本發(fā)明涉及藥物制劑的分析
技術(shù)領(lǐng)域：
，尤其涉及一種老鐵止痢可溶性粉制劑的質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù)：
：仔豬白痢是由ETEC引起的仔豬常見腸道傳染病，本病常發(fā)生于10-30日齡仔豬，臨床上以排出乳白色或灰白色粘稠腥臭糞便為特征。該病流行廣，傳播快，發(fā)病率高，雖死亡率較低，但如不及時(shí)治療或治療不當(dāng)，輕者影響仔豬生長(zhǎng)發(fā)育，嚴(yán)重的會(huì)造成僵豬，給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大損失。治療患白痢病的仔豬，需清熱解毒、抗菌消炎、收斂、止痢。老鐵止痢可溶性粉主要用于治療仔豬白痢。本方用十大功勞，具有清熱補(bǔ)虛，止咳化痰。治肺癆咳血，骨蒸潮熱，頭暈耳鳴，腰酸腿軟，心煩，目赤；救必應(yīng)主治喉痛、感冒發(fā)熱、腹痛、胃痛、急慢肝炎、腹瀉腸炎、中暑腹痛、風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎；老鸛草具有抗菌作用、抗病毒作用、止瀉作用、凝血作用、祛痰、驅(qū)蟲作用；鐵莧菜主治清熱解毒，利濕，收斂止血，用于腸炎，痢疾，吐血、衄血、便血、尿血，崩漏；外治癰癤瘡瘍，皮炎濕疹；苦參用于熱痢，便血，黃疸尿閉，赤白帶下，陰腫陰癢，濕疹，濕瘡，皮膚瘙癢，疥癬麻風(fēng)。全方配伍合理，標(biāo)本兼治，能夠起到清熱解毒、收斂、止痢的目的。此處方其療效不容置疑，相對(duì)于目前中藥產(chǎn)品質(zhì)量控制的要求仍有較大的差距，不能完全有效控制老鐵止痢可溶性粉制劑的質(zhì)量，從而會(huì)影響產(chǎn)品的生產(chǎn)銷售和質(zhì)量保證。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種老鐵止痢可溶性粉制劑的質(zhì)量控制方法。為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明是通過如下措施實(shí)現(xiàn)的：一種老鐵止痢可溶性粉制劑的質(zhì)量控制方法，包括以下步驟：第一步、制備制劑：將十大功勞、救必應(yīng)、老鸛草、鐵莧菜、苦參五味藥材按照3:2:3:3:3的質(zhì)量份數(shù)比提取、濃縮、噴干，混合輔料得到老鐵止痢可溶性粉制劑；第二步、以鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀為對(duì)照品，薄層色譜法鑒別老鐵止痢可溶性粉中是否含有十大功勞成分；第三步、以救必應(yīng)為對(duì)照藥材、紫丁香苷為對(duì)照品，薄層色譜法鑒別老鐵止痢可溶性粉中是否含有救必應(yīng)成分；第四步、以苦參堿、槐定堿為對(duì)照品，薄層色譜法鑒別老鐵止痢可溶性粉中是否含有苦參成分；第五步、以紫丁香苷為對(duì)照品，高效液相法測(cè)定老鐵止痢可溶性粉處方中的救必應(yīng)含量。其中，第一步的具體過程為：將十大功勞、救必應(yīng)、老鸛草、鐵莧菜、苦參五味藥材按照3:2:3:3:3的比例進(jìn)行混合，加入2倍量的水進(jìn)行2次提取，提取后將提取液進(jìn)行減壓濃縮至60℃時(shí)相對(duì)密度為1.2的膏體，將膏體在45℃的條件細(xì)進(jìn)行噴干得到預(yù)混物，混合預(yù)混物10％的淀粉和1％的香芹酚得到老鐵止痢可溶性粉制劑。其中，第二步的具體過程為：①供試品溶液的制備：取老鐵止痢可溶性粉樣品5g，加入甲醇25ml，超聲30min，過濾，濾液蒸干，加甲醇3ml使溶解，作為供試品溶液；②對(duì)照品溶液的制備：取鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀對(duì)照品，加甲醇制成每1ml各含0.2mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液；③鑒別：吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯-甲醇-異丙醇-濃氨試液按照6:3:1.5:1.5:0.5的質(zhì)量份數(shù)比混合為展開劑，置氨蒸氣飽和的層析缸內(nèi)，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯兩個(gè)相同的黃色熒光斑點(diǎn)。其中，第三步的具體過程為：①供試品溶液的制備：取老鐵止痢可溶性粉樣品1.0g，加乙醇25ml，超聲處理20min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次25ml，合并正丁醇液，用氨試液20ml洗滌，棄去氨液，取正丁醇液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液；②對(duì)照藥材溶液及對(duì)照品溶液的制備：另取救必應(yīng)對(duì)照藥材0.5g，加乙醇25ml，超聲處理20min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次25ml，合并正丁醇液，用氨試液20ml洗滌，棄去氨液，取正丁醇液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，制成對(duì)照藥材溶液；再取紫丁香苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；③鑒別：取供試品溶液、對(duì)照藥材溶液和對(duì)照品溶液三種溶液各2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水-甲酸按照8:24:5:2:2的質(zhì)量份數(shù)比混合為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至顯色清晰，分別置日光和紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。其中，第四步的具體過程為：①供試品溶液的制備：取老鐵止痢可溶性粉樣品1g，加濃氨試液0.3ml、三濾甲烷25ml，放置過夜，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)尤秊V甲烷0.5ml使溶解，作為供試品溶液；②對(duì)照品溶液的制備：取苦參堿對(duì)照品、槐定堿對(duì)照品，加乙醇制成每1ml各含0.2mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液；③鑒別：吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液兩種溶液各4μl，分別點(diǎn)于用同一制成的硅膠G薄層板上，以甲苯-丙酮-甲醇按照8：3：0.5的質(zhì)量份數(shù)比混合為展開劑，氨蒸氣預(yù)飽和的展開缸里展開，展距8cm，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-水按照2：4：2：1的質(zhì)量份數(shù)比混合并在10℃以下放置的上層溶液為展開劑，預(yù)飽和30min后，展開，取出，晾干，依次噴以碘化鉍鉀試液和亞硝酸鈉乙醇溶液，檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材及對(duì)照品溶液相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。其中，第五步的具體過程為：①色譜條件：以十八烷基硅烷鍵為填充劑，以乙腈為流動(dòng)相A，以水為流動(dòng)相B，按下表中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫；檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm，理論板數(shù)按照紫丁香苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；②對(duì)照品溶液的制備：精密稱定紫丁香苷，加50％甲醇制成每1ml含120μg的紫丁香苷溶液，即得對(duì)照品溶液；③供試品溶液的制備：取老鐵止痢可溶性粉1g，精密稱定，置25ml量瓶中，加50％的甲醇溶解稀釋至刻度，搖勻，取續(xù)濾液，即得供試品溶液；④鑒別：分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，每1g樣品含救必應(yīng)以紫丁香苷(C17H24O9)計(jì)不少于2.50mg。本發(fā)明的有益效果為：本發(fā)明增加了十大功勞的薄層鑒別，優(yōu)化了救必應(yīng)的薄層條件，通過創(chuàng)造堿性環(huán)境改進(jìn)了苦參鑒別中對(duì)硅膠G薄層板中添加2％氫氧化鈉的要求；優(yōu)化了救必應(yīng)藥材的鑒別中效果，優(yōu)化了薄層條件；通過設(shè)置使硅膠G薄層板適用于苦參的薄層鑒別；制定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制方法，具有準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好等特點(diǎn)。同時(shí)可確保制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的可控性，確保產(chǎn)品內(nèi)在質(zhì)量和療效，對(duì)臨床用藥有知道意義。附圖說明圖1老鐵止痢可溶性粉十大功勞的薄層鑒別。圖中，1.鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀對(duì)照品2.供試品1(批號(hào)20160601)3.供試品2(批號(hào)20160602)4.供試品3(批號(hào)20160603)5.陰性對(duì)照樣品。圖2老鐵止痢可溶性粉救必應(yīng)的薄層鑒別(展開劑：三氯甲烷-甲醇-無水甲酸(16:4:1))。圖中，1.紫丁香苷對(duì)照品2.救必應(yīng)對(duì)照藥材3.供試品1(批號(hào)20160601)4.供試品2(批號(hào)20160602)5.供試品3(批號(hào)20160603)6.陰性對(duì)照樣品。圖3老鐵止痢可溶性粉救必應(yīng)的薄層鑒別(展開劑三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水-甲酸(8:24:5:2:2))。圖中，1.紫丁香苷對(duì)照品2.救必應(yīng)對(duì)照藥材3.供試品1(批號(hào)20160601)4.供試品2(批號(hào)20160602)5.供試品3(批號(hào)20160603)6.陰性對(duì)照樣品。圖4老鐵止痢可溶性粉苦參的薄層鑒別。圖中，1.苦參堿、槐定堿對(duì)照品2.供試品1(批號(hào)20160601)3.供試品2(批號(hào)20160602)4.供試品3(批號(hào)20160603)5.陰性對(duì)照樣品。圖5紫丁香苷對(duì)照品液相色譜圖。圖6老鐵止痢可溶性粉液相色譜圖。圖7陰性對(duì)照溶液液相色譜圖。圖8紫丁香苷峰面積-濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線。具體實(shí)施方式為能清楚說明本方案的技術(shù)特點(diǎn)，下面通過具體實(shí)施方式，對(duì)本方案進(jìn)行闡述。一種老鐵止痢可溶性粉制劑的質(zhì)量控制方法，包括以下步驟：第一步、制備制劑：將十大功勞、救必應(yīng)、老鸛草、鐵莧菜、苦參五味藥材按照3:2:3:3:3的質(zhì)量份數(shù)比提取、濃縮、噴干，混合輔料得到老鐵止痢可溶性粉制劑；第二步、以鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀為對(duì)照品，薄層色譜法鑒別老鐵止痢可溶性粉中是否含有十大功勞成分；第三步、以救必應(yīng)為對(duì)照藥材、紫丁香苷為對(duì)照品，薄層色譜法鑒別老鐵止痢可溶性粉中是否含有救必應(yīng)成分；第四步、以苦參堿、槐定堿為對(duì)照品，薄層色譜法鑒別老鐵止痢可溶性粉中是否含有苦參成分；第五步、以紫丁香苷為對(duì)照品，高效液相法測(cè)定老鐵止痢可溶性粉處方中的救必應(yīng)含量。其中，第一步的具體過程為：將十大功勞、救必應(yīng)、老鸛草、鐵莧菜、苦參五味藥材按照3:2:3:3:3的比例進(jìn)行混合，加入2倍量的水進(jìn)行2次提取，提取后將提取液進(jìn)行減壓濃縮至60℃時(shí)相對(duì)密度為1.2的膏體，將膏體在45℃的條件細(xì)進(jìn)行噴干得到預(yù)混物，混合預(yù)混物10％的淀粉和1％的香芹酚得到老鐵止痢可溶性粉制劑。其中，第二步的具體過程為：①供試品溶液的制備：取老鐵止痢可溶性粉樣品5g，加入甲醇25ml，超聲30min，過濾，濾液蒸干，加甲醇3ml使溶解，作為供試品溶液；②對(duì)照品溶液的制備：取鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀對(duì)照品，加甲醇制成每1ml各含0.2mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液；③鑒別：吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯-甲醇-異丙醇-濃氨試液按照6:3:1.5:1.5:0.5的質(zhì)量份數(shù)比混合為展開劑，置氨蒸氣飽和的層析缸內(nèi)，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯兩個(gè)相同的黃色熒光斑點(diǎn)。其中，第三步的具體過程為：①供試品溶液的制備：取老鐵止痢可溶性粉樣品1.0g，加乙醇25ml，超聲處理20min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次25ml，合并正丁醇液，用氨試液20ml洗滌，棄去氨液，取正丁醇液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液；②對(duì)照藥材溶液及對(duì)照品溶液的制備：另取救必應(yīng)對(duì)照藥材0.5g，加乙醇25ml，超聲處理20min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次25ml，合并正丁醇液，用氨試液20ml洗滌，棄去氨液，取正丁醇液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，制成對(duì)照藥材溶液；再取紫丁香苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；③鑒別：取供試品溶液、對(duì)照藥材溶液和對(duì)照品溶液三種溶液各2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水-甲酸按照8:24:5:2:2的質(zhì)量份數(shù)比混合為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至顯色清晰，分別置日光和紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。其中，第四步的具體過程為：①供試品溶液的制備：取老鐵止痢可溶性粉樣品1g，加濃氨試液0.3ml、三濾甲烷25ml，放置過夜，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)尤秊V甲烷0.5ml使溶解，作為供試品溶液；②對(duì)照品溶液的制備：取苦參堿對(duì)照品、槐定堿對(duì)照品，加乙醇制成每1ml各含0.2mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液；③鑒別：吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液兩種溶液各4μl，分別點(diǎn)于用同一制成的硅膠G薄層板上，以甲苯-丙酮-甲醇按照8：3：0.5的質(zhì)量份數(shù)比混合為展開劑，氨蒸氣預(yù)飽和的展開缸里展開，展距8cm，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-水按照2：4：2：1的質(zhì)量份數(shù)比混合并在10℃以下放置的上層溶液為展開劑，預(yù)飽和30min后，展開，取出，晾干，依次噴以碘化鉍鉀試液和亞硝酸鈉乙醇溶液，檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材及對(duì)照品溶液相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。其中，第五步的具體過程為：①色譜條件：以十八烷基硅烷鍵為填充劑，以乙腈為流動(dòng)相A，以水為流動(dòng)相B，按下表中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫；檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm，理論板數(shù)按照紫丁香苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；時(shí)間/分鐘流動(dòng)相A/％流動(dòng)相B/％0～10109010～2010→4090→6020～304060②對(duì)照品溶液的制備：精密稱定紫丁香苷，加50％甲醇制成每1ml含120μg的紫丁香苷溶液，即得對(duì)照品溶液；③供試品溶液的制備：取老鐵止痢可溶性粉1g，精密稱定，置25ml量瓶中，加50％的甲醇溶解稀釋至刻度，搖勻，取續(xù)濾液，即得供試品溶液；④鑒別：分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，每1g樣品含救必應(yīng)以紫丁香苷(C17H24O9)計(jì)不少于2.50mg。實(shí)施例1試驗(yàn)一種老鐵止痢可溶性粉制劑的質(zhì)量控制方法，其方法的步驟是：一、鑒別項(xiàng)目試驗(yàn)：1十大功勞的薄層鑒別試驗(yàn):老鐵止痢可溶性粉質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)鑒別對(duì)十大功勞的薄層鑒別，試驗(yàn)如下:1.1實(shí)驗(yàn)材料:鹽酸小檗堿對(duì)照品:中國食品藥品檢定研究院提供(110713-201212供含量測(cè)定用)；鹽酸巴馬汀對(duì)照品：中國食品藥品檢定研究院提供(110732-201510供含量測(cè)定用)；硅膠G薄層板:青島勝海精細(xì)硅膠化工有限公司，5×10cm。1.2供試品溶液的制備：取老鐵止痢可溶性粉樣品5g，加入甲醇25ml，超聲30min，過濾，濾液蒸干，加甲醇3ml使溶解，作為供試品溶液。供試品1(批號(hào)20160601)、供試品2(批號(hào)20160602)、供試品3(批號(hào)20160603)。1.3對(duì)照品溶液的制備：取鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀對(duì)照品，加甲醇制成每1ml各含0.2mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。1.4陰性對(duì)照溶液的制備：按處方比例，取處方中不含十大功勞的群藥，按本品制備工藝提取、制備，得到十大功勞陰性對(duì)照樣品。取十大功勞陰性對(duì)照樣品5g，按十大功勞“供試品溶液的制備”方法制成陰性對(duì)照溶液。1.5試驗(yàn)條件展開劑:苯-醋酸乙酯-甲醇-異丙醇-濃氨試液(6:3:1.5:1.5:0.5)，氨蒸氣預(yù)飽和；薄層板:硅膠G薄層板；點(diǎn)樣量:對(duì)照品溶液、供試品溶液各5μl；檢視方法:置紫外光燈(365nm)下檢視。1.6實(shí)驗(yàn)結(jié)果:供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。陰性對(duì)照溶液無干擾。該項(xiàng)鑒別斑點(diǎn)清晰，操作簡(jiǎn)便，穩(wěn)定可行，具有特征鑒別意義。見圖1。2救必應(yīng)的薄層鑒別試驗(yàn):老鐵止痢可溶性粉質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)鑒別對(duì)救必應(yīng)的薄層鑒別，試驗(yàn)如下:2.1實(shí)驗(yàn)材料:救必應(yīng)對(duì)照藥材:為中國食品藥品檢定研究院提供(121076-201303供藥品檢驗(yàn)用)；紫丁香苷對(duì)照品：中國食品藥品檢定研究院提供(111574-201504供含量測(cè)定用)。硅膠G薄層板:青島勝海精細(xì)硅膠化工有限公司，5×10cm。2.2供試品溶液的制備：取老鐵止痢可溶性粉樣品1.0g，加乙醇25ml，超聲處理20min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次25ml，合并正丁醇液，用氨試液20ml洗滌，棄去氨液，取正丁醇液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。供試品1(批號(hào)20160601)、供試品2(批號(hào)20160602)、供試品3(批號(hào)20160603)。2.3對(duì)照品溶液的制備：另取救必應(yīng)對(duì)照藥材0.5g，同法制成對(duì)照藥材溶液，再取紫丁香苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。2.4陰性對(duì)照溶液的制備：按處方比例，取處方中不含救必應(yīng)的群藥，按本品制備工藝提取、制備，得到救必應(yīng)陰性對(duì)照樣品。取救必應(yīng)陰性對(duì)照樣品1.0g，按救必應(yīng)“供試品溶液的制備”方法制成陰性對(duì)照溶液。2.5試驗(yàn)條件2.5.1獸藥典方法的考察展開劑:三氯甲烷-甲醇-無水甲酸(16:4:1)；薄層板:硅膠G薄層板；點(diǎn)樣量:對(duì)照藥材溶液、對(duì)照品溶液、供試品溶液各2μ1；檢視方法:噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至顯色清晰，分別置日光和紫外光燈(365nm)下檢視。2.5.2展開劑的優(yōu)化展開劑:三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水-甲酸(8:24:5:2:2)；薄層板:硅膠G薄層板；點(diǎn)樣量:對(duì)照藥材溶液、對(duì)照品溶液、供試品溶液各2μ1；檢視方法:噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至顯色清晰，分別置日光和紫外光燈(365nm)下檢視。2.6實(shí)驗(yàn)結(jié)果:2.6.1獸藥典方法的考察該項(xiàng)鑒別斑點(diǎn)不夠清晰，對(duì)照品的比移值也較大，見圖2。條件還需優(yōu)化。2.6.2薄層條件的優(yōu)化供試品色譜中，在與對(duì)照藥材、對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)和熒光斑點(diǎn)。陰性對(duì)照溶液無干擾。該項(xiàng)鑒別斑點(diǎn)清晰，操作簡(jiǎn)便，穩(wěn)定可行，具有特征鑒別意義。見圖3。3苦參的薄層鑒別試驗(yàn):老鐵止痢可溶性粉質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)鑒別對(duì)十大功勞的薄層鑒別，試驗(yàn)如下:3.1實(shí)驗(yàn)材料:苦參堿對(duì)照品:中國食品藥品檢定研究院提供(110805-200508供含量測(cè)定用)；槐定堿對(duì)照品：中國食品藥品檢定研究院提供(110784-201405供含量測(cè)定用)。硅膠G薄層板:青島勝海精細(xì)硅膠化工有限公司，5×10cm。3.2供試品溶液的制備：取可溶性粉粉末1.0g，加濃氨試液0.3ml、三濾甲烷25ml，放置過夜，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)尤秊V甲烷0.5ml使溶解，作為供試品溶液。供試品1(批號(hào)20160601)、供試品2(批號(hào)20160602)、供試品3(批號(hào)20160603)。3.3對(duì)照品溶液的制備：取苦參堿對(duì)照品、槐定堿對(duì)照品，加乙醇制成每1ml各含0.2mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。3.4陰性對(duì)照溶液的制備：按處方比例，取處方中不含苦參的群藥，按本品制備工藝提取、制備，得到苦參陰性對(duì)照樣品。取苦參陰性對(duì)照樣品1.0g，按苦參“供試品溶液的制備”方法制成陰性對(duì)照溶液。3.5試驗(yàn)條件展開劑:①甲苯-丙酮-甲醇(8：3：0.5)，氨蒸氣預(yù)飽和，展距8cm；②甲苯-乙酸乙酯-甲醇-水(2：4：2：1)10℃以下放置的上層溶液；薄層板:硅膠G薄層板；點(diǎn)樣量:對(duì)照品溶液、供試品溶液各4μ1；檢視方法:置紫外光燈(365nm)下觀察。3.6實(shí)驗(yàn)結(jié)果:供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性對(duì)照溶液無干擾。該項(xiàng)鑒別斑點(diǎn)清晰，操作簡(jiǎn)便，穩(wěn)定可行，具有特征鑒別意義。見圖4。4其他老鸛草和鐵莧菜中都含有沒食子酸，鑒別中不具有專屬性，不列入質(zhì)量控制方法。二、含量檢測(cè)項(xiàng)目試驗(yàn)：紫丁香苷含量檢測(cè)實(shí)驗(yàn)，步驟如下：1.1儀器與試藥儀器:安捷倫高效液相色譜儀(HPLC-1260)，電子天平AB204-S。試劑:乙腈為色譜純，水為重蒸水；其他試劑均為分析純。對(duì)照品:紫丁香苷對(duì)照品為中國食品藥品檢定研究院提供(111574-201504供含量測(cè)定用)。樣品:老鐵止痢可溶性粉(青島農(nóng)業(yè)大學(xué)提供)。供試品1(批號(hào)20160601)、供試品2(批號(hào)20160602)、供試品3(批號(hào)20160603)。1.2色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜柱：AgilentZORBAXEclipsePlus(5μm,250mm×4.6mm)；十八烷基鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相:乙腈-水，梯度洗脫(見下表)；流速:1ml/min；柱溫:30℃；波長(zhǎng):210nm。時(shí)間/分鐘流動(dòng)相A/％流動(dòng)相B/％0-10109010-2010→4090→6020-304060供試品溶液的制備：取本品1g，精密稱定，置25ml量瓶中，加50％的甲醇溶解稀釋至刻度，搖勻，取續(xù)濾液，即得。對(duì)照品溶液的制備精密稱定紫丁香苷，加50％甲醇制成每1ml含120μg的紫丁香苷溶液，即得。陰性樣品溶液的制備：按處方比例，取處方中不含救必應(yīng)的群藥，按本品制備工藝提取、制備，得到救必應(yīng)陰性對(duì)照樣品。取救必應(yīng)陰性對(duì)照樣品1g，按救必應(yīng)“供試品溶液的制備”方法制成陰性對(duì)照溶液。測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。液相色譜圖分別見圖5、圖6、圖7。1.3線性關(guān)系的考察精密稱取紫丁香苷對(duì)照品16.15mg，置25ml的容量瓶中，加50％甲醇溶解，并稀釋至刻度，搖勻，作為濃度為646μg/ml對(duì)照品貯備液。分別精密移取貯備液0.25ml、0.5ml、1.0ml、2.0ml、4.0ml置10ml容量瓶中，加50％甲醇稀釋至刻度，得16.15、32.3、64.6、129.2、258.4μg/ml系列濃度的紫丁香苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液。測(cè)定法分別精密吸取系列濃度對(duì)照品溶液10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。結(jié)果見表1。表1紫丁香苷對(duì)照品測(cè)定結(jié)果峰面積-濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖8：回歸方程y＝34.52x-27.45(R2＝1)。結(jié)果表明濃度在16.15-258.4μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。1.4精密度試驗(yàn)吸取對(duì)照品溶液(129.2μg/ml)，重復(fù)進(jìn)樣6次，各10μ1，計(jì)算峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果見表2。表2精密度試驗(yàn)結(jié)果試驗(yàn)結(jié)果表明，儀器的精密度良好。1.5穩(wěn)定性取本品按供試品溶液配制方法制備供試品溶液，分別于0h、2h、4h、6h、8h、12h進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果見表3。表3穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果結(jié)果表明，供試品溶液在12小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好。1.6重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)取同一批號(hào)的老鐵止痢可溶性粉(20150601)的樣品6份，分別按擬訂方法制備、測(cè)定，結(jié)果紫丁香苷含量見表4。表4重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果對(duì)照品濃度129.2μg/ml，對(duì)照品峰面積4395.2。結(jié)果表明，試驗(yàn)方法的重現(xiàn)性良好。1.7回收率試驗(yàn)取已知含量的老鐵止痢可溶性粉(批號(hào):20150601含量3.12mg/g)，精密稱取取0.5g，置25ml量瓶中，加入紫丁香苷對(duì)照品溶液(646μg/ml)2.5ml，按"供試品溶液的制備"方法制備，進(jìn)樣，計(jì)算回收率，結(jié)果見表5。表5回收率試驗(yàn)結(jié)果對(duì)照品濃度129.2μg/ml，對(duì)照品峰面積4395.2。結(jié)果表明:本次實(shí)驗(yàn)的平均回收率為106.75％，RSD為0.84％，加樣回收良好。1.8樣品測(cè)定:取三批樣品，按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的方法測(cè)定含量，結(jié)果見表6。紫丁香苷含量以外標(biāo)峰面積法計(jì)算。表6樣品中紫丁香苷含量測(cè)定結(jié)果注:對(duì)照品濃度129.2μg/ml，對(duì)照品峰面積4395.2。結(jié)果表明，老鐵止痢可溶性粉中紫丁香苷的含量測(cè)定方法可行，本品每1g含救必應(yīng)以紫丁香苷計(jì)(C17H24O9)，不得少于1.03mg,3批樣品含量均符合標(biāo)準(zhǔn)要求。本發(fā)明未經(jīng)描述的技術(shù)特征可以通過或采用現(xiàn)有技術(shù)實(shí)現(xiàn)，在此不再贅述，當(dāng)然，上述說明并非是對(duì)本發(fā)明的限制，本發(fā)明也并不僅限于上述舉例，本
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員在本發(fā)明的實(shí)質(zhì)范圍內(nèi)所做出的變化、改型、添加或替換，也應(yīng)屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。當(dāng)前第1頁1 2 3