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一種鼻咽癌循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)試劑盒的制作方法

文檔序號(hào):12454000閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種鼻咽癌循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)試劑盒,其特征在于由人外周血白細(xì)胞去除部分和免疫熒光原位雜交鑒定部分組成,其中人外周血白細(xì)胞去除部分包括稀釋緩沖液、紅細(xì)胞裂解液、密度梯度離心介質(zhì)、細(xì)胞固定液A以及免疫磁珠,其中紅細(xì)胞裂解液由氯化銨、碳酸氫鈉以及EDTA二鈉溶液混合而成,所述免疫磁珠是共價(jià)偶聯(lián)了抗人白細(xì)胞共同抗原的抗體的磁珠,該抗體為CD45,所用免疫磁珠粒徑為0.2~1.5μm;細(xì)胞固定液A功效成分為醇類;

所述的免疫熒光原位雜交鑒定部分包括緩沖液,雜交固定液B,生物素標(biāo)記的CEP8探針,紅色量子點(diǎn)標(biāo)記的CD45抗體,綠色量子點(diǎn)標(biāo)記的鏈霉親和素,封片劑以及牛血清白蛋白粉末;所述雜交固定液B功效成分為多聚甲醛,所述CEP8探針能夠通過熒光原位雜交的方法對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行探針標(biāo)記,所述紅色量子點(diǎn)標(biāo)記的CD45抗體對(duì)剩余白細(xì)胞進(jìn)行染色且其發(fā)射波長(zhǎng)為585nm~625nm,綠色量子點(diǎn)標(biāo)記的鏈霉親和素能夠與CEP8探針相結(jié)合從而對(duì)DNA片段進(jìn)行標(biāo)記,且其發(fā)射波長(zhǎng)為525nm~545nm,所述封片劑含有能夠與DNA強(qiáng)力結(jié)合的熒光染料DAPI。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鼻咽癌循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)試劑盒,其特征在于:所述的紅細(xì)胞裂解液的pH值為7.0~8.0,其中氯化銨的濃度為0.5~2M,碳酸氫鈉濃度為10~200mM,EDTA二鈉的濃度為1~10mM。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鼻咽癌循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)試劑盒,其特征在于:所述的生物素標(biāo)記的CEP8探針購(gòu)自于美國(guó)雅培分子公司。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鼻咽癌循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)試劑盒,其特征在于:紅色量子點(diǎn)標(biāo)記的CD45抗體的發(fā)射波長(zhǎng)為605nm,綠色量子點(diǎn)標(biāo)記的鏈霉親和素的發(fā)射波長(zhǎng)為525nm,兩者均采用共價(jià)偶聯(lián)的方式將量子點(diǎn)與蛋白進(jìn)行連接。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鼻咽癌循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)試劑盒,其特征在于:所述的密度梯度離心介質(zhì)的密度為1.02~1.5g/cm3,其有效成分為蔗糖,且蔗糖的質(zhì)量濃度為5%~60%。

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