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一種快速測(cè)定磺胺類(lèi)抗生素殘留的仿生酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法與流程

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技術(shù)特征:

1.一種快速測(cè)定磺胺類(lèi)抗生素殘留的仿生酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法,其特征在于包括以下步驟:

(1)分子印跡-量子點(diǎn)納米結(jié)構(gòu)人工抗體的制備

將7.5 mL環(huán)己烷和1.8 mL Triton X-100加入兩口燒瓶中,于150 rpm磁力攪拌15 min,然后依次加入400 μL濃度為2.5 nmol/mL的量子點(diǎn)溶液、50 μL正硅酸乙酯和100 μL氨水,磁力攪拌2 h;然后加入200 μL 濃度為1.0-5.0 mg/mL的模板分子溶液以及20-25 μL的功能單體,室溫下聚合反應(yīng)12 h后;再加入10 mL丙酮,渦旋1 min,然后于9000 rpm離心10 min,棄掉上清液后,再加入6 mL雙蒸水,充分分散后,于9000 rpm離心10 min,最后用10.0 mL由體積比為8:2 的乙醇和已腈組成的混合液洗脫2 h以除去磺胺類(lèi)抗生素,再分散于1.0 mL乙醇磷酸鹽溶液中,得到分子印跡-量子點(diǎn)納米結(jié)構(gòu)人工抗體溶液,其中乙醇磷酸鹽溶液中乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)為50-80%;

(2)待測(cè)樣品檢測(cè)

A.用乙醇將酶標(biāo)孔潤(rùn)洗3次,然后在每個(gè)酶標(biāo)孔中依次加入50 μL 分子印跡-量子點(diǎn)納米結(jié)構(gòu)人工抗體溶液和150 μL樣品提取液;并設(shè)置空白對(duì)照酶標(biāo)孔組,空白對(duì)照酶標(biāo)孔組每孔加入150μL pH為8-10的磷酸鹽緩沖液;

B.將酶標(biāo)板室溫育10 min,然后用酶標(biāo)儀讀出發(fā)射波長(zhǎng)在605nm下的數(shù)值,根據(jù)熒光值由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算出樣品提取液中磺胺類(lèi)抗生素含量。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速測(cè)定磺胺類(lèi)抗生素殘留的仿生酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法,其特征在于:步驟(1)中所述的模板分子為磺胺嘧啶、磺胺甲嘧啶、磺胺-5-甲氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲噁唑或者磺胺二甲氧嘧啶;所述胡功能單體為氨丙基三乙氧基硅烷或者甲基丙烯酸。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速測(cè)定磺胺類(lèi)抗生素殘留的仿生酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法,其特征在于:步驟(1)中所述的量子點(diǎn)是CdS/ZnS,所述的分子印跡-量子點(diǎn)納米結(jié)構(gòu)人工抗體的粒徑為40-50 nm。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速測(cè)定磺胺類(lèi)抗生素殘留的仿生酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法,其特征在于:步驟(2)中所述的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo),(F0/F-1)為縱坐標(biāo),其中F0為空白對(duì)照孔的平均熒光值,F(xiàn)為磺胺標(biāo)準(zhǔn)液或樣品提取液的平均熒光值。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速測(cè)定磺胺類(lèi)抗生素殘留的仿生酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法,其特征在于步驟(2)中所述的樣品提取液制備方法如下:準(zhǔn)確稱(chēng)取待測(cè)樣品2.0 g,于18000 rpm勻漿,然后加入2.0 mL乙腈,渦旋震蕩10 min,超聲15min,5000 rpm離心5min;然后取上清液至離心管中,加入3 mL乙腈飽和正己烷;手動(dòng)震蕩15~20s,于5000 rpm離心5 min,取下層液體用0.22 μm濾膜過(guò)濾得到樣品提取液。

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