本發(fā)明涉及食品檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種奶粉中三聚氰胺的檢測(cè)方法。

背景技術(shù)：

三鹿奶粉事件，給食品安全敲響了警鐘，對(duì)中國(guó)乳品行業(yè)造成了巨大的打擊。在事件發(fā)生后，由于缺乏快速有效檢測(cè)的手段，一度產(chǎn)生了奶農(nóng)鮮奶無人敢收，只好倒奶殺牛的惡性循環(huán)。為解決相關(guān)檢測(cè)問題，我國(guó)批準(zhǔn)發(fā)布了《原料乳與乳制品中三聚氰胺檢測(cè)方法》 （GB/T 22388-2008）、《原料乳中三聚氰胺快速檢測(cè)液相色譜法》（GB/T 22400-2008）國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)和《出口液態(tài)乳中三聚氰胺快速測(cè)定拉曼光譜法》（SN/T 2805-2011）。

GB/T 22388-2008提供的固相萃取前處理方法，成本高、檢測(cè)速度慢，難以滿足批量檢測(cè)需要。對(duì)于快速檢測(cè)方法（GB/T 22400-2008）而言，前處理所用溶劑乙腈成本較高，操作時(shí)需要?jiǎng)×艺鹗?min，時(shí)間仍然較長(zhǎng)，且實(shí)驗(yàn)人員的個(gè)體差異、操作規(guī)程執(zhí)行情況以及實(shí)驗(yàn)技術(shù)能力差異等因素均可能影響檢測(cè)結(jié)果。拉曼光譜法（SN/T 2805-2011）所提供的離心前處理方法，需要配置高速離心機(jī)設(shè)備，操作時(shí)間為4min，且前處理所得溶液不澄清，不能用其他方法檢測(cè)。

三聚氰胺快速檢測(cè)對(duì)于原料乳收購(gòu)質(zhì)量安全具有重要意義，雖然目前國(guó)家已經(jīng)頒布相應(yīng)的快速檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)方法，但其在速度、耗材成本、易于普及等方面仍不理想，因此進(jìn)一步改進(jìn)奶粉中三聚氰胺檢測(cè)方法是目前急需解決的關(guān)鍵技術(shù)問題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種奶粉中三聚氰胺的檢測(cè)方法，不僅能夠提高檢測(cè)回收率，而且能夠減少檢測(cè)回收率的次數(shù)。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

一種奶粉中三聚氰胺的檢測(cè)方法，包括以下步驟：

（1）奶粉前處理，包括以下步驟：

11）稱取干燥的奶粉3～5g，置于酸煮洗凈的錐形瓶中，加入氨水與乙醇的混合水溶液50ml，用蓋子封口后，置于振蕩儀上；

12）利用振蕩儀進(jìn)行旋轉(zhuǎn)振蕩，待旋轉(zhuǎn)振蕩結(jié)束，快速將上清液移至離心管，再放入離心機(jī)中離心，得到離心液，放入干凈的錐形瓶中，備用；

13）取出一定體積的離心液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)掉氨水與乙醇的混合水溶液，再用pH在4～4.5范圍內(nèi)的緩沖有機(jī)溶劑來定容，得到提取液；

（2）預(yù)先依次用2ml甲醇、2ml水對(duì)固相萃取小柱進(jìn)行活化及平衡，再將提取液10ml轉(zhuǎn)移至固相萃取柱中；依次用2ml水、2ml甲醇淋洗，固相萃取小柱抽干至近干后，用5ml氨化甲醇溶液洗脫；整個(gè)固相萃取過程流速不超過0.8ml/min；洗脫液于50℃下用氮?dú)獯蹈?，干燥殘留物?ml流動(dòng)相定容，漩渦混合1min，過0.2μm的有機(jī)相微孔濾膜，得到凈化液；

（3）利用高效液相色譜檢測(cè)凈化液以測(cè)定奶粉中的三聚氰胺；其中，高效液相色譜的工作條件為：色譜柱為C18柱，250mm×4.6mm，5μm；流動(dòng)相為離子對(duì)試劑緩沖液：甲酸＝85：15，流速為0.5ml/min，柱溫為35℃，波長(zhǎng)為243nm，進(jìn)樣量為15μL。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：所述的步驟11）中，氨水與乙醇的混合水溶液中，氨水：乙醇：水的體積比為25～28：55～65：12～15。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：所述的步驟11）中，氨水與乙醇的混合水溶液中，氨水：乙醇：水的體積比為25：60：15。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：所述的步驟12）中，旋轉(zhuǎn)振蕩參數(shù)為：速度120～150r/min，時(shí)間15～18min；離心參數(shù)為：速度5500～5800r/min，時(shí)間5～8min。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：所述的步驟12）中，旋轉(zhuǎn)振蕩參數(shù)為：速度140r/min，時(shí)間16min；離心參數(shù)為：速度5600r/min，時(shí)間7min。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：所述的步驟13）中，用pH為4.2的2%醋酸溶液的鹽緩沖溶液來定容。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：所述的步驟（3）中，三聚氰胺的回收率＝（加標(biāo)濃度的實(shí)際檢測(cè)結(jié)果-空白結(jié)果）/理論加標(biāo)濃度×100%，其中，理論加標(biāo)濃度指樣品未處理前外加至該待測(cè)樣品的三聚氰胺的含量，加標(biāo)濃度的實(shí)際檢測(cè)結(jié)果指外加至該待測(cè)樣品的三聚氰胺的含量經(jīng)樣品處理和色譜檢測(cè)后的結(jié)果，空白結(jié)果為未外加三聚氰胺的該待測(cè)樣品中的三聚氰胺的含量的檢測(cè)結(jié)果。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明采用機(jī)械振蕩、堿性有機(jī)化合物進(jìn)行提取，采用pH在4～4.5范圍內(nèi)的緩沖有機(jī)溶劑作為稀釋液進(jìn)行稀釋定容，再通過固相萃取柱進(jìn)行凈化，最后利用高效液相色譜檢測(cè)得到奶粉中的三聚氰胺；該方法不僅能夠提高檢測(cè)回收率，而且能夠減少檢測(cè)回收率的次數(shù)，使得每樣只需要檢測(cè)一次就能達(dá)標(biāo)，徹底解決了國(guó)標(biāo)法中因柱過濾困難而使用洗耳球吹所導(dǎo)致的組分含量損失問題。

具體實(shí)施方式

下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

實(shí)施例1

本發(fā)明實(shí)施例中，一種奶粉中三聚氰胺的檢測(cè)方法，包括以下步驟：

（1）奶粉前處理，包括以下步驟：

11）稱取干燥的奶粉3～5g，置于酸煮洗凈的錐形瓶中，加入氨水與乙醇的混合水溶液（氨水：乙醇：水的體積比為25：60：15）50ml，用蓋子封口后，置于振蕩儀上；

12）利用振蕩儀進(jìn)行旋轉(zhuǎn)振蕩，待旋轉(zhuǎn)振蕩結(jié)束，快速將上清液移至離心管，再放入離心機(jī)中離心，得到離心液，放入干凈的錐形瓶中，備用；其中，旋轉(zhuǎn)振蕩參數(shù)為：速度140r/min，時(shí)間16min；離心參數(shù)為：速度5600r/min，時(shí)間7min；

13）取出離心液5ml，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)掉氨水與乙醇的混合水溶液，再用pH在4～4.5范圍內(nèi)的緩沖有機(jī)溶劑，優(yōu)選pH為4.2的2%醋酸溶液的鹽緩沖溶液來定容至5ml，得到提取液；

（2）預(yù)先依次用2ml甲醇、2ml水對(duì)固相萃取小柱進(jìn)行活化及平衡，再將提取液10ml轉(zhuǎn)移至固相萃取柱中；依次用2ml水、2ml甲醇淋洗，固相萃取小柱抽干至近干后，用5ml氨化甲醇溶液洗脫；整個(gè)固相萃取過程流速不超過0.8ml/min；洗脫液于50℃下用氮?dú)獯蹈桑稍餁埩粑镉?ml流動(dòng)相定容，漩渦混合1min，過0.2μm的有機(jī)相微孔濾膜，得到凈化液；

（3）利用高效液相色譜檢測(cè)凈化液以測(cè)定奶粉中的三聚氰胺；其中，高效液相色譜的工作條件為：色譜柱為C18柱，250mm×4.6mm，5μm；流動(dòng)相為離子對(duì)試劑緩沖液：甲酸＝85：15，流速為0.5ml/min，柱溫為35℃，波長(zhǎng)為243nm，進(jìn)樣量為15μL。

回收率＝（加標(biāo)濃度的實(shí)際檢測(cè)結(jié)果-空白結(jié)果）/理論加標(biāo)濃度×100%，其中，理論加標(biāo)濃度指樣品未處理前外加至該待測(cè)樣品的三聚氰胺的含量，加標(biāo)濃度的實(shí)際檢測(cè)結(jié)果指外加至該待測(cè)樣品的三聚氰胺的含量經(jīng)樣品處理和色譜檢測(cè)后的結(jié)果，空白結(jié)果為未外加三聚氰胺的該待測(cè)樣品中的三聚氰胺的含量的檢測(cè)結(jié)果。

利用國(guó)標(biāo)方法、本發(fā)明方法這兩種方法，分別對(duì)奶粉（A）、外加三聚氰胺濃度為2ppm的該奶粉（B）、外加三聚氰胺濃度為4ppm的該奶粉（C）進(jìn)行三聚氰胺濃度檢測(cè)，計(jì)算該奶粉的三聚氰胺檢測(cè)回收率，每組重復(fù)三次，檢測(cè)結(jié)果取三次平均值，每次取2個(gè)平行樣。對(duì)比結(jié)果如表1所示。

表1 兩種方法的試驗(yàn)結(jié)果比較

由表1可以看出：一、本發(fā)明方法能夠提高檢測(cè)回收率，具體可以將國(guó)標(biāo)法的70%左右的回收率提高到83%以上的回收率。例如，利用國(guó)標(biāo)法，柱過濾困難，需要使用洗耳球吹固相萃取柱中的凈化液，在吹的過程中凈化液中的待測(cè)組分就會(huì)被帶出，因?yàn)樵谑褂孟炊虼档倪^程中不能保證1滴/4秒的速度，在此過程中待測(cè)組分的含量有所損失；利用本發(fā)明方法，柱過濾順暢，不需要使用洗耳球吹固相萃取柱小柱中的凈化液，使提取液自然流出固相萃取小柱，凈化液中的待測(cè)組分自然也會(huì)吸附在固相萃取小柱內(nèi)，待測(cè)組分中的含量的損失相對(duì)減少。二、本發(fā)明方法能夠減少檢測(cè)回收率的次數(shù)。例如，改進(jìn)前每樣檢測(cè)回收率的次數(shù)一般都要2～3次才能達(dá)到回收率的規(guī)定范圍；而利用本發(fā)明方法每樣只需要檢測(cè)一次就能達(dá)標(biāo)。

對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，顯然本發(fā)明不限于上述示范性實(shí)施例的細(xì)節(jié)，而且在不背離本發(fā)明的精神或基本特征的情況下，能夠以其他的具體形式實(shí)現(xiàn)本發(fā)明。因此，無論從哪一點(diǎn)來看，均應(yīng)將實(shí)施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要求而不是上述說明限定，因此旨在將落在權(quán)利要求的等同要件的含義和范圍內(nèi)的所有變化囊括在本發(fā)明內(nèi)。

此外，應(yīng)當(dāng)理解，雖然本說明書按照實(shí)施方式加以描述，但并非每個(gè)實(shí)施方式僅包含一個(gè)獨(dú)立的技術(shù)方案，說明書的這種敘述方式僅僅是為清楚起見，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)將說明書作為一個(gè)整體，各實(shí)施例中的技術(shù)方案也可以經(jīng)適當(dāng)組合，形成本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的其他實(shí)施方式。