本發(fā)明涉及一種麝香壯骨藥物組合物的含量檢測方法，屬于醫(yī)藥技術領域。

背景技術：

麝香壯骨膏收載于一九九六年版中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準中藥成方制劑第十一冊。麝香壯骨膏具有鎮(zhèn)痛、消炎之功效。用于風濕痛，關節(jié)痛，腰痛，神經(jīng)痛，肌肉酸痛，扭傷，挫傷。

麝香壯骨膏配方組成如下：八角茴香、山柰、生川烏、生草烏、麻黃、蒼術、白芷、當歸、干姜、人工麝香、薄荷腦、水楊酸甲酯、硫酸軟骨素鈉、冰片、鹽酸苯海拉明、樟腦等。輔料為橡膠、氧化鋅、立德粉、松香、凡士林、羊毛脂。麝香壯骨膏效果良好，經(jīng)臨床驗證，療效顯著，備受患者青睞。目前，麝香壯骨膏質(zhì)量標準僅對性狀、外觀、含膏量、耐熱、微生物限度有規(guī)定，并未對其中各成分進行鑒別試驗及含量測定。文獻高效液相色譜法測定止痛消炎軟膏中水楊酸甲酯的含量(今日藥學2014年5月第24卷第05期)提供了水楊酸甲酯的含量測定方法，所用流動相為體積比80:20的甲醇:水，檢測波長300nm，其方法不涉及鹽酸苯海拉明的含量檢測。專利文獻CN104569279A一種消炎鎮(zhèn)痛膏的質(zhì)量檢測方法公開了鹽酸苯海拉明和水楊酸甲酯的含量測定方法，其中鹽酸苯海拉明采用高效液相色譜法測定，而水楊酸甲酯采用氣相色譜測定。

現(xiàn)有技術中未發(fā)現(xiàn)利用同一色譜條件測定鹽酸苯海拉明和水楊酸甲酯的含量，也未發(fā)現(xiàn)麝香壯骨膏的其他檢測方法，麝香壯骨膏的質(zhì)量標準有待提高。

技術實現(xiàn)要素：

為克服現(xiàn)有技術的不足，本發(fā)明提供了一種麝香壯骨藥物組合物的含量檢測方法，該方法采用同一色譜條件可同時測定麝香壯骨藥物組合物中鹽酸苯海拉明和水楊酸甲酯的含量。

術語說明：

麝香壯骨膏：收載于一九九六年版中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準中藥成方制劑第十一冊的藥品名稱。標準編號：WS₃-B-2268-96。

麝香壯骨藥物組合物：是指用麝香壯骨膏原料藥配方制備的藥學上可接受的各種劑型的制劑。

本發(fā)明的技術方案如下：

一種中藥麝香壯骨藥物組合物的含量檢測方法,其特征在于所述方法包括采用高效液相色譜法同一色譜條件同時測定麝香壯骨膏中鹽酸苯海拉明和水楊酸甲酯的含量。

根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，一種麝香壯骨藥物組合物的含量檢測方法，采用高效液相色譜法測定，步驟如下：

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積分數(shù)比45～55:45～55的甲醇-硫酸銨溶液為流動相，硫酸銨溶液濃度為0.1％～1％，g/V；檢測波長為210nm；理論板數(shù)按鹽酸苯海拉明峰計算應不低于3000；

對照品溶液的制備：取鹽酸苯海拉明對照品和水楊酸甲酯對照品適量，精密稱定，加80％～100％(V/V)甲醇制成每1mL含鹽酸苯海拉明0.2～0.4mg、水楊酸甲酯0.8～1.6mg的混合溶液，取5mL置10mL容量瓶中，加上述體積分數(shù)比45～55:45～55的甲醇-硫酸銨溶液稀釋至刻度，搖勻，即得；

供試品溶液的制備：取麝香壯骨藥物組合物適量相當于鹽酸苯海拉明9mg-18mg，剪成窄條，除去蓋襯，置具塞錐形瓶中，精密加入80％～100％(V/V)甲醇50mL，密塞，稱定重量，加熱回流提取1～3小時，放冷，再稱定重量，用80％～100％(V/V)甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液20～30mL置50mL容量瓶中，加上述體積分數(shù)比45～55:45～55的甲醇-硫酸銨溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。

測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL,注入液相色譜儀，測定，即得。

本發(fā)明進一步優(yōu)選的，本發(fā)明所述的含量檢測方法照中國藥典2015年版四部通則0512高效液相色譜法測定。

本發(fā)明進一步優(yōu)選的，所述的流動相為體積份數(shù)比50:50的甲醇-1％(g/V)硫酸銨溶液。

本發(fā)明進一步優(yōu)選的，所述對照品溶液的制備中，加入濃度為80％(V/V)甲醇制成每1mL含鹽酸苯海拉明0.4mg、水楊酸甲酯1.6mg的混合溶液。

本發(fā)明進一步優(yōu)選的，所述供試品溶液的制備中，加入甲醇的濃度為80％(V/V)。

本發(fā)明進一步優(yōu)選的，所述供試品溶液的制備中，回流提取時間為2小時。

本發(fā)明進一步優(yōu)選的，所述對照品溶液和供試品溶液的制備中甲醇-硫酸銨溶液的體積分數(shù)比45～55:45～55；優(yōu)選為50:50。

本發(fā)明更進一步優(yōu)選的，一種中藥麝香壯骨膏的含量檢測方法，步驟如下：

照中國藥典2015年版四部通則0512高效液相色譜法測定：

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積分數(shù)比50:50甲醇-1％(g/V)硫酸銨溶液為流動相，檢測波長為210nm；理論板數(shù)按鹽酸苯海拉明峰計算應不低于3000；

對照品溶液的制備：取鹽酸苯海拉明對照品和水楊酸甲酯對照品適量，精密稱定，加80％(V/V)甲醇制成每1mL含鹽酸苯海拉明0.4mg、水楊酸甲酯1.6mg的混合溶液，取5mL置10mL容量瓶中，用上述體積分數(shù)比50:50甲醇-1％(g/V)硫酸銨溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過即得；

供試品溶液的制備：取麝香壯骨膏280cm²，剪成窄條，除去蓋襯，置具塞錐形瓶中，精密加入80％(V/V)甲醇50mL，密塞，稱定重量，加熱回流提取2小時，放冷，再稱定重量，用80％(V/V)甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液25mL置50mL容量瓶中，加上述體積分數(shù)比50:50甲醇-1％(g/V)硫酸銨溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。

測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL,注入液相色譜儀，測定，即得。

下述實驗例用于進一步說明但不限于本發(fā)明。

實驗例1：含量測定實驗

1.儀器與試藥

儀器：LC-20AT高效液相色譜儀，二極管陣列檢測器；

對照品：鹽酸苯海拉明對照品(中國食品藥品檢定研究院：批號100066-200807純度99.9％)；

水楊酸甲酯對照品(中國食品藥品檢定研究院：批號110707-201413純度99.7％)；

試劑：甲醇為色譜純，水為純化水，硫酸銨為分析純；

供試樣品：麝香壯骨膏為山東明人福瑞達衛(wèi)生材料有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號：20160304、20160305、20160306。

2.色譜條件

檢測波長的選擇：通過比較200、205nm、210nm、215nm、220nm、225nm、230nm、258nm、300nm波長處實驗數(shù)據(jù)，高波長處峰面積響應值太小，低波長處接近末端吸收，雜質(zhì)峰較多，在210nm處水楊酸甲酯和鹽酸苯海拉明均有良好響應值，故選擇210nm為檢測波長。

流動相的選擇：以體積分數(shù)比50:50:0.5的乙腈-水-三乙胺為流動相時，出峰太早。以甲醇-硫酸銨溶液為流動相時試驗了不同體積比及0.1％～1％(g/V)的硫酸銨溶液，結(jié)果硫酸銨濃度低時柱效低，峰形不好看，以體積分數(shù)比50:50的甲醇-1％(g/V)硫酸銨溶液為流動相時可達到良好效果。

綜上所述，色譜條件為：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積分數(shù)比50:50的甲醇-1％(g/V)硫酸銨溶液為流動相，檢測波長為210nm，流速1.0mL/min。

3.對照品溶液的制備：取鹽酸苯海拉明對照品和水楊酸甲酯對照品適量，精密稱定，加80％(V/V)甲醇制成每1mL含鹽酸苯海拉明0.4mg、水楊酸甲酯1.6mg的混合溶液，取5mL置10mL容量瓶中，用上述體積分數(shù)比50:50的甲醇-1％(g/V)硫酸銨溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。

4.供試品溶液的制備：取本品280cm²，剪成窄條，除去蓋襯，置具塞錐形瓶中，精密加入80％(V/V)甲醇50mL，密塞，稱定重量，加熱回流提取2小時，放冷，再稱定重量，用80％(V/V)甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取25mL置50mL容量瓶中，用上述體積分數(shù)比50:50的甲醇-1％(g/V)硫酸銨溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。

5.提取方法的選擇：取本品280cm²，剪成窄條，除去蓋襯，置具塞錐形瓶中，精密加入80％(V/V)甲醇50mL，密塞，稱定重量，分別加熱回流提取1h、1.5h、2h、3h，放冷，再稱定重量，用80％(V/V)甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取25mL置50mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，測定。結(jié)果見表1，表明回流2小時即可將有效成分完全溶出，故選擇2h為供試品加熱回流時間。

表1提取方法的選擇

6.系統(tǒng)適用性試驗及陰性干擾試驗

6.1按處方量比例制成不含鹽酸苯海拉明的麝香壯骨膏，然后按照供試品溶液制備方法制成鹽酸苯海拉明陰性對照液；

6.2按處方量比例制成不含水楊酸甲酯的麝香壯骨膏，然后按照供試品溶液制備方法制成水楊酸甲酯陰性對照液。

在上述色譜條件下，分別精密量取供試品溶液及陰性對照溶液各10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果表明，供試品色譜圖中鹽酸苯海拉明，水楊酸甲酯與其相鄰色譜峰的分離度大于1.5，且陰性對照無干擾。見附圖1～圖3。

7.標準曲線的制備和線性關系考察

精密量取對照品貯備液(鹽酸苯海拉明0.4987mg/mL,水楊酸甲酯1.9968mg/mL)1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL、5.5mL、6.0mL分別置10mL量瓶中，加80％(V/V)甲醇至刻度搖勻。取上7個濃度的對照品溶液，進樣量均為10μl，按含量測定方法測定峰面積，并以對照品濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標建立標準曲線，計算回歸方程，數(shù)據(jù)見表2和表3，標準曲線見下圖4～圖5。

表2鹽酸苯海拉明線性關系考察

結(jié)果：鹽酸苯海拉明回歸方程為：Y＝31094X+54838，r＝0.9998，在49.87μg/mL～299.22μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關系。

表3水楊酸甲酯線性關系考察

結(jié)果：水楊酸甲酯回歸方程為：Y＝40275X+7660404，r＝0.9986，在199.68μg/mL～1098.24μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關系。

8.精密度試驗

精密吸取對照品貯備液4.0mL置10mL量瓶中，加80％(V/V)甲醇稀釋至刻度，搖勻，連續(xù)進樣6次，進樣量10μl。結(jié)果見表4-表5。表明，儀器精密度良好。

表4儀器精密度(鹽酸苯海拉明)結(jié)果

表5儀器精密度(水楊酸甲酯)結(jié)果

9.穩(wěn)定性試驗

取同一供試品，按含量測定方法測定后，樣品置室溫下放置0h、2h、4h、8h、12h、24h，分別進樣10μl，記錄峰面積，計算峰面積的相對標準偏差(RSD)，結(jié)果見表6-表7。表明供試品溶液中的鹽酸苯海拉明和水楊酸甲酯室溫放置24小時內(nèi)穩(wěn)定。

表6鹽酸苯海拉明穩(wěn)定性試驗結(jié)果表

表7水楊酸甲酯穩(wěn)定性試驗結(jié)果表

10.重復性試驗

取批號為20160304的樣品6份，每份280cm²，精密稱定每份含膏量，按含量測定項下方法測定含量，并計算樣品含量的RSD值，結(jié)果見表8-表9。

表8鹽酸苯海拉明重復性試驗結(jié)果(n＝6)

表9水楊酸甲酯重復性試驗結(jié)果(n＝6)

11.回收率試驗

取批號為20160304的樣品6份，每份140cm²，精密稱定每份含膏量，每份分別加入鹽酸苯海拉明對照品和水楊酸甲酯對照品，按含量測定項下供試品溶液制備方法制備供試品溶液，并測定含量，計算回收率。結(jié)果見表10和表11，表明該測定方法測定結(jié)果準確。

表10鹽酸苯海拉明回收率測定結(jié)果(n＝6)

表11水楊酸甲酯回收率測定結(jié)果(n＝6)

12.樣品測定

取麝香壯骨膏3批按含量測定方法測定，測定并計算鹽酸苯海拉明和水楊酸甲酯的含量，測定結(jié)果見表12和表13。

表12 3批麝香壯骨膏鹽酸苯海拉明的含量

表13 3批麝香壯骨膏水楊酸甲酯的含量

綜上：本發(fā)明含量測定的方法通過檢測麝香壯骨膏中鹽酸苯海拉明和水楊酸甲酯的含量，從而檢測制劑的質(zhì)量。

本發(fā)明的有益效果如下：

本發(fā)明采用同一色譜條件同時檢測麝香壯骨膏中鹽酸苯海拉明和水楊酸甲酯的含量，操作簡便、快速、檢測成本低、測定結(jié)果準確，重現(xiàn)性好、且能較全面反映麝香壯骨膏的配方組成。麝香壯骨膏輔料為橡膠、氧化鋅、立德粉、松香、凡士林、羊毛脂，直接加熱回流后的樣品對柱子損害較大，柱效降低較快，供試品制備采用流動相稀釋一步的方法以后，減小了對柱子的損害。本發(fā)明可用于對麝香壯骨膏進行含量測定。

附圖說明

圖1是麝香壯骨膏鹽酸苯海拉明含量陰性對照高效液相色譜圖；其中，縱坐標是電壓，單位：毫伏，橫坐標是時間，單位：分鐘；

圖2是麝香壯骨膏水楊酸甲酯含量陰性對照高效液相色譜圖；

圖3是麝香壯骨膏含量樣品高效液相色譜圖；

圖4是鹽酸苯海拉明線性圖；其中，縱坐標是峰面積，橫坐標是濃度，單位：mg/mL；

圖5是水楊酸甲酯線性圖；其中，縱坐標是峰面積，橫坐標是濃度，單位：mg/mL。

具體實施方式

下述實施例均能實現(xiàn)上述實驗例所述的效果。下述實施例用于進一步說明但不限于本發(fā)明，所用的麝香壯骨膏為山東明人福瑞達衛(wèi)生材料有限公司制備。

實施例1：

一種中藥麝香壯骨膏的含量檢測方法，步驟如下：

照中國藥典2015年版四部通則0512高效液相色譜法測定：

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積分數(shù)比50:50甲醇-1％(g/V)硫酸銨溶液為流動相，檢測波長為210nm；理論板數(shù)按鹽酸苯海拉明峰計算應不低于3000；

對照品溶液的制備：取鹽酸苯海拉明對照品和水楊酸甲酯對照品適量，精密稱定，加80％(V/V)甲醇制成每1mL含鹽酸苯海拉明0.4mg、水楊酸甲酯1.6mg的混合溶液，取5mL置10mL容量瓶中，用上述體積分數(shù)比50:50的甲醇-1％(g/V)硫酸銨溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過即得；

供試品溶液的制備：取麝香壯骨膏280cm²，剪成窄條，除去蓋襯，置具塞錐形瓶中，精密加入80％(V/V)甲醇50mL，密塞，稱定重量，加熱回流提取2小時，放冷，再稱定重量，用80％(V/V)甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液25mL置50mL容量瓶中，加上述體積分數(shù)比50:50的甲醇-1％(g/V)硫酸銨溶液流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。

測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL,注入液相色譜儀，測定，即得。

本品每100cm²含鹽酸苯海拉明(C₁₇H₂₁NO·HC l)不得少于4.8mg；水楊酸甲酯(C₈H₈O₃)不得少于18.0mg。

實施例2：

一種麝香壯骨藥物組合物的含量檢測方法，步驟如下：

照中國藥典2015年版四部通則0512高效液相色譜法測定。

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積比45:55甲醇-1％(g/V)硫酸銨溶液為流動相，檢測波長為210nm。理論板數(shù)按鹽酸苯海拉明峰計算應不低于3000。

對照品溶液的制備：取鹽酸苯海拉明對照品和水楊酸甲酯對照品適量，精密稱定，加90％甲醇制成每1mL含鹽酸苯海拉明0.2mg、水楊酸甲酯0.8mg的混合溶液，取5mL置10mL容量瓶中，用上述體積比45:55甲醇-1％(g/V)硫酸銨溶液流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。

供試品溶液的制備：麝香壯骨藥物組合物2.4g，約相當于鹽酸苯海拉明9mg，置具塞錐形瓶中，精密加入90％(V/V)甲醇50mL，密塞，稱定重量，加熱回流提取2小時，放冷，再稱定重量，用90％(V/V)甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液25mL置50mL容量瓶中，加上述體積比45:55甲醇-1％(g/V)硫酸銨溶液流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。

測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL,注入液相色譜儀，測定，即得。

本品每100cm²含鹽酸苯海拉明(C₁₇H₂₁NO·HC l)不得少于4.8mg；水楊酸甲酯(C₈H₈O₃)不得少于18.0mg。

實施例3：

一種麝香壯骨藥物組合物的含量檢測方法，步驟如下：

照中國藥典2015年版四部通則0512高效液相色譜法測定。

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積比55:45的甲醇-1％(g/V)硫酸銨溶液為流動相，檢測波長為210nm。理論板數(shù)按鹽酸苯海拉明峰計算應不低于3000。

對照品溶液的制備：取鹽酸苯海拉明對照品和水楊酸甲酯對照品適量，精密稱定，加80％(V/V)甲醇制成每1mL含鹽酸苯海拉明0.2mg、水楊酸甲酯0.8mg的混合溶液，取5mL置10mL容量瓶中，用上述體積比55:45的甲醇-1％(g/V)硫酸銨溶液流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。

供試品溶液的制備：麝香壯骨藥物組合物1g，約相當于鹽酸苯海拉明9mg，置具塞錐形瓶中，精密加入80％(V/V)甲醇50mL，密塞，稱定重量，加熱回流提取2小時，放冷，再稱定重量，用80％(V/V)甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液25mL置50mL容量瓶中，加上述體積比55:45的甲醇-1％(g/V)硫酸銨溶液流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。

測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL,注入液相色譜儀，測定，即得。

本品每100cm²含鹽酸苯海拉明(C₁₇H₂₁NO·HC l)不得少于4.8mg；水楊酸甲酯(C₈H₈O₃)不得少于18.0mg。