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一種用于檢測膠類中藥及其復(fù)方制劑中驢皮源成分含量的組合物、試劑盒及其檢測方法與流程

文檔序號:12452845閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種用于檢測膠類中藥及其復(fù)方制劑中驢皮源成分含量的組合物,所述組合物由多肽I、多肽II、多肽III以及對照品檢測基質(zhì)組成,其特征在于:所述多肽I的氨基酸序列為Gly-Ala-Thr-Gly-Pro-Ala-Gly-Val-Arg,多肽II的氨基酸序列為Gly-Glu-Pro-Gly-Pro-Ala-Gly-Leu-Pro-Gly-Pro-Hyp-Gly-Glu-Arg,多肽III的氨基酸序列為Gly-Val-Val-Gly-Pro-Gln-Gly-Ala-Arg,對照品檢測基質(zhì)為魚皮膠。

2.一種含有權(quán)利要求1所述組合物的檢測試劑盒。

3.一種用于檢測膠類中藥及其復(fù)方制劑中驢皮源成分含量的方法,其特征在于,包括如下步驟:

(1)對照品溶液的制備

1)基質(zhì)溶液的制備:將稱量好的對照品檢測基質(zhì)置于量瓶中,加入NH4HCO3溶液,超聲使樣品完全溶解,加NH4HCO3溶液稀釋至刻度;

2)對照品母液的制備:將稱量好的對照品檢測基質(zhì)置于量瓶中,加入NH4HCO3溶液,超聲使樣品完全溶解,將稱量好的的多肽I、多肽II和多肽III加入該量瓶中,用NH4HCO3溶液溶解并稀釋至刻度;

3)對照品溶液制備:以步驟1)制得的基質(zhì)溶液為溶劑,將步驟2)制得的對照品母液稀釋,微孔濾膜過濾,續(xù)濾液中加胰蛋白酶溶液,酶解;

(2)待檢測樣品溶液的制備

取待測樣品,重量記為N1,加入三氯乙酸溶液,超聲、靜置、離心后去除上清液,沉淀用丙酮洗滌、干燥后稱重,重量記為N2,稱取沉淀于量瓶中,加入NH4HCO3溶液溶解并稀釋至刻度,搖勻,微孔濾膜過濾,續(xù)濾液中加入胰蛋白酶溶液,酶解;

(3)液質(zhì)聯(lián)用儀檢測

分別取對照品溶液、待檢測樣品溶液放入液質(zhì)聯(lián)用儀進行檢測,選擇m/z393.4→499.3、643.3,m/z702.8→725.4、838.4,m/z421.0→684.4、528.3作為檢測離子對進行MRM掃描,其中選擇m/z393.4→499.3、m/z702.8→725.4、m/z421.0→684.4分別作為多肽I、多肽II和多肽III的定量離子對進行定量檢測;

(4)樣品中驢皮源成分含量的計算

以對照品溶液的各多肽的含量為縱坐標、峰面積為橫坐標進行標準曲線的繪制,由此計算出樣品中多肽I、多肽II和多肽III的含量,待檢測樣品中多肽I的含量記為M1、多肽II的含量記為M2、多肽III的含量記為M3,然后,按下式計算出各樣品中驢皮源成分的含量:

驢皮源成分的含量(%)=(M1/392.4–M2/1403.5)×525/M3×N2/N1×100%。

4.如權(quán)利要求3所述的方法,其特征在于,步驟(1)及步驟(2)所述的酶解溫度為37℃。

5.如權(quán)利要求3所述的方法,其特征在于,步驟(3)中液質(zhì)聯(lián)用儀檢測的液相條件為:C18反相色譜柱,流動相A為0.1%(v/v)甲酸的水溶液,流動相B為0.1%(v/v)甲酸的乙腈溶液,流速0.3ml/min;梯度洗脫:0→40min,流動相A 100%→50%,流動相B 0%→50%,質(zhì)譜條件:電噴霧正離子模式(ESI+)進行多反應(yīng)監(jiān)測。

6.如權(quán)利要求1所述的用于檢測膠類中藥及其復(fù)方制劑中驢皮源成分含量的組合物,其特征在于,所述膠類中藥為阿膠、黃明膠、龜甲膠、鹿角膠或其他膠類中藥。

7.權(quán)利要求1所述的組合物或權(quán)利要求2所述的試劑盒在檢測膠類中藥及其復(fù)方制劑中的驢皮源成分含量中的應(yīng)用。

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