1.一種用于可溶性CD40配體(sCD40L)檢測(cè)的可再生電化學(xué)免疫傳感器制備方法,其特征在于包括以下步驟:
(1)羧基功能化多壁碳納米管(c-MWCNTs)-聚乙烯亞胺(PEI)-金納米粒子(AuNPs)基底材料的制備;
(2)建立可再生電化學(xué)免疫傳感器,測(cè)定sCD40L,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述c-MWCNTs-PEI-AuNPs納米復(fù)合物的制備過程,其特征在于包括以下步驟:
稱取2mg的c-MWCNTs到2mL的超純水中,超聲1-3h,使其分散均勻。在不斷攪拌下加入N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)和1-乙基-3-(3-二甲氨丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)溶液活化其羧基,攪拌30min之后加入100μL PEI溶液繼續(xù)攪拌2-5h。將上述材料洗滌多次之后,分散在2mL超純水中,先后分別加入100μL HAuCl4·6H2O(1%)和900μL(30mM)的NaBH4溶液攪拌過夜,洗滌多次后分散在2mL超純水中,即可得到c-MWCNTs-PEI-AuNPs納米復(fù)合物,將其分散在2mL超純水中儲(chǔ)存于4℃冰箱中備用。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的建立可再生電化學(xué)免疫傳感器,測(cè)定sCD40L,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,其特征在于包括以下步驟:
(1)分別用0.3μm和0.05μm的Al2O3粉末將電極拋光至鏡面,然后分別用適量超純水、無水乙醇、超純水按上述順序?qū)㈦姌O各超聲清洗5min,室溫干燥備用;
(2)將6μL制備好的c-MWCNTs-PEI-AuNPs納米復(fù)合物滴加在電極表面,室溫干燥;
(3)將6μL的sCD40L抗體滴加在修飾后的電極表面后,置于4℃冰箱中孵育10h;
(4)用超純水將孵育后的電極表面的未結(jié)合的sCD40L抗體沖去后,滴加6μL牛血清白蛋白(BSA,0.25%)溶液室溫孵育30min;
(5)用超純水將孵育后的電極表面多余的BSA沖去后,將6μL不同濃度的sCD40L分別滴加在電極表面孵育45min;
(6)用超純水將未與sCD40L抗體結(jié)合的sCD40L沖去之后,置于5mM的鐵氰化鉀溶液(5mM K3[Fe(CN)6]、5mM K4[Fe(CN)6]、0.1M KCl)中進(jìn)行表征,用差分脈沖伏安法(DPV)測(cè)量其電流響應(yīng)值;
(7)根據(jù)所得峰電流差值與sCD40L濃度的對(duì)數(shù)呈線性關(guān)系,繪制工作曲線;
(8)將檢測(cè)過sCD40L的電極放入解離液(30mM NaOH)中潤(rùn)洗60s后取出,用超純水小心沖洗,置于4℃冰箱中儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>