱取0.105g檸檬酸三納于15mlEP管中，加入5ml純水，混勻至完全溶解即為2％檸檬酸三納溶液。

取40ml純水于50ml容量瓶中，向容量瓶中加入0.5ml 1％氯金酸溶液，用純水定容至50ml，混勻即為0.01％氯金酸溶液。將50ml 0.01％氯金酸溶液倒入100ml錐形瓶中，放在電爐上用3-4檔加熱至沸騰，用移液槍吸取380μL 2％檸檬酸三納溶液，快速打入到沸騰的氯金酸溶液中，繼續(xù)加熱，即40-55nm膠體金制備完畢。

1.2 PBS緩沖液配制：

稱取Na₂HPO₄·12H₂O 1.615-2g，NaH₂PO₄·2H₂O 0.225-5g，NaCl 4.0-5.0g于燒杯中，加入400ml超純水溶解定容至500ml，0.22μm濾膜過(guò)濾后備用。

1.3復(fù)溶液配制：

稱取BSA 1g，蔗糖10-13g于燒杯中，加入70ml PBS溶解，加入0.08-0.1ml Triton X-100，混勻，定容至100ml，0.22μm濾膜過(guò)濾后備用。

2、最佳pH確定：

分別取1mL膠體金于6個(gè)1.5mLEP管中，向每管分別加入0.2M K₂CO₃ 1μL、2μL、3μL、5μL、7μL、10μL，對(duì)應(yīng)pH分別約為7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5，向每管分別加入150-200μL 0.1mg/mL抗體溶液，混勻，37度靜置20min，向每管分別加入100-130μL10％NaCl溶液，混勻，靜置觀察顏色變化，0.2M K₂CO₃加入量為1-3μL的EP管中膠體金顏色仍為紫紅色，其他管變?yōu)樗{(lán)色，最適pH為7.0-8.0。

3、最小抗體標(biāo)記量確定：

取4支EP管，分別取1mL膠體金加入各管中，再向每管分別加入K₂CO₃2-4μL，混勻，加入30μL(3μg)、50μL(5μg)、70μL(7μg)、100μL(10μg)的0.08-0.1mg/ml的抗體溶液，混勻，37℃靜置20min，向每管加入10％NaCl溶液，混勻，靜置觀察顏色變化，抗體加入量為7-10μg的EP管中膠體金顏色未發(fā)生明顯變化為紫紅色，抗體加入量為3、5μg的EP管中膠體金變藍(lán)，說(shuō)明1ml膠體金的最小抗體加入量為5-8μg。

4、金標(biāo)抗體制備：

分別取40nm-55nm的膠體金1mL于EP管中，向管中分別加入K₂CO₃溶液2-4μL，混勻，向EP管中加入0.08-0.1mg/ml抗體70μL，混勻，37℃放置20min，從管中取100μL于500μLEP管中，加入10μL10％NaCl溶液，混勻，靜置觀察顏色為紅色，可以進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。向40-55nm的膠體金EP管中加入100μL 5％PEG溶液,37℃靜置2h進(jìn)行封閉，4℃10000g離心20min，棄上清，用100μL復(fù)溶液復(fù)溶，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

5、

0.2M硼酸溶液配制：稱取硼酸12.37g于燒杯中，加入800ml超純水溶解后定容至1L，0.22μm濾膜過(guò)濾后備用。

0.05M硼砂溶液配制：稱取硼砂19.07g于燒杯中，加入800ml超純水溶解后定容至1L，0.22μm濾膜過(guò)濾后備用。

10mM pH8.0硼酸-硼砂緩沖液配制：分別取3ml 0.05M硼砂溶液、7ml 0.2M硼酸溶液于燒杯中，加入190ml超純水，混勻備用。

10mM pH8.4硼酸-硼砂緩沖液配制：分別取4.5ml 0.05M硼砂溶液、5.5ml 0.2M硼酸溶液于燒杯中，加入190ml超純水，混勻備用。

二、制備方法

①、樣本墊1的制備：

配制樣本液，稱取0.5g±0.05gBSA于100ml燒杯中，加入70ml 10mM pH8.4硼酸鹽緩沖液溶解，加入0.3ml吐溫-20，混勻，定容至100ml，0.22μm濾膜過(guò)濾后備用；

再將經(jīng)剪裁為成0.7cm和3.2cm寬的長(zhǎng)條后的玻璃纖維膜置于樣本液中室溫浸泡4h，37℃烘干，干燥皿中保存?zhèn)溆茫?/p>

②、結(jié)合墊2的制備：

配制結(jié)合墊2處理液：稱取0.1g±0.05gBSA，0.5g±0.05g海藻糖于100ml燒杯中，加入70ml 10mM pH8.0硼酸鹽緩沖液溶解，加入0.3ml吐溫-20，混勻，定容至100ml，0.22μm濾膜過(guò)濾后備用；

金標(biāo)抗體的制備：取1mL 40-55nm膠體金于EP管中，加入2μL 0.2M K₂CO₃溶液，混勻，加入70μL 0.08-0.1mg/ml抗體溶液，混勻，37℃靜置20min，加入100μL 10％BSA溶液(終濃度1％)，混勻，37℃放置1.5h，4℃，12000g離心20min，棄上清，加入1ml PBS復(fù)溶，4℃，12000g離心20min，棄上清，加入100μL復(fù)溶液復(fù)溶，4℃保存?zhèn)溆茫?/p>

再將結(jié)合墊2原料裁成0.7cm寬的長(zhǎng)條后置于結(jié)合墊2處理液中室溫浸泡4h，37℃烘干，再用劃膜噴金機(jī)按照8-15μL/cm的量將金標(biāo)抗體噴于經(jīng)浸泡后的結(jié)合墊2原料，37℃烘干，干燥皿中保存?zhèn)溆茫?/p>

③、硝酸纖維素膜3包被：配制包被緩沖液：稱取3g海藻糖于燒杯中，加入80-100mlPBS溶解，加入3-5ml甲醇，混勻，定容至100ml，0.22μm濾膜過(guò)濾后備用；

包被檢測(cè)線T1 32：用包被緩沖液將抗體稀釋至0.5-2mg/ml，按0.9-1.5μL/cm的量劃在所述硝酸纖維素膜3上，37℃烘干后干燥皿中保存?zhèn)溆谩?/p>

包被檢測(cè)線T2 33：用包被緩沖液抗體稀釋至0.5-2mg/ml，按0.9-1.3μL/cm的量劃在所述硝酸纖維素膜3上，37℃烘干后干燥皿中保存?zhèn)溆谩?/p>

包被質(zhì)控C線34：用包被緩沖液將羊抗鼠多克隆抗體稀釋至1.0-1.5mg/ml，按0.7-1.4μL/cm的量劃在所述硝酸纖維素膜3上，37℃烘干后干燥皿中保存?zhèn)溆茫?/p>

④、試紙的制備：

單通道試紙制備：

在溫度20-30℃、濕度小于30-40％的干燥室內(nèi)，取支撐板5，將已包被的硝酸纖維素膜3放置在支撐板5的中部粘貼；

在所述硝酸纖維素膜3的檢測(cè)T線31一側(cè)搭接結(jié)合墊2(搭結(jié)合墊2的三分之一)粘貼，在結(jié)合墊2另一側(cè)搭接粘貼樣本墊1(搭樣本墊1的十分之一)，在硝酸纖維素膜3上的質(zhì)控C線34一側(cè)搭接吸樣墊4(搭吸樣墊4的十分之一)；在最上面貼一層標(biāo)志膜，即H-HCG快速免疫診斷試紙制備成功，最后用裁剪機(jī)將制備的試紙切成3-4mm寬的試紙條。切好的試紙條可單用，也可以再裝入塑料卡或棒(筆)內(nèi)，形成HCG-H快速診斷試紙卡或棒(筆)；

雙通道試紙制備：

在溫度20-30℃、濕度小于30-40％的干燥室內(nèi)，取支撐板5，將已包被的所述硝酸纖維素膜3放置在支撐板5的中部粘貼；

在所述硝酸纖維素膜3一側(cè)粘貼所述吸樣墊4，且所述吸樣墊4一側(cè)與所述硝酸纖維素膜3搭接，另一側(cè)邊緣與所述支撐板5平齊，所述硝酸纖維素膜3另一側(cè)與所述樣本墊1搭接，使得待測(cè)樣本依次通過(guò)所述樣本墊1、所述硝酸纖維素膜3、所述吸樣墊4形成第一水平流動(dòng)通道；

將所述纖維隔離薄膜6兩端分別搭接在所述樣本墊1、所述硝酸纖維素膜3上方，所述結(jié)合墊2兩端分別搭接在所述纖維隔離薄膜6、所述硝酸纖維素膜3上方，所述加液墊21兩端分別搭接在纖維隔離薄膜6、所述結(jié)合墊2上方，使得檢測(cè)過(guò)程中緩沖液依次通過(guò)所述加液墊21、所述結(jié)合墊2、所述硝酸纖維素膜3、所述吸樣墊4形成第二水平流動(dòng)通道，即H-HCG快速免疫診斷試紙制備成功，最后用裁剪機(jī)將制備的試紙剪切成4mm寬的試紙條，切好的試紙條可裝入塑料卡或棒(筆)內(nèi)，形成HCG-H快速診斷試紙卡或棒(筆)；

上述雙通道具體研究過(guò)程為：當(dāng)樣本中的被檢測(cè)物通過(guò)第一水平流動(dòng)通道達(dá)所述硝酸纖維素膜3后，與所述檢測(cè)T線31上的特異性抗體結(jié)合，10秒-5分鐘后，所述吸樣墊4有樣本層析時(shí)，所述加液墊21上加緩沖液，所述結(jié)合墊2中的標(biāo)記物(綴合物)通過(guò)第二水平流動(dòng)通道達(dá)到所述硝酸纖維素膜3上，與所述檢測(cè)T線31上的檢測(cè)物—特異性抗體復(fù)合物結(jié)合后呈肉眼可見(jiàn)的顏色(陽(yáng)性/陰性)反應(yīng)。為了方便或更準(zhǔn)確觀察所述吸樣墊4有無(wú)樣本層析，所述吸樣墊4上可添加著色劑或著色條帶，當(dāng)所述吸樣墊4有樣本層析時(shí)顯色，此時(shí)便可在所述加液墊21處加入緩沖液，該方法優(yōu)于和/或優(yōu)先以10秒-5分鐘后再在所述加液墊21處加入緩沖液的方式。

上述所述搭接長(zhǎng)度均為2mm；且雙通道試紙條中，運(yùn)用到所述加液墊21上的緩沖液是根據(jù)檢測(cè)物不同而選擇的不同標(biāo)的緩沖液，用于快速診斷出結(jié)果。三、試紙測(cè)試及結(jié)果判斷

1、試紙條測(cè)試：

單通道：將試紙條放入待測(cè)液(使加樣孔7浸沒(méi)在液面下)中停留5s，取出平放在臺(tái)面上，15min后讀取結(jié)果，30min內(nèi)有效；

雙通道：將試紙條放入待測(cè)液(使加樣孔7浸沒(méi)在液面下)中停留5s，取出平放在臺(tái)面上，當(dāng)所述吸樣墊視窗10中的顏色由白色變?yōu)榧t色后，取50μLPBS滴在加液孔8中，5min后讀取結(jié)果，30min內(nèi)有效。

2、結(jié)果判斷：

如圖1、圖3：當(dāng)出現(xiàn)二條紅色條帶，一條位于檢測(cè)線T、另一條位于質(zhì)控C線34，表明已懷孕，或者表明孕婦的胎盤功能良好、發(fā)生流產(chǎn)的幾率極?。划?dāng)出現(xiàn)一條紅色條帶，僅位于質(zhì)控C線34，表明沒(méi)有懷孕或者表明孕婦的胎盤功能差；當(dāng)5-10分鐘時(shí)在質(zhì)控C線34無(wú)紅色條帶出現(xiàn)，表明不正確的操作過(guò)程或者試紙條已變質(zhì)損壞，需要用新的試紙條正確操作和/或重新測(cè)試。

如圖2、圖4，當(dāng)出現(xiàn)三條紅色條帶，一條位于檢測(cè)線T1 32、一條位于檢測(cè)線T2 33、另一條位于質(zhì)控C線34，表明已懷孕，而且孕婦的胎盤功能良好、發(fā)生流產(chǎn)的機(jī)會(huì)極小；當(dāng)出現(xiàn)二條紅色條帶，一條位于檢測(cè)線T1 32或者T2、另一條位于質(zhì)控C線34，表明已懷孕，但是孕婦的胎盤功能不好、發(fā)生流產(chǎn)的幾率大，需要進(jìn)一步檢查和/或治療；當(dāng)出現(xiàn)一條紅色條帶，僅位于質(zhì)控C線34，表明沒(méi)有懷孕；當(dāng)5-10分鐘時(shí)在質(zhì)控C線34無(wú)紅色條帶出現(xiàn)，表明不正確的操作過(guò)程或者試紙條已變質(zhì)損壞，需要用新的試紙條正確操作和/或重新測(cè)試。

實(shí)施例二

H—HCG快速免疫診斷層析試紙的敏感性檢測(cè)

1、12.5mIU/ml、25mIU/ml、50mIU/ml HCG溶液的配制：用含0.5％BSA的PBS溶液將HCG標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶，再配制成12.5mIU/ml、25mIU/ml、50mIU/ml HCG溶液。

2、110mIU/ml H-HCG溶液的配制：用含0.5％BSA的PBS溶液將H-HCG標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶，再配制成110mIU/ml溶液。

3、單通道：將同一批號(hào)的試紙條分別放入12.5mIU/ml、25mIU/ml、50mIU/ml HCG溶液及110mIU/ml H-HCG溶液中停留約5s，取出平放在臺(tái)面上等待約15min，觀察結(jié)果，檢測(cè)結(jié)果30min內(nèi)有效。每個(gè)檢測(cè)濃度各重復(fù)3次，各溶液3次檢測(cè)結(jié)果均為陽(yáng)性才可判為次濃度的結(jié)果為陽(yáng)性；

雙通道：將同一批號(hào)的試紙條分別放入12.5mIU/ml、25mIU/ml、50mIU/ml HCG溶液及110mIU/ml H-HCG溶液中停留約5s(使加樣孔7浸沒(méi)在液面下)，取出平放在臺(tái)面上，當(dāng)吸樣墊視窗10中的顏色由白色變?yōu)榧t色后，取50μL PBS溶液加在上層加液孔8中，等待約10min讀取結(jié)果，檢測(cè)結(jié)果30min內(nèi)有效，每個(gè)檢測(cè)濃度各重復(fù)3次，各溶液3次檢測(cè)結(jié)果均為陽(yáng)性才可判為次濃度的結(jié)果為陽(yáng)性。

表1單/雙通道敏感性測(cè)試

注：“-”表示不可見(jiàn)，“+++”表示明顯可見(jiàn),110＝110mIU/ml H-HCG溶液.

從表1可知：?jiǎn)瓮ǖ篮碗p通道敏感性測(cè)試12.5mIU/ml、25mIU/ml、50mIU/ml HCG標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)HCG線正常，符合國(guó)標(biāo)要求，H-HCG線未出線，說(shuō)明HCG標(biāo)準(zhǔn)品與H-HCG抗體無(wú)交叉反應(yīng)；測(cè)試110mIU/ml H-HCG標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)HCG和H-HCG線均出線，說(shuō)明H-HCG標(biāo)準(zhǔn)品與抗α-HCG抗體、抗β-HCG抗體和H-HCG抗體B207/B152均有較好的交叉反應(yīng)。

實(shí)施例三

H—HCG快速免疫診斷層析試紙的特異性檢測(cè)

1、溶液配制：0mIU/ml HCG溶液：稱取0.5gBSA于燒杯中，加入70ml PBS緩沖液溶解定容至100ml，0.22μm濾膜過(guò)濾后備用。

2、500mIU/ml人促黃體生成素(hLH)溶液：用含0.5％BSA的PBS溶液將hLH標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶，用0mIU/ml HCG溶液將其配制成濃度為500mIU/ml，即為hLH A液；用25mIU/ml HCG溶液將其配制成濃度為500mIU/ml，即為hLH B液；用110mIU/ml H-HCG溶液將其配制成濃度為500mIU/ml，即為hLH C液。

3、1000mIU/ml人卵泡刺激素(hFSH)溶液：用含0.5％BSA的PBS溶液將hFSH標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶，用0mIU/ml HCG溶液將其配制成濃度為1000mIU/ml，即為hFSH A液；用25mIU/ml HCG溶液將其配制成濃度為1000mIU/ml，即為hFSH B液；用110mIU/ml H-HCG溶液將其配制成濃度為1000mIU/ml，即為hFSH C液。

4、1000μIU/ml人促甲狀腺素(hTSH)溶液：用含0.5％BSA的PBS溶液將hLH標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶，用0mIU/ml HCG溶液將其配制成濃度為1000μIU/ml，即為hTSH A液；用25mIU/ml HCG溶液將其配制成濃度為1000μIU/ml，即為hTSH B液；用110mIU/ml H-HCG溶液將其配制成濃度為1000μIU/ml，即為hTSH C液。

5、陰性特異性：

單通道：將同一批號(hào)的試紙條分別放入濃度為500mIU/ml hLH A液、1000mIU/ml hFSH A液、1000μIU/ml hTSH A液溶液中停留約5s，取出平放在臺(tái)面上等待約15min，觀察結(jié)果，檢測(cè)結(jié)果30min內(nèi)有效，各濃度各重復(fù)3次，各溶液的3次檢測(cè)結(jié)果均為陰性則判斷該溶液的特異性為陰性；

雙通道：將同一批號(hào)的試紙條分別放入濃度為500mIU/ml hLH A液、1000mIU/ml hFSH A液、1000μIU/ml hTSH A液溶液中停留約5s(使加樣孔7浸沒(méi)在液面下)，取出平放在臺(tái)面上，當(dāng)吸樣墊視窗10中的顏色由白色變?yōu)榧t色時(shí)取50μL PBS溶液加在上層加液孔8中，等待約10min讀取結(jié)果，檢測(cè)結(jié)果30min內(nèi)有效，各濃度各重復(fù)3次，各溶液的3次檢測(cè)結(jié)果均為陰性則判斷該溶液的特異性為陰性。

表2單/雙通道陰性特異性測(cè)試結(jié)果

注：“-”表示不可見(jiàn)，“+++”表示明顯可見(jiàn)

從表2可知：?jiǎn)瓮ǖ篮碗p通道試紙條的陰性特異性測(cè)試HCG線和H-HCG線均為陰性，兩條T線均無(wú)假陽(yáng)性出現(xiàn)，該項(xiàng)指標(biāo)符合國(guó)標(biāo)要求。

6、陽(yáng)性特異性：

單通道：將同一批號(hào)的試紙條分別放入濃度為500mIU/ml Hlh B液和C液、1000mIU/ml hFSH B液和C液、1000μIU/ml hTSH B液和C液溶液中停留約5s，取出平放在臺(tái)面上等待約15min，觀察結(jié)果，檢測(cè)結(jié)果30min內(nèi)有效。各濃度各重復(fù)3次，各溶液的3次檢測(cè)結(jié)果均為陰性則判斷該溶液的特異性為陰性；

雙通道：將同一批號(hào)的試紙條分別放入濃度為500mIU/ml hLH B液和C液、1000mIU/ml hFSH B液和C液、1000μIU/ml hTSH B液和C液溶液中停留約5s(使加樣孔7浸沒(méi)在液面下)，取出平放在臺(tái)面上，當(dāng)吸樣墊視窗10中的顏色由白色變?yōu)榧t色后，取50μL PBS溶液加在上層加液孔8中，等待約10min讀取結(jié)果，檢測(cè)結(jié)果30min內(nèi)有效，各濃度各重復(fù)3次，各溶液的3次檢測(cè)結(jié)果均為陽(yáng)性則判斷該溶液的特異性為陽(yáng)性。

表3單/雙通道陽(yáng)性特異性測(cè)試結(jié)果

注：“-”表示不可見(jiàn)，“++”表示可見(jiàn)，“+++”表示明顯可見(jiàn)

從3表可知：?jiǎn)瓮ǖ篮碗p通道試紙條的陽(yáng)性特異性測(cè)試HCG線和H-HCG線均為陽(yáng)性，兩條T線均無(wú)假陰性出現(xiàn)，該項(xiàng)指標(biāo)也符合國(guó)標(biāo)要求。

實(shí)施例四：

H—HCG快速免疫診斷層析試紙的穩(wěn)定性檢測(cè)

將同一批號(hào)的試紙條在37℃放置7d、15d、21d后分別測(cè)試試紙條靈敏度、特異性及重復(fù)性，靈敏度和特異性測(cè)試方法同實(shí)施例二和實(shí)施例三。

重復(fù)性測(cè)試方法如下：

1、單通道：每個(gè)時(shí)間點(diǎn)取20根試紙條放入25mIU/ml HCG標(biāo)準(zhǔn)品或者110mIU/ml的H-HCG溶液中停留約5s，取出平放在臺(tái)面上等待約15min，觀察結(jié)果，檢測(cè)結(jié)果30min內(nèi)有效。

2、雙通道：每個(gè)時(shí)間點(diǎn)取20根試紙條放入25mIU/ml HCG標(biāo)準(zhǔn)品或者110mIU/ml的H-HCG溶液中停留約5s(使加樣孔7浸沒(méi)在液面下)，取出平放在臺(tái)面上，當(dāng)吸樣墊視窗10中的顏色由白色變?yōu)榧t色后，取50μL PBS溶液加在上層加液孔8中，等待約10min讀取結(jié)果，檢測(cè)結(jié)果在30min內(nèi)有效。

表4 37℃、21天破壞后試紙條單、雙通道最低檢測(cè)限測(cè)試結(jié)果

注：“-”表示不可見(jiàn)，“++”表示可見(jiàn)，“+++”表示明顯可見(jiàn),110＝110mIU/ml H-HCG溶液.

表5 37℃、21天破壞后試紙條陰性特異性測(cè)試結(jié)果

注：“-”表示不可見(jiàn)，“+++”表示明顯可見(jiàn)

表6 37℃、21天破壞后試紙條陽(yáng)性性特異性測(cè)試結(jié)果

注：“-”表示不可見(jiàn)，“++”表示可見(jiàn)，“+++”表示明顯可見(jiàn)

表7 37℃破壞后試紙條重復(fù)性測(cè)試結(jié)果

注：“-”表示不可見(jiàn)，“++”表示可見(jiàn)，“+++”表示明顯可見(jiàn)

從表4-7可知：?jiǎn)瓮ǖ篮碗p通道試紙條經(jīng)過(guò)37℃破壞后測(cè)試敏感性、特異性和重復(fù)性，結(jié)果均無(wú)假陽(yáng)性和假陰性，符合國(guó)標(biāo)要求，說(shuō)明試紙條穩(wěn)定性良好。

實(shí)施例五:

H—HCG快速免疫診斷層析試紙的臨床實(shí)驗(yàn)

對(duì)收集的臨床尿液、血液，使用本申請(qǐng)?jiān)嚰垪l，按照使用方法進(jìn)行檢測(cè)，以醫(yī)院臨床檢查結(jié)果進(jìn)行對(duì)照，醫(yī)院血檢結(jié)果顯示50份樣本中有5份樣本的血HCG值小于1.2mIU/ml，診斷為未懷孕，為陰性樣本，其它45份樣本的血HCG值大于5mIU/ml，診斷為懷孕，為陽(yáng)性樣本，經(jīng)過(guò)其它臨床輔助檢查，在45份陽(yáng)性樣本中診斷出5份胎停育樣本；將該50份樣本的尿液、血液分別用本試紙條檢測(cè)，試紙條檢出的5份陰性樣本與醫(yī)院臨床結(jié)果一致未出現(xiàn)假陽(yáng)性，試紙條檢出的其它45份樣本均為陽(yáng)性與醫(yī)院臨床結(jié)果一致未出現(xiàn)假陰性，HCG線符合率100％，另外在45份陽(yáng)性樣本中本試紙條檢測(cè)出的5份胎停育樣本與醫(yī)院臨床診斷結(jié)果也一致，H-HCG線對(duì)胎停育檢測(cè)符合率也為100％，說(shuō)明本申請(qǐng)的試紙條可以同時(shí)檢測(cè)正常懷孕和胎停育的異常妊娠或流產(chǎn)的初步診斷。本試紙條臨床測(cè)試見(jiàn)表8：

表8試紙條臨床測(cè)試結(jié)果

注：“-”表示不可見(jiàn)，“+++”表示明顯可見(jiàn)，++表示可見(jiàn)，+微弱可見(jiàn)

文中，H-HCG表示高糖基化人絨毛膜促性腺激素。

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。