本發(fā)明涉及一種化妝品及原料中N-亞硝基二乙醇胺的檢測(cè)方法。

背景技術(shù)：

N-亞硝胺化合物是一類(lèi)強(qiáng)烈的化學(xué)致癌物質(zhì)，能誘發(fā)多種動(dòng)物的惡性腫瘤?；瘖y品作為日常用品，會(huì)長(zhǎng)時(shí)間駐留在皮膚、毛發(fā)、指甲、口唇等部位，其安全性備受關(guān)注，化妝品中的N-亞硝胺受到國(guó)內(nèi)外嚴(yán)格監(jiān)控。目前，化妝品中最受關(guān)注的N-亞硝胺化合物是N-亞硝基二乙醇胺，作為根據(jù)國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)(IARC)的分類(lèi)，N-亞硝基二乙醇胺歸類(lèi)于可能對(duì)人體致癌。由于化妝品中廣泛采用二乙醇胺和三乙醇胺這兩類(lèi)物質(zhì)作為化妝品中的保濕劑、pH平衡劑或與月桂酸混用作為化妝品中的乳化劑和分散劑使用，而二乙醇胺和三乙醇胺這兩種通常物質(zhì)在化妝品生產(chǎn)，存儲(chǔ)以及流通環(huán)節(jié)中容易生成N-亞硝基二乙醇胺，因此化妝品中的N-亞硝基二乙醇胺的檢測(cè)和控制受到國(guó)內(nèi)外的廣泛關(guān)注，我國(guó)在《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》中已明確將N-亞硝胺列為化妝品中的禁用組分。

N-亞硝基二乙醇胺是一種黃色粘稠的油狀液體，屬于不揮發(fā)性亞硝胺。由于化妝品中所含物質(zhì)種類(lèi)繁多，尤其是多含氮物質(zhì)的含量遠(yuǎn)高于N-亞硝基二乙醇胺，因此在化妝品中的N-亞硝基二乙醇胺的檢測(cè)具有一定難度。目前國(guó)內(nèi)外開(kāi)展一些針對(duì)不同化妝品的N-亞硝基二乙醇胺的檢測(cè)方法，如氣質(zhì)聯(lián)用、氣相色譜、液相色譜法和液質(zhì)聯(lián)用法等。目前常采用的ISO/DIS15819-2013方法是液質(zhì)聯(lián)用方法，但該方法容易受到化妝品中的其它成分干擾，檢出限高。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對(duì)上述現(xiàn)狀，本發(fā)明的目的是提供一種用于化妝品中的N-亞硝基二乙醇胺檢測(cè)的前處理技術(shù)和分析方法，雜質(zhì)峰少，基質(zhì)干擾小，準(zhǔn)確、靈敏度高，能夠滿(mǎn)足霜膏類(lèi)，水劑類(lèi)，香波類(lèi)等不同類(lèi)型化妝品中N-亞硝基二乙醇胺的檢測(cè)。

為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為：

(1)取3～5g化妝品至50mL標(biāo)準(zhǔn)具塞容量瓶中，加入0.9～1.5g的氨基磺酸胺和氯化鈉混合物，加入5.4～9mL水和三氯甲烷混合溶液并經(jīng)超聲提取，得到超聲提取液；

(2)取上述超聲提取液，冷凍離心后，取3～5mL上清液放置于氮吹儀上氮?dú)獯蹈?，殘?jiān)?～5mL的三氯甲烷和丙酮混合溶液溶解，過(guò)固相萃取柱，用6～10mL的三氯甲烷和丙酮混合溶液淋洗，6～10mL丙酮洗脫，收集洗脫液于試管中，氮?dú)獯蹈桑?.6～1mL甲醇溶解后用0.20μm微孔濾膜過(guò)濾，得到凈化后的溶液于棕色色譜瓶中待用；

(3)通過(guò)氣相色譜-熱能分析儀聯(lián)用方法測(cè)定步驟(2)所得凈化后的溶液中的N-亞硝基二乙醇胺，氣相色譜條件是：氣相色譜柱采用中等極性色譜柱，載氣為氦氣；氣相色譜柱溫采用程序升溫。

所述步驟(1)中加入的混合物氨基磺酸胺和氯化鈉的質(zhì)量比為1:2。

所述步驟(1)中水和三氯甲烷混合溶液的體積比為5:4。

所述步驟(1)中水為電阻率大于18MΩ*cm的超純水。

所述步驟(2)的冷凍離心條件為：冷凍溫度4℃，轉(zhuǎn)速12000r/min，離心時(shí)間15～20min。

所述步驟(2)中用于溶解殘?jiān)土芟吹娜燃淄楹捅旌先芤旱捏w積比為5:1。

所述步驟(2)中的固相萃取柱為填裝2～3硅膠和頂部填裝3～5g經(jīng)活化后無(wú)水硫酸鈉的玻璃填充柱。

所述步驟(3)中檢測(cè)條件為，氣相色譜儀：進(jìn)樣口溫度250℃，進(jìn)樣量2μL，隔墊吹掃15mL/min，色譜柱采用中等極性色譜柱，載氣流速2.1mL/min，氣相色譜柱溫采用程序升溫：初始溫度150℃保持10min，10℃/min升至230℃保持2min，250℃保持3min；熱能分析儀檢測(cè)儀的條件為：接口溫度250℃，裂解器溫度600℃，臭氧流量10mL/min，冷卻溫度-20℃，電壓760V。

本發(fā)明有益效果：本發(fā)明涉及與人直接接觸的化妝品中所含的N-亞硝基二乙醇胺，建立了氣相色譜—熱能分析儀聯(lián)用檢測(cè)方法。本發(fā)明對(duì)化妝品中所含的N-亞硝基二乙醇胺的檢出限為20μg/kg，方法回收率為87～105％，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于10％。該發(fā)明雜質(zhì)干擾小，回收率高，方法穩(wěn)定，能夠?yàn)榛瘖y品中N-亞硝基二乙醇胺的檢測(cè)和產(chǎn)品質(zhì)量控制提供技術(shù)方法支持，能夠滿(mǎn)足霜膏類(lèi)，水劑類(lèi)，香波類(lèi)等不同類(lèi)型化妝品中N-亞硝基二乙醇胺的檢測(cè)。

附圖說(shuō)明

圖1為本發(fā)明樣品處理流程圖；

圖2為化妝品中N-亞硝基二乙醇胺，(a)為硅膠層析柱前，(b)為硅膠層析柱后。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合附圖及具體實(shí)施例詳細(xì)介紹本發(fā)明。但以下的實(shí)施例僅限于解釋本發(fā)明，本發(fā)明的保護(hù)范圍應(yīng)包括權(quán)利要求的全部?jī)?nèi)容，不僅僅限于本實(shí)施例。

本發(fā)明實(shí)施例的步驟是：將化妝品利用水和三氯甲烷混合溶液在超聲條件下將N-亞硝基二乙醇胺從樣品中萃取出來(lái)，經(jīng)過(guò)高速冷凍離心后，硅膠柱進(jìn)行凈化，丙酮洗脫液后用甲醇溶解過(guò)濾后得到的溶液用氣相色譜-熱能分析儀聯(lián)用法進(jìn)行檢測(cè)，能夠有效檢測(cè)出水溶性或脂溶性化妝品中的N-亞硝基二乙醇胺。具體如下：

1、試劑和材料

除另外說(shuō)明，所用試劑均為分析純。

1.1N-亞硝基二乙醇胺(N-Nitrosodiethanolamine)：純度大于97％；

1.2水：超純水；

1.3二氯甲烷：色譜級(jí)；

1.4甲醇；

1.5氨基磺酸胺；

1.6氯仿；

1.7氦氣：濃度99.999％

1.8氧氣：濃度99.999％

1.9丙酮；

1.10無(wú)水硫酸鈉；

1.11硅膠；

1.12N-亞硝基二乙醇胺標(biāo)準(zhǔn)液：稱(chēng)取N-亞硝基二乙醇胺1mg(精確至0.0001g)標(biāo)準(zhǔn)品，置于10mL棕色容量瓶中，加入甲醇至刻度，超聲10min幫助溶解，該溶液濃度為：100μg/mL，-20℃下避光保存，保質(zhì)期3個(gè)月；

2、儀器和設(shè)備

2.1氣相色譜：配有分流/不分流進(jìn)樣口；

2.2天平：感量0.0001g；

2.3冷凍離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于12000r/min，冷凍溫度不低于0℃；

2.4超聲波水浴儀

2.5氮吹儀

2.6雙性濾膜

2.7熱能分析儀檢測(cè)儀：配置熱裂解器，裂解溫度不低于600℃；

3、實(shí)施步驟，如圖1所示。

3.1提取

取5g(精確至0.0001g)樣品于50mL具塞錐形瓶中，加入氨基磺酸胺0.5g(精確至0.0001g)和氯化鈉1g(精確至0.0001g)，加入5mL超純水和4mL三氯甲烷，室溫下超聲提取30分鐘后轉(zhuǎn)移至15mL離心管，在4℃下12000r/min冷凍離心15min，用5mL移液管移取5mL上清液到試管中，放置于氮吹儀上氮?dú)獯蹈?，殘?jiān)?mL三氯甲烷和丙酮(體積比5:1)混合溶液溶解后待凈化。

3.2凈化

制作硅膠層析柱：硅膠和無(wú)水硫酸鈉在110℃下烘干活化10小時(shí)后于干燥器中保存。制作硅膠層析柱時(shí)，稱(chēng)取3g活化后的硅膠干法裝填于玻璃層析柱中，玻璃棒敲實(shí)，頂層加入5g活化后無(wú)水硫酸鈉，敲實(shí)。

將3.1待凈化的液體轉(zhuǎn)移至硅膠層析柱。用10mL三氯甲烷和丙酮(體積比5：1)溶液淋洗，10mL丙酮洗脫，收集洗脫液于試管中，氮?dú)獯蹈桑埔浩饕迫?mL甲醇溶解殘?jiān)?.20μm微孔濾膜過(guò)濾于2mL棕色色譜瓶中，在-20℃下避光保存待進(jìn)樣。

硅膠層析柱凈化可以有效消除化妝品中雜質(zhì)干擾，見(jiàn)圖2，(a)為硅膠層析柱前，(b)為硅膠層析柱后，可以看出經(jīng)過(guò)硅膠層析柱凈化后的色譜圖中只有N-亞硝基二乙醇胺信號(hào)。

3.3測(cè)定

3.3.1氣相色譜條件

考慮不同型號(hào)氣相色譜儀，下述給出氣相色譜分析時(shí)通用技術(shù)條件。

1)色譜柱：DB-624石英毛細(xì)管柱，30m×0.32mm(i.d.)×1μm；

2)柱溫采用程序升溫：初始溫度150℃保持10min，10℃/min升至230℃保持2min，250℃保持3min；

3)載氣：氦氣

4)載氣流速：2.1mL/min；

5)進(jìn)樣口溫度：250℃；

6)進(jìn)樣量：2μL；

7)隔墊吹掃15mL/min。

3.3.2熱能分析儀分析條件

1)接口溫度：250℃；

2)裂解器溫度：600℃；

3)氧氣流速：10mL/min；

4)冷卻溫度：-15℃；

5)探測(cè)器電壓：760V。

3.3.3N-亞硝基二乙醇胺標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

采用準(zhǔn)確標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/mL)配制成濃度為50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL、1000ng/mL、10000ng/mL的N-亞硝基二乙醇胺溶液，分別取2μL在上述儀器實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行測(cè)定，以峰面積對(duì)濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。

3.3.4N-亞硝基二乙醇胺含量計(jì)算方法

本發(fā)明采用外標(biāo)法，計(jì)算公式如式(1)

式中W：化妝品中的N-亞硝基二乙醇胺的質(zhì)量分?jǐn)?shù)(單位：毫克每千克；mg/kg)；

c：通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)得到的樣品中N-亞硝基二乙醇胺的濃度(單位：毫克每升；mg/L))

V：樣品定容體積(單位：升；L)

m：樣品質(zhì)量(單位：克；g)

4、方法的線(xiàn)性方程和檢出限

采用準(zhǔn)確標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/mL)配制成濃度為50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL、1000ng/mL、10000ng/mL的N-亞硝基二乙醇胺溶液，分別取2μL在上述儀器實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行測(cè)定，以峰面積(Y軸)對(duì)濃度(X軸)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得出線(xiàn)性方程。

表一：N-亞硝基二乙醇胺標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

5、方法的回收率和精密度

回收率測(cè)試，設(shè)定三個(gè)添加濃度按照上述的樣品前處理方法以及實(shí)驗(yàn)條件測(cè)定，每個(gè)濃度進(jìn)行6次測(cè)試，并計(jì)算方法的回收率和精密度。結(jié)果回收率87～105％。，計(jì)算精密度(相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD)小于10％，結(jié)果見(jiàn)表二。

表二：N-亞硝基二乙醇胺的不同加標(biāo)回收率和精密度

6、結(jié)論

針對(duì)本發(fā)明涉及與人直接接觸的化妝品中所含的N-亞硝基二乙醇胺，建立了氣相色譜—熱能分析儀聯(lián)用檢測(cè)方法。通過(guò)對(duì)不同樣品回收率，精密度測(cè)試，該方法對(duì)化妝品中所含的N-亞硝基二乙醇胺的檢出限為20μg/kg，方法回收率為87～105％，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于10％。該發(fā)明雜質(zhì)干擾小，回收率高，方法穩(wěn)定，能夠?yàn)榛瘖y品中N-亞硝基二乙醇胺的檢測(cè)和產(chǎn)品質(zhì)量控制提供技術(shù)方法支持。

需要說(shuō)明的是，按照本發(fā)明上述實(shí)施例，本領(lǐng)域技術(shù)人員是完全可以實(shí)現(xiàn)本發(fā)明獨(dú)立權(quán)利要求及從屬權(quán)利的全部范圍的，實(shí)現(xiàn)過(guò)程及方法同上述實(shí)施例。且本發(fā)明未詳細(xì)闡述部分屬于本領(lǐng)域公知技術(shù)。

以上顯示和描述了本發(fā)明的基本原理、主要特征和本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)。本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)該了解，本發(fā)明不受上述實(shí)例的限制，對(duì)本發(fā)明做出的各種變化和改進(jìn)應(yīng)都落入要求保護(hù)的本發(fā)明范圍內(nèi)。本發(fā)明要求保護(hù)范圍由所附的權(quán)利要求書(shū)及其等同界定。