本發(fā)明涉及藥物含量測定方法領(lǐng)域，具體涉及一種氨酚曲馬多膠囊有關(guān)物質(zhì)的測定方法。
背景技術(shù)：
：氨酚曲馬多膠囊為對乙酰氨基酚和鹽酸曲馬多組成的復(fù)方制劑，是在復(fù)方鹽酸曲馬多片的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步開發(fā)的新劑型，臨床上多用于中度至重度急性疼痛的短期治療方面。氨酚曲馬多將鹽酸曲馬多和對乙酰氨基酚兩種單一藥物的作用相結(jié)合，發(fā)揮了單藥各自的特點(diǎn)，比鹽酸曲馬多起效快，疼痛緩解的時間比對乙酰氨基酚長，降低了兩種藥物的使用劑量，并且聯(lián)合使用具有協(xié)同作用?！吨腥A人民共和國藥典》2015年版收載鹽酸曲馬多的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，在該質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的檢查項(xiàng)下對有關(guān)物質(zhì)的測定進(jìn)行了相關(guān)說明，采用液相色譜法對其雜質(zhì)I及其他各雜質(zhì)的含量進(jìn)行了限定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，不得過鹽酸曲馬多標(biāo)示量的0.3％，其他各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對照溶液中曲馬多峰面積(0.1％)。目前，關(guān)于氨酚曲馬多有關(guān)物質(zhì)測定的文獻(xiàn)相對較少。已發(fā)表的如趙宇清等參考?xì)W洲藥典使用高效液相色譜法對鹽酸曲馬多有關(guān)物質(zhì)如O-去甲基曲馬多、順式曲馬多等中間體雜質(zhì)以及1,2-烯烴、1,6-烯烴等降解產(chǎn)物進(jìn)行了測定；胡玉慶通過對氨酚曲馬多片的有關(guān)物質(zhì)方法學(xué)研究，建立了HPLC法檢查氨酚曲馬多片的有關(guān)物質(zhì)的方法。另外，在專利文獻(xiàn)方面，目前公開了《一種高效液相色譜法測定復(fù)方制劑氨酚曲馬多片有關(guān)物質(zhì)的方法》，該文獻(xiàn)中公開了一種以甲醇和磷酸二氫鉀為流動相的高效液相色譜法進(jìn)行氨酚曲馬多片有關(guān)物質(zhì)的測定。本發(fā)明采用高效液相色譜法對氨酚曲馬多膠囊有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行測定，通過對其色譜條件篩選，改進(jìn)其測定方法，對有關(guān)物質(zhì)的檢測更加靈敏和嚴(yán)格，保證氨酚曲馬多膠囊的安全性和有效性。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種氨酚曲馬多膠囊有關(guān)物質(zhì)的測定方法，通過有關(guān)物質(zhì)含量測定方法的改進(jìn)，改進(jìn)后的標(biāo)準(zhǔn)能夠更加嚴(yán)格控制氨酚曲馬多膠囊的的質(zhì)量，保證其安全性和有效性。本發(fā)明所述的方法通過以下步驟實(shí)現(xiàn)：1.一種氨酚曲馬多膠囊有關(guān)物質(zhì)含量測定的方法，其特征在于，該膠囊的有關(guān)物質(zhì)及對氨基酚檢查方法：供試品溶液制備：取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混合均勻，精密稱取適量(約相當(dāng)于鹽酸曲馬多37.5mg)，置50ml量瓶中，加10％甲醇30ml，超聲使溶解，然后稀釋至刻度，搖勻，0.45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；精密量取供試品溶液1ml，置100ml量瓶中，用10％甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試溶液；對照品溶液制備：取順式鹽酸曲馬多對照品適量，精密稱定，用10％甲醇制成每1ml中約含0.5μg的溶液，作為對照品溶液；取對氨基酚對照品、對乙酰氨基酚對照品、順式鹽酸曲馬多對照品及鹽酸曲馬多對照品適量，加10％甲醇溶解并稀釋制成每1ml中分別含25μg的混合溶液；色譜條件：辛烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，0.005M磷酸二氫鉀(含0.1％磷酸和0.1％三乙胺)-四氫呋喃(95:5)為流動相，流速1.0ml/min，柱溫35℃，檢測波長215nm，對氨基酚、對乙酰氨基酚、順式鹽酸曲馬多及鹽酸曲馬多間分離度應(yīng)大于5，理論板數(shù)按鹽酸曲馬多計(jì)應(yīng)大于5000；檢測：精密量取對照溶液、順式鹽酸曲馬多對照品溶液和供試品溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至鹽酸曲馬多峰保留時間的2.5倍，按外標(biāo)法計(jì)算，即得。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明采用高效液相色譜法方法測定氨酚曲馬多膠囊中的有關(guān)物質(zhì)，通過對該方法檢測中流動相、檢測波長等進(jìn)行篩選改進(jìn)，提高了檢出能力，增加了HPLC對照品法檢查順式鹽酸曲馬多，制訂了順式鹽酸曲馬多和其他有關(guān)物質(zhì)的限度，使變更后的方法更為科學(xué)合理，能夠有效控制氨酚曲馬多膠囊的質(zhì)量。附圖說明圖1是色譜條件篩選中專屬性研究未破壞樣品色譜圖。圖2是色譜條件篩選中專屬性研究酸破壞實(shí)驗(yàn)色譜圖。圖3是色譜條件篩選中專屬性研究堿破壞實(shí)驗(yàn)色譜圖。圖4是色譜條件篩選中專屬性研究氧化破壞實(shí)驗(yàn)色譜圖。圖5是色譜條件篩選中專屬性研究高溫破壞實(shí)驗(yàn)色譜圖。圖6是色譜條件篩選中專屬性研究光照破壞實(shí)驗(yàn)色譜圖。圖7是色譜條件篩選中專屬性研究系統(tǒng)適用性色譜圖。圖8是順式標(biāo)鹽酸曲馬多標(biāo)準(zhǔn)曲線。圖9是順式鹽酸曲馬多定量限色譜圖。圖10是順式鹽酸曲馬多檢測限色譜圖。圖11是其他有關(guān)物質(zhì)檢查濃度為75μg/ml供試品中有關(guān)物質(zhì)檢測色譜圖。圖12是其他有關(guān)物質(zhì)檢查濃度為225μg/ml供試品中有關(guān)物質(zhì)檢測色譜圖。具體實(shí)施例本發(fā)明所述的方法通過以下具體的實(shí)施例進(jìn)行更為詳細(xì)的說明。實(shí)施例11實(shí)驗(yàn)儀器、材料與試劑樣品：氨酚曲馬多膠囊(批號分別為：140601、140602、140603)，由山西好醫(yī)生藥業(yè)有限公司提供；對照品：對乙酰氨基酚(批號：100018-200408)、鹽酸曲馬多(批號：171242-201005)、順式鹽酸曲馬(批號：171255-201103)、對氨基酚(批號：100802-201002)，來源于中國藥品生物制品檢定所、中國食品藥品檢定研究院；試劑：四氫呋喃為色譜純，三乙胺、磷酸和磷酸二氫鉀為分析純，水為自制超純水；儀器：Agilent1200高效液相色譜儀(安捷倫)，LC-2010CHT高效液相色譜儀(日本島津)，電子天平MettlerXS-205。2實(shí)驗(yàn)部分供試品溶液制備：取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混合均勻，精密稱取適量(約相當(dāng)于鹽酸曲馬多37.5mg)，置50ml量瓶中，加10％甲醇30ml，超聲使溶解，然后稀釋至刻度，搖勻，0.45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；精密量取供試品溶液1ml，置100ml量瓶中，用10％甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試溶液；對照品溶液制備：取順式鹽酸曲馬多對照品適量，精密稱定，用10％甲醇制成每1ml中約含0.5μg的溶液，作為對照品溶液；取對氨基酚對照品、對乙酰氨基酚對照品、順式鹽酸曲馬多對照品及鹽酸曲馬多對照品適量，加10％甲醇溶解并稀釋制成每1ml中分別含25μg的混合溶液；色譜條件：辛烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，0.005M磷酸二氫鉀(含0.1％磷酸和0.1％三乙胺)-四氫呋喃(95:5)為流動相，流速1.0ml/min，柱溫35℃，檢測波長215nm；3檢測與結(jié)果精密量取供試品溶液和順式鹽酸曲馬多對照品溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法計(jì)算順式鹽酸曲馬多的含量，結(jié)果見表9。表9順式鹽酸曲馬多檢測結(jié)果批號140601140602140603順式鹽酸曲馬多含量(％)0.0260.0250.025三批氨酚曲馬多膠囊中順式鹽酸曲馬多含量最高為0.026％，最低為0.025％，均小于0.2％。精密量取上述供試品溶液和對照溶液各20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖至鹽酸曲馬多保留時間的2.5倍。供試品溶液的色譜圖中如顯現(xiàn)除對氨基酚和順式鹽酸曲馬多以外的其它雜質(zhì)峰，則計(jì)算其他各雜質(zhì)峰面積的和，并與對照溶液主峰面積比較，計(jì)算其他有關(guān)物質(zhì)含量。表10其他有關(guān)物質(zhì)檢測結(jié)果三批氨酚曲馬多膠囊結(jié)果顯示其他有關(guān)物質(zhì)檢測總含量均小于0.8％，其中單個其他有關(guān)物質(zhì)最高為0.159％，最低為0.003％，見表10。實(shí)驗(yàn)例通過實(shí)驗(yàn)例對本發(fā)明所公開的方法進(jìn)行色譜條件篩選、方法學(xué)考察，能有效的說明本方法的可靠性、實(shí)用性、穩(wěn)定性。實(shí)驗(yàn)例1氨酚曲馬多膠囊有關(guān)物質(zhì)測定色譜條件篩選基本色譜條件：辛烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，0.005M磷酸二氫鉀(含0.1％磷酸和0.1％三乙胺)-四氫呋喃(95:5)為流動相，流速1.0ml/min，柱溫35℃。(1)檢測波長選擇參考USP美國藥典(36)中氨酚曲馬多片中有關(guān)物質(zhì)檢測波長216nm，選用了215nm為檢測波長。雖然215nm波長檢測的溶劑峰較為明顯，但對有關(guān)物質(zhì)檢測無干擾，還有利于檢出僅有末端紫外吸收的雜質(zhì)，因此，確定選擇檢測波長215nm。(2)專屬性以酸破壞實(shí)驗(yàn)、堿破壞實(shí)驗(yàn)、氧化破壞實(shí)驗(yàn)、高溫破壞實(shí)驗(yàn)和光照破壞實(shí)驗(yàn)考察上述色譜條件能否充分檢出氨酚曲馬多膠囊中的順式曲馬多和其他有關(guān)物質(zhì)。①系統(tǒng)適用性：取本品(批號140601)適量，加甲醇-水(1:9)溶解制成約含鹽酸曲馬多1.5mg/ml水溶液，為貯備液。取貯備液1ml于10ml量瓶中，加甲醇-水(1:9)稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。精密量取供試品10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。主成分對乙酰氨基酚和鹽酸曲馬多與相鄰雜質(zhì)完全分離，分離度大于1.5，且陰性無干擾，對乙酰氨基酚峰純度因子為989.496，鹽酸曲馬多峰純度因子為999.988，方法具有專屬性。見圖1。②酸破壞實(shí)驗(yàn)：取貯備液1ml于10ml量瓶中，加2mol/L鹽酸溶液2ml，搖勻，室溫放置24h，用2mol/L氫氧化鉀溶液調(diào)pH至中性，加甲醇-水(1:9)稀釋至刻度，搖勻，即得酸破壞供試品溶液。精密量取供試品10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果表明，與破壞前相比，有破壞產(chǎn)物出現(xiàn)；氨酚曲馬多膠囊的主成分峰與各雜質(zhì)峰均能有效分離，對乙酰氨基酚峰純度因子為997.363，鹽酸曲馬多峰純度因子為999.860，各雜質(zhì)峰彼此分離，說明該色譜條件具有較好的專屬性。見圖2。③堿破壞實(shí)驗(yàn)：取貯備液1ml于10ml量瓶中，加2mol/L氫氧化鉀溶液2ml，搖勻，室溫放置24h，用2mol/L鹽酸溶液調(diào)pH至中性，加甲醇-水(1:9)稀釋至刻度，搖勻，即得堿破壞供試品溶液。精密量取供試品10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果表明，與破壞前相比，有破壞產(chǎn)物出現(xiàn)；氨酚曲馬多膠囊的主成分峰與各雜質(zhì)峰均能有效分離，對乙酰氨基酚峰純度因子為998.890，鹽酸曲馬多峰純度因子為999.588，各雜質(zhì)峰彼此分離，該色譜條件具有較好的專屬性。見圖3。④氧化破壞實(shí)驗(yàn)：取貯備液1ml于10ml量瓶中，加30％過氧化氫溶液2ml，搖勻，室溫放置24h，加甲醇-水(1:9)稀釋至刻度，搖勻，即得氧化破壞供試品溶液。精密量取供試品10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果表明，與破壞前相比，有破壞產(chǎn)物出現(xiàn)；氨酚曲馬多膠囊的主成分峰與各雜質(zhì)峰均能有效分離，對乙酰氨基酚峰純度因子為994.098，鹽酸曲馬多峰純度因子為999.379，各雜質(zhì)峰彼此分離，說明該色譜條件具有較好的專屬性。見圖4。⑤高溫破壞實(shí)驗(yàn)：取貯備液1ml于10ml刻度試管中，于100℃水浴加熱11h(若溶液近干則補(bǔ)加溶劑)，加甲醇-水(1:9)稀釋至刻度，搖勻，即得高溫破壞供試品溶液。精密量取供試品10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果表明，與破壞前相比，有破壞產(chǎn)物出現(xiàn)；氨酚曲馬多膠囊的主成分峰與各雜質(zhì)峰均能有效分離，對乙酰氨基酚峰純度因子為994.499，鹽酸曲馬多峰純度因子為998.654，各雜質(zhì)峰彼此分離，說明該色譜條件具有較好的專屬性。見圖5。⑥光照破壞實(shí)驗(yàn)：取貯備液1ml于10ml量瓶中，置照度為4500lx±500lx的實(shí)驗(yàn)箱中照射32小時，加甲醇-水(1:9)稀釋至刻度，搖勻，即得光照破壞供試品溶液。精密量取10μl注入液相色譜儀測定，記錄色譜圖。結(jié)果表明，與破壞前相比，未見破壞產(chǎn)物；氨酚曲馬多膠囊主峰與各雜質(zhì)峰均能有效分離，對乙酰氨基酚峰純度因子為989.524，鹽酸曲馬多峰純度因子為999.905，各雜質(zhì)峰彼此分離。說明該色譜條件具有較好的專屬性。見圖6。強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、光照、氧化、高溫等破壞實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，所采用的色譜條件能夠使氨酚曲馬多膠囊主成分峰與雜質(zhì)峰分離，各雜質(zhì)峰彼此分離，該檢查方法有較強(qiáng)的專屬性。⑦色譜系統(tǒng)適用性以辛烷基鍵合硅膠為填充劑，0.005M磷酸二氫鉀(含0.1％磷酸和0.1％三乙胺)-四氫呋喃(95:5)流動相，215nm為檢測波長，對氨基酚、對乙酰氨基酚、順式鹽酸曲馬多及鹽酸曲馬多間分離度應(yīng)大于5，理論板數(shù)按鹽酸曲馬多計(jì)應(yīng)大于5000。系統(tǒng)適用性試驗(yàn)表明，溶劑及輔料對測定無干擾；對氨基酚、對乙酰氨基酚、順式鹽酸曲馬多及鹽酸曲馬多彼此之間完全分離，分離度大于5；鹽酸曲馬多峰理論板數(shù)大于5000。見圖7。實(shí)驗(yàn)例2氨酚曲馬多膠囊有關(guān)物質(zhì)測定的方法學(xué)考察2.1順式鹽酸曲馬多檢測方法學(xué)考察①線性考察取順式鹽酸曲馬多對照品適量，精密稱定，加甲醇-水(1:9)溶解制成濃度為11μg/ml、5.5μg/ml、3.3μg/ml、1.1μg/ml、0.55μg/ml、0.33μg/ml、0.11μg/ml、0.055μg/ml和0.0275μg/ml的系列標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液。精密量取該線性系列溶液各10μl分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，回歸得直線方程為y＝14953x-61.488，R2＝1；線性范圍為0.0275～11.007μg/ml。結(jié)果見表1及圖8。表1線性數(shù)據(jù)表結(jié)果表明，順式鹽酸曲馬多在濃度0.0275～11.007μg/ml范圍內(nèi)，呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為1。②檢測限和定量限考察取線性研究中順式鹽酸曲馬多對照品低濃度溶液(0.275μg/ml)逐漸稀釋，按信噪比法，在S/N≥10，確定定量限為0.0275μg/ml，相當(dāng)于供試品濃度的0.011％，表明供試品溶液濃度為0.25mg/ml時，能有效定量出0.011％的順式鹽酸曲馬多；在S/N≥3時，檢測限為0.011μg/ml，相當(dāng)于供試品濃度的0.0044％，表明供試品溶液濃度為0.25mg/ml時，能有效檢出0.0044％以上的順式鹽酸曲馬多。見圖9，10。③準(zhǔn)確度考察取本品適量(批號140601)，精密稱定，加10％甲醇溶液制成約10mg/ml(以鹽酸曲馬多計(jì))的溶液，作為供試品儲備液。精密量取該儲備液各1.0ml分別于9只10ml的量瓶中，分為三組，分別加入濃度為0.3μg/ml順式鹽酸曲馬多對照品溶液各1.0ml、2.0和3.0ml，加10％甲醇溶液稀釋至刻度，制成低、中、高三個濃度組的供試品溶液。精密量取供試品溶液各20μl分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法計(jì)算。結(jié)果見表2。表2回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果結(jié)果表明，本法加樣回收率平均值為100.0％，RSD為0.66％(n＝9)，說明該方法測定結(jié)果準(zhǔn)確度良好。④重復(fù)性考察取本品適量(批號140601)，精密稱定，加10％甲醇溶液分別制成高、中、低(約含鹽酸曲馬多360μg/ml、240μg/ml和120μg/ml)三種濃度的供試品溶液各3份。精密量取供試品溶液與對照品溶液各10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。計(jì)算順式鹽酸曲馬多含量的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD％)，結(jié)果見表3。表3重復(fù)性結(jié)果測得結(jié)果的平均標(biāo)示量含量為0.026％，總相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD％)為1.37％(n＝9)，表明本法重復(fù)性良好。⑤中間精密度考察于不同時間、不同人員、不同設(shè)備條件下進(jìn)行中間精密度實(shí)驗(yàn)。取本品適量(批號140601)，精密稱定，加流動相分別制成約含鹽酸曲馬多250、500和700μg/ml的低、中、高三組溶液，分別精密量取各供試品溶液10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，分別計(jì)算高、中、低濃度組順式鹽酸曲馬多含量的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD％)和總相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD％)，結(jié)果見表4。表4中間精密度結(jié)果順式鹽酸曲馬多的平均含量為0.026％，總相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.75％(n＝18)，表明本品在不同時間、不同人員、不同設(shè)備條件下檢測結(jié)果的中間精密度良好。⑥范圍考察由以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，供試品溶液中順式鹽酸曲馬多濃度在0.03μg/ml～0.09μg/ml之間，線性良好，按擬定的方法測定，精密度及準(zhǔn)確度均良好。⑦溶液穩(wěn)定性考察取同一份供試品溶液及對照品溶液，間隔一定時間分別進(jìn)樣，記錄峰面積，測定結(jié)果見表5。表5溶液穩(wěn)定性結(jié)果表明，供試品溶液中5個有關(guān)物質(zhì)的峰面積RSD均小于2.0％，且供試品溶液中未檢出新增物質(zhì)，溶液在24小時內(nèi)穩(wěn)定；順式鹽酸曲馬多對照品溶液峰面積RSD為0.05％，溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。⑧耐用性考察根據(jù)《中國藥典》2010年版二部附錄XIXA“藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證”要求，考察了色譜柱品牌、流動相組成、柱溫等變化條件下，對方法測定的影響。Ⅰ、不同品牌色譜柱同一供試品溶液，分別用同一類型不同廠家的色譜柱測定，結(jié)果見表6。表6不同品牌色譜柱的比較色譜柱tR(min)/tR＇理論板數(shù)分離度*含量％Kromasil100-5C810.763/0.80153843.1430.026UltimateC813.325/0.79267243.4720.026AgilentHC-C812.466/0.79176641.8070.027注：tR＇相對鹽酸曲馬多保留時間，*順式鹽酸曲馬多與相鄰有關(guān)物質(zhì)分離度，下同。結(jié)果表明，用不同品牌的C8柱(250mm×4.6mm，5μm)測定順式鹽酸曲馬多，保留時間略有差異，相對保留時間基本一致，與相鄰有關(guān)物質(zhì)峰完全分開，理論板數(shù)均達(dá)到要求。測得順式鹽酸曲馬多含量平均值為0.026％，RSD為0.73％，說明不同品牌的C8柱對測定結(jié)果無明顯影響。Ⅱ、不同比例流動相將上述供試品溶液，分別在不同比例的流動相條件下測定含量，結(jié)果見表7。表7流動相比例變化的影響結(jié)果表明流動相微小變化，導(dǎo)致順式鹽酸曲馬多的保留時間略有差異，相對保留時間基本一致，與相鄰有關(guān)物質(zhì)峰基本分離，理論板數(shù)均達(dá)到要求，測得順式鹽酸曲馬多含量平均值為0.027，RSD為1.08％，說明流動相比例的微小變化對測定結(jié)果無明顯影響。Ⅲ、不同柱溫將上述供試品溶液，分別在不同的柱溫下測定含量，結(jié)果見表8。表8不同的柱溫比較柱溫tR(min)/tR＇理論板數(shù)分離度含量％30℃12.885/0.78182312.6270.02635℃12.466/0.79176641.8070.02740℃12.039/0.80159561.1730.026結(jié)果表明，在不同的柱溫條件下，保留時間隨柱溫升高略有縮短，相對保留時間基本一致，與相鄰有關(guān)物質(zhì)峰基本分離，理論塔板數(shù)均達(dá)到要求，測得順式鹽酸曲馬多含量平均值為0.026，RSD為1.17％，說明柱溫的正常波動對測定結(jié)果無明顯影響。綜上所述，該方法系統(tǒng)適用性、專屬性、線性、準(zhǔn)確度、精密度、耐用性方面符合方法學(xué)驗(yàn)證要求，說明本方法測定順式鹽酸曲馬多的含量準(zhǔn)確、可行。2.2其他有關(guān)物質(zhì)檢查的方法學(xué)考察①專屬性：同實(shí)驗(yàn)例1色譜條件篩選中第(2)專屬性。②濃度選擇：取本品適量，加流動相分別配制成含鹽酸曲馬多約425、375、300、225、150和75μg/ml的供試品溶液，分別進(jìn)樣20μl，記錄色譜圖。結(jié)果表明，供試品濃度(以鹽酸曲馬多計(jì))為75μg/ml時已接近順式鹽酸曲馬多的檢測限，在此濃度時已能有效檢出其他有關(guān)物質(zhì)。繼續(xù)增大供試液檢測濃度，也未見新增有關(guān)物質(zhì)，為使氨酚曲馬多膠囊中的有關(guān)物質(zhì)能充分檢出，選擇了供試品溶液濃度(以鹽酸曲馬多計(jì))為0.25mg/ml。為使氨酚曲馬多膠囊中的其他有關(guān)物質(zhì)能與順式鹽酸曲馬多同時檢測，選擇供試品溶液濃度(以鹽酸曲馬多計(jì))為0.25mg/ml，見圖11，12。③檢測限和定量限取對照品溶液(含鹽酸曲馬多0.225μg/ml逐漸稀釋，按信噪比法，在S/N≥10，確定定量限為0.0225μg/ml，相當(dāng)于供試品濃度的0.009％，表明供試品溶液濃度為0.25mg/ml時，能有效定量檢出0.009％以上的雜質(zhì)；在S/N≥3時，檢測限為0.009μg/ml，相當(dāng)于供試品濃度的0.0036％，表明供試品溶液濃度為0.25mg/ml時，能有效檢出0.0036％以上的雜質(zhì)。其他有關(guān)物質(zhì)采用自身對照法測定，按鹽酸曲馬多計(jì)，檢測限和定量限分別為0.0036％和0.009％。2.3檢測與結(jié)果2.3.1順式鹽酸曲馬多的測定與結(jié)果精密量取供試品溶液和順式鹽酸曲馬多對照品溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法計(jì)算順式鹽酸曲馬多的含量，結(jié)果見表9。表9順式鹽酸曲馬多檢測結(jié)果批號140601140602140603順式鹽酸曲馬多含量(％)0.0260.0250.025三批氨酚曲馬多膠囊中順式鹽酸曲馬多含量最高為0.026％，最低為0.025％，均小于0.2％。2.3.2其他有關(guān)物質(zhì)的測定與結(jié)果精密量取上述供試品溶液和對照溶液各20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖至鹽酸曲馬多保留時間的2.5倍。供試品溶液的色譜圖中如顯現(xiàn)除對氨基酚和順式鹽酸曲馬多以外的其它雜質(zhì)峰，則計(jì)算其他各雜質(zhì)峰面積的和，并與對照溶液主峰面積比較，計(jì)算其他有關(guān)物質(zhì)含量，結(jié)果見表10。表10其他有關(guān)物質(zhì)檢測結(jié)果其他有關(guān)物質(zhì)總含量均小于0.8％，其中單個其他有關(guān)物質(zhì)最高為0.159％，最低為0.003％。參比實(shí)施例采用高效液相色譜法進(jìn)行氨酚曲馬多膠囊有關(guān)物質(zhì)的測定，此方法與本發(fā)明中公開的方法其差異主要在于色譜條件的不同。參比實(shí)施例11實(shí)驗(yàn)儀器、材料與試劑樣品：氨酚曲馬多膠囊(批號分別為：140601、140602、140603)，由山西好醫(yī)生藥業(yè)有限公司提供；對照品：鹽酸曲馬多(批號：171242-201005)、順式鹽酸曲馬(批號：171255-201103)、對乙酰氨基酚(批號：100018-200408)、對氨基酚(批號：100802-201002)，來源于中國藥品生物制品檢定所、中國食品藥品檢定研究院；試劑：甲醇為色譜純，三乙胺、磷酸和磷酸二氫鉀為分析純，水為自制超純水；儀器：Agilent1200高效液相色譜儀(安捷倫)，電子天平MettlerXS-205。2實(shí)驗(yàn)部分供試品溶液制備：取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混合均勻，精密稱取適量(約相當(dāng)于鹽酸曲馬多40mg)，置10ml量瓶中，加水稀釋至刻度，超聲2分鐘，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。對照品溶液制備：精密量取供試品溶液適量，加水稀釋成每1ml含順式鹽酸曲馬多40μg的溶液作為對照溶液；色譜條件：辛烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以磷酸鹽緩沖液(取磷酸二氫鉀6.80g，三乙胺7.0ml，加水溶解并稀釋至1000ml，用10％稀磷酸調(diào)pH為5.0)-甲醇(70：30)為流動相，流速為1.0ml/min；檢測波長為270nm。理論塔板數(shù)按鹽酸曲馬多計(jì)算應(yīng)不低于1500。3檢測與結(jié)果精密量取供試品溶液和順式鹽酸曲馬多對照品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法計(jì)算順式鹽酸曲馬多的含量，結(jié)果見表9。表9順式鹽酸曲馬多檢測結(jié)果批號140601140602140603順式鹽酸曲馬多含量(％)未檢出未檢出未檢出三批氨酚曲馬多膠囊均未檢出順式鹽酸曲馬多。2.3.2其他有關(guān)物質(zhì)的測定與結(jié)果精密量取上述供試品溶液和對照溶液各10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖至鹽酸曲馬多保留時間的2.5倍。供試品溶液的色譜圖中如顯現(xiàn)除對氨基酚和順式鹽酸曲馬多以外的其它雜質(zhì)峰，則計(jì)算其他各雜質(zhì)峰面積的和，并與對照溶液主峰面積比較，計(jì)算其他有關(guān)物質(zhì)含量，見表10。表10其他有關(guān)物質(zhì)檢測結(jié)果批號140601140602140603ΣA有關(guān)物質(zhì)(％)0.250.230.24三批氨酚曲馬多膠囊檢測結(jié)果顯示其他有關(guān)物質(zhì)總含量均小于0.8％。通過參比實(shí)施例的方法未檢測出氨酚曲馬多中順式鹽酸曲馬多，而本發(fā)明的測定方法所檢測的順式鹽酸曲馬多含量最低可至0.025％，對其他有關(guān)物質(zhì)的檢測限度控制亦較參比實(shí)施例嚴(yán)格，因此本發(fā)明所建立的方法其檢測的靈敏度與準(zhǔn)確性更高。本發(fā)明技術(shù)效果與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明采用高效液相色譜法通過對流動相、檢測波長等的改進(jìn)，提高了對氨酚曲馬多膠囊中有關(guān)物質(zhì)順式鹽酸曲馬多與其他有關(guān)物質(zhì)的檢測靈敏度與準(zhǔn)確性，同時增加了HPLC對照品法檢查順式鹽酸曲馬多的含量，制訂了順式鹽酸曲馬多和其他有關(guān)物質(zhì)的限度，使變更后的方法更為科學(xué)合理，能夠有效控制氨酚曲馬多膠囊的質(zhì)量，保證氨酚曲馬多膠囊的安全性和效用性。當(dāng)前第1頁1 2 3