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肺癌血清標(biāo)志物適配體和基因同時(shí)檢測試劑盒及應(yīng)用的制作方法

文檔序號(hào):12746798閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.肺癌血清標(biāo)志物適配體和基因同時(shí)檢測試劑盒,其特征是:所述試劑盒主要包括待檢測血清樣品、瓊脂磁珠、洗脫液、檢測試劑、qRT-PCR檢測體系;

所述待檢測血清樣品含有被檢測標(biāo)志物適配體和基因;

所述瓊脂磁珠用于形成瓊脂磁珠-肺癌血清復(fù)合物;

所述洗脫液是1×Binding buffer+1%tween-20;

所述檢測試劑是肺癌血清標(biāo)志物適配體+1×Binding buffer混合液;

所述qRT-PCR檢測體系是含有靶分子適配體和基因探針和引物的常規(guī)檢測試劑。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肺癌血清標(biāo)志物適配體和基因同時(shí)檢測試劑盒的應(yīng)用,其特征是:包括以下步驟:

(1)將瓊脂磁珠加入到待檢測血清樣品中,37℃孵育30min,形成瓊脂磁珠-待檢測血清樣品復(fù)合物,利用磁分離,分離出瓊脂磁珠,用洗脫液洗4次,每次1min,保留洗脫后的瓊脂磁珠;

(2)將上述步驟(1)中洗脫后的瓊脂磁珠加入到檢測試劑中,檢測試劑中肺癌血清標(biāo)志物適配體與瓊脂磁珠-靶蛋白形成復(fù)合物結(jié)構(gòu),將未結(jié)合形成的肺癌血清標(biāo)志物適配體與瓊脂磁珠-靶蛋白形成復(fù)合物結(jié)構(gòu)用洗脫液洗掉,洗4次,每次1min,棄去洗脫液保留瓊脂磁珠;

(3)在步驟(2)中保留下的瓊脂磁珠中加入100μL純水,95℃下反應(yīng)5min,吸取上清;

(4)將步驟(3)中的上清進(jìn)行擴(kuò)增基因常規(guī)監(jiān)測。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的肺癌血清標(biāo)志物適配體和基因同時(shí)檢測試劑盒的應(yīng)用,其特征是:所述待檢測血清樣品為去除血細(xì)胞、血脂的血清。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的肺癌血清標(biāo)志物適配體和基因同時(shí)檢測試劑盒的應(yīng)用,其特征是:所述基因是病原體、細(xì)菌、細(xì)胞生物體內(nèi)的基因序列。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的肺癌血清標(biāo)志物適配體和基因同時(shí)檢測試劑盒的應(yīng)用,其特征是:所述步驟(2)中瓊脂磁珠上連接肺癌血清標(biāo)志物和特異性適配體,與靶蛋白結(jié)合形成瓊脂磁珠-肺癌血清復(fù)合物。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的肺癌血清標(biāo)志物適配體和基因同時(shí)檢測試劑盒的應(yīng)用,其特征是:所述肺癌血清標(biāo)志物適配體是由通過SELEX技術(shù)篩選得到的高特異性血清標(biāo)志物適配體組成,適配體序列可以進(jìn)一步優(yōu)化,從而提高適配體的穩(wěn)定性。

7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的肺癌血清標(biāo)志物適配體和基因同時(shí)檢測試劑盒的應(yīng)用,其特征是:所述擴(kuò)增基因常規(guī)監(jiān)測是qRT-PCR檢測、基因擴(kuò)增檢測、生物芯片檢測中的一種。

8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的肺癌血清標(biāo)志物適配體和基因同時(shí)檢測試劑盒的應(yīng)用,其特征是:所述肺癌血清標(biāo)志物適配體和基因同時(shí)檢測是指篩選得到高特異性、強(qiáng)親和力的肺癌血清標(biāo)志物適配體,將靶蛋白信號(hào)轉(zhuǎn)換成核酸信號(hào),與基因在分子水平上統(tǒng)一檢測。

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