本發(fā)明屬于蛋白和核酸檢測領域，具體的是肺癌血清標志物適配體和基因同時檢測試劑盒及應用。

背景技術：

傳統(tǒng)蛋白質檢測是以特定抗體同待檢測的蛋白質結合，通過形成特定的抗原-抗體復合物實現(xiàn)的檢測技術。以抗體捕捉待檢測蛋白為例，是在固相介質上包被抗體，然后與待檢測蛋白樣品孵育，洗去未結合的蛋白，最后用特異性識別抗體的標記抗體去檢測結合的抗體，許多檢測方法都是間接檢測的。標記包括放射性同位素，有機染料等。檢測方法中ELISA檢測(酶聯(lián)免疫吸附檢測)是臨床上廣泛應用的。

核酸與蛋白在生物體內相互作用是很普遍的現(xiàn)象。單鏈DNA能自身折疊形成二級結構、三級結構等，可以形成莖環(huán)、口袋、發(fā)卡等結構，這對核酸和蛋白質相互作用具有非常重要的作用。通過SELEX技術(指數(shù)富集的配基系統(tǒng)進化技術)進行體外分離血清標志物的適配體，適配體只識別特異性的血清標志物，而與其他的蛋白不結合，通過qRT-PCR(實時熒光定量PCR)能夠動態(tài)檢測血清樣品，能夠快速分析樣品中靶分子的量，并對其進行定量，進而為肺癌檢測提供了一種新的分子生物學檢測方法。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種肺癌血清標志物適配體和基因同時檢測試劑盒，通過qRT-PCR同時檢測適配體和基因序列，實現(xiàn)血清標志物適配體和基因同時檢測的技術方法，對研究蛋白質組學、基因組學具有重要意義。本發(fā)明的另一目的是提供一種肺癌血清標志物適配體和基因同時檢測試劑盒的應用方法。

本發(fā)明為實現(xiàn)上述目的所采用的技術方案是：肺癌血清標志物適配體和基因同時檢測試劑盒，其特征是：所述試劑盒主要包括待檢測血清樣品、瓊脂磁珠、洗脫液、檢測試劑、qRT-PCR檢測體系；

所述待檢測血清樣品含有被檢測標志物適配體和基因；

所述瓊脂磁珠用于形成瓊脂磁珠-肺癌血清復合物；

所述洗脫液是1×Binding buffer(結合緩沖液)+1％tween-20；

所述檢測試劑是肺癌血清標志物適配體+1×Binding buffer混合液；

所述qRT-PCR檢測體系是含有靶分子適配體和基因探針和引物的常規(guī)檢測試劑。

肺癌血清標志物適配體和基因同時檢測試劑盒的應用，其特征是：包括以下步驟：

(1)將瓊脂磁珠加入到待檢測血清樣品中，37℃孵育30min，形成瓊脂磁珠-待檢測血清樣品復合物，利用磁分離，分離出瓊脂磁珠，用洗脫液洗4次，每次1min，保留洗脫后的瓊脂磁珠；

(2)將上述步驟(1)中洗脫后的瓊脂磁珠加入到檢測試劑中，檢測試劑中肺癌血清標志物適配體與瓊脂磁珠-靶蛋白形成復合物結構，將未結合形成的肺癌血清標志物適配體與瓊脂磁珠-靶蛋白形成復合物結構用洗脫液洗掉，洗4次，每次1min，棄去洗脫液保留瓊脂磁珠；

(3)在步驟(2)中保留下的瓊脂磁珠中加入100μL純水，95℃下反應5min，吸取上清；

(4)將步驟(3)中的上清進行擴增基因常規(guī)監(jiān)測。

所述待檢測血清樣品為去除血細胞、血脂的血清。

所述基因是病原體、細菌、細胞生物體內的基因序列。

所述步驟(2)中瓊脂磁珠上連接肺癌血清標志物和特異性適配體，與靶蛋白結合形成瓊脂磁珠-肺癌血清復合物。

所述肺癌血清標志物適配體是由通過SELEX技術篩選得到的高特異性血清標志物適配體組成，適配體序列可以進一步優(yōu)化，從而提高適配體的穩(wěn)定性。

所述擴增基因常規(guī)監(jiān)測是qRT-PCR檢測、基因擴增檢測、生物芯片檢測中的一種。

所述肺癌血清標志物適配體和基因同時檢測是指篩選得到高特異性、強親和力的肺癌血清標志物適配體，將靶蛋白信號轉換成核酸信號，與基因在分子水平上統(tǒng)一檢測。

本發(fā)明所述肺癌血清標志物適配體和基因同時檢測試劑盒的應用，有益效果是：本發(fā)明的試劑盒是通過適配體與靶分子結合將靶分子信號轉換成核酸信號完成蛋白和基因同時檢測的方法，利用qRT-PCR進行動態(tài)及定量檢測。本發(fā)明操作簡便，實用性強，可以組裝成試劑盒或構建成生物芯片能夠廣泛的應用于基礎研究與臨床診斷，具有較高的經濟效益和社會公益。

附圖說明

圖1為肺癌血清核酸蛋白qRT-PCR檢測方法流程圖。

圖2為肺癌血清適配體特異性鑒定實時熒光定量-PCR圖。

圖中：1-陽性；2-陰性；3-空白；4，5-肺癌血清；6，7-正常人血清

具體實施方式

下面結合附圖和實施例對本發(fā)明進行詳細說明，但本發(fā)明并不局限于具體實施例。

實施例

肺癌血清標志物適配體和基因同時檢測試劑盒，主要包括待檢測血清樣品、瓊脂磁珠、洗脫液、檢測試劑、qRT-PCR檢測體系；

所述待檢測血清樣品含有被檢測標志物適配體和基因；

所述瓊脂磁珠用于形成瓊脂磁珠-肺癌血清復合物；

所述洗脫液是1×Binding buffer+1％tween-20；

所述檢測試劑是肺癌血清標志物適配體+1×Binding buffer混合液；

所述qRT-PCR檢測體系是含有靶分子適配體和基因探針和引物的常規(guī)檢測試劑。

如圖1所示的肺癌血清標志物適配體和基因同時檢測試劑盒應用方法，包括以下步驟：

(1)制備血清樣品：采血，3000rpm離心5min，分離血清，4℃保存；

(2)瓊脂磁珠-肺癌血清標志物復合物的形成：包被肺癌血清瓊脂磁珠50μL，加入200μL制備好的血清樣品，形成瓊脂磁珠-血清復合物，37℃，孵育30min，洗出未結合的上清液，用1×Binding buffer+1％tween-20 200μL洗4次，每次1min，加入肺癌血清腫瘤標志物適配體孵育30min，形成瓊脂磁珠-血清-適配體復合物結構，用1×Binding buffer+1％tween-20 200μL洗4次，每次1min，用磁分離，分離出瓊脂磁珠，然后在瓊脂磁珠中加入100μL純水，95℃，5min，吸取上清；

(3)qRT-PCR檢測：將(2)中最后收集的上清加入到qRT-PCR檢測檢測體系中，進行動態(tài)檢測及定量分析；

(4)通過計算機采集數(shù)據(jù)、分析、整理數(shù)據(jù)，得到血清標志物和基因的分子拷貝數(shù)。

以上內容是結合優(yōu)選技術方案對本發(fā)明所做的進一步詳細說明，不能認定發(fā)明的具體實施僅限于這些說明。對本發(fā)明所屬技術領域的普通技術人員來說，在不脫離本發(fā)明的構思的前提下，還可以做出簡單的推演及替換，都應當視為本發(fā)明的保護范圍。