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復(fù)方血脂寧提取物指紋圖譜的建立及其活性成分定量分析方法與流程

文檔序號(hào):12268183閱讀:來源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.復(fù)方血脂寧提取物指紋圖譜的建立方法,其特征在于采用高效液相色譜法,包括如下步驟:

取二苯乙烯苷對(duì)照品,加甲醇溶解,定容,作為供試品溶液;

按照復(fù)方血脂寧處方量稱取藥材,用水或者β-環(huán)糊精水溶液提取,定容,作為供試品溶液;

采用色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相,以體積分?jǐn)?shù)100%甲醇為A相,體積分?jǐn)?shù)0.1%甲酸為B相,組成流動(dòng)相,采用梯度洗脫,柱溫為45℃,檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm,流速為0.2mL/min,分析時(shí)間為40min;

采用進(jìn)樣量為3μL注入高效液相色譜儀,得到所述指紋圖譜。

2.如權(quán)利要求1所述的復(fù)方血脂寧提取物指紋圖譜的建立方法,其特征在于,所述梯度洗脫的洗脫程序如下:

0分鐘時(shí),流動(dòng)相A為10%的甲醇溶液,流動(dòng)相B為90%的甲酸溶液;

2分鐘時(shí),流動(dòng)相A為25%的甲醇溶液,流動(dòng)相B為75%的甲酸溶液;

9分鐘時(shí),流動(dòng)相A為35%的甲醇溶液,流動(dòng)相B為65%的甲酸溶液;

12分鐘時(shí),流動(dòng)相A為40%的甲醇溶液,流動(dòng)相B為60%的甲酸溶液;

40分鐘時(shí),流動(dòng)相A為90%的甲醇溶液,流動(dòng)相B為10%的甲酸溶液;

所述柱溫為45℃;所述流速:0.2mL/min;所述進(jìn)樣量:3μL。

3.如權(quán)利要求1或2所述的復(fù)方血脂寧提取物指紋圖譜的建立方法,其特征在于,用水提取復(fù)方血脂寧物制備工藝包括:按照處方量復(fù)方血脂寧分別稱取決明子3g,制首烏2g,荷葉1.5g,山楂1g,加入25倍量水,浸泡1小時(shí),提取3次,每次2小時(shí),提取液過濾后合并,得到復(fù)方血脂寧水提取供試液。

4.如權(quán)利要求3所述的復(fù)方血脂寧提取物指紋圖譜的建立方法,其特征在于,用β-環(huán)糊精提取血脂寧物制備工藝包括:按照處方量復(fù)方血脂寧分別稱取決明子3g,制首烏2g,荷葉1.5g,山楂1g,加入占藥材量5%β-環(huán)糊精,25倍量水,浸泡1小時(shí),提取3次,每次2小時(shí),提取液過濾后合并,得到所述復(fù)方血脂寧β-環(huán)糊精提取供試液。

5.如權(quán)利要求1、2或4所述的復(fù)方血脂寧提取物指紋圖譜的建立方法,其特征在于,所述指紋圖譜包括34個(gè)共有指紋峰,相對(duì)保留時(shí)間分別為:

1號(hào)峰:0.52;2號(hào)峰:0.57;3號(hào)峰:0.61;4號(hào)峰:0.66;5號(hào)峰:0.89;6號(hào)峰:0.97;7號(hào)峰:1.00;8號(hào)峰:1.03;9號(hào)峰:1.13;10號(hào)峰:1.22;11號(hào)峰:1.26;12號(hào)峰:1.32;13號(hào)峰:1.35;14號(hào)峰:1.37;15號(hào)峰:1.46;16號(hào)峰:1.65;17號(hào)峰:1.68;18號(hào)峰:1.80;19號(hào)峰:1.83;20號(hào)峰:1.86;21號(hào)峰:1.88;22號(hào)峰:1.91;23號(hào)峰:2.06;24號(hào)峰:2.16;25號(hào)峰:2.21;26號(hào)峰:2.50;27號(hào)峰:2.67;28號(hào)峰:2.78;29號(hào)峰:2.87;30號(hào)峰:2.92;31號(hào)峰:2.96;32號(hào)峰:3.26;33號(hào)峰:3.53;34號(hào)峰:3.69。

6.復(fù)方血脂寧提取物的活性成分定量分析方法,其特征在于,包括:

選取多組處方量復(fù)方血脂寧,分別制備血脂寧水提取物以及血脂寧β-環(huán)糊精提取物,根據(jù)得到所述血脂寧水提取物以及所述血脂寧β-環(huán)糊精提取物的指紋圖譜,確定34個(gè)共有指紋峰,對(duì)所述共有指紋峰進(jìn)行藥材歸屬以及對(duì)所述共有峰進(jìn)行成分確定,在確定的成分中選取多個(gè)活性指標(biāo)成分,建立復(fù)方血脂寧多指標(biāo)成分定量分析方法;

其中,所述活性指標(biāo)成分包括荷葉堿、二苯乙烯苷、紅鐮霉素-6-O-β-D-龍膽二糖苷、槲皮素、橙黃決明素、大黃素。

7.如權(quán)利要求6所述的復(fù)方血脂寧提取物的活性成分定量分析方法,其特征在于,建立復(fù)方血脂寧多指標(biāo)成分定量分析方法包括如下步驟:

取荷葉堿、二苯乙烯苷、紅鐮霉素-龍膽二糖苷、槲皮素、橙黃決明素、大黃素對(duì)照品,加甲醇溶解并定容,作為對(duì)照品溶液;

量取血脂寧提取物,加甲醇定容,搖勻,超聲,離心,上清液經(jīng)濾膜過濾,收集續(xù)濾液,作為供試品溶液;

采用色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相,以體積分?jǐn)?shù)100%甲醇為A相,體積分?jǐn)?shù)0.1%甲酸為B相,組成流動(dòng)相,采用梯度洗脫,柱溫為40℃~50℃,檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm~320nm,流速為0.2mL/min,分析時(shí)間為40min。

8.如權(quán)利要求7所述的復(fù)方血脂寧提取物的活性成分定量分析方法,其特征在于,采用色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相,以體積分?jǐn)?shù)100%甲醇為A相,體積分?jǐn)?shù)0.1%甲酸為B相,組成流動(dòng)相,采用梯度洗脫,柱溫為45℃,檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm、280nm、320nm,流速為0.2mL/min,分析時(shí)間為40min,進(jìn)樣量為3μL;以及

所述梯度洗脫的洗脫程序如下:

0分鐘時(shí),流動(dòng)相A為10%的甲醇溶液,流動(dòng)相B為90%的甲酸溶液;

2分鐘時(shí),流動(dòng)相A為25%的甲醇溶液,流動(dòng)相B為75%的甲酸溶液;

9分鐘時(shí),流動(dòng)相A為35%的甲醇溶液,流動(dòng)相B為65%的甲酸溶液;

12分鐘時(shí),流動(dòng)相A為40%的甲醇溶液,流動(dòng)相B為60%的甲酸溶液;

40分鐘時(shí),流動(dòng)相A為90%的甲醇溶液,流動(dòng)相B為10%的甲酸溶液。

9.如權(quán)利要求6-8中任一項(xiàng)所述的復(fù)方血脂寧提取物的活性成分定量分析方法,其特征在于,所述血脂寧水提取物制備工藝包括:按照處方量復(fù)方血脂寧分別稱取決明子3g,制首烏2g,荷葉1.5g,山楂1g,加入25倍量水,浸泡1小時(shí),提取3次,每次2小時(shí),提取液過濾后合并,得到所述血脂寧水提取物;所述血脂寧β-環(huán)糊精提取物制備工藝包括:按照處方量復(fù)方血脂寧分別稱取決明子3g,制首烏2g,荷葉1.5g,山楂1g,加入占藥材量5%β-環(huán)糊精,25倍量水,浸泡1小時(shí),提取3次,每次2小時(shí),提取液過濾后合并,得到所述血脂寧β-環(huán)糊精提取物。

10.如權(quán)利要求9所述的復(fù)方血脂寧提取物的活性成分定量分析方法,其特征在于,對(duì)所述共有峰進(jìn)行藥材歸屬包括如下步驟:

步驟a、分別稱取處方量陰性決明子復(fù)方、陰性制首烏復(fù)方、陰性荷葉復(fù)方、陰性山楂復(fù)方,并且分別制備水提取物以及β-環(huán)糊精提取物;

步驟b、分別建立所述水提取物以及所述β-環(huán)糊精提取物的指紋圖譜,其與34個(gè)共有指紋峰進(jìn)行比對(duì);

步驟c、確定27個(gè)指紋峰歸屬于決明子,4個(gè)指紋峰歸屬于制首烏,4個(gè)指紋峰歸屬于荷葉,1個(gè)指紋峰歸屬于山楂。

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