1.一種高效液相色譜梯度法同時測定萘普替尼光降解產物及其它有關物質的方法,其特征在于,該檢測方法包括以下步驟:
(1)制備標準品溶液,以所述標準品溶液在下述色譜條件下進行系統(tǒng)適用性試驗,校定檢測系統(tǒng);
色譜條件:色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠柱,以體積比為82∶18的磷酸鹽緩沖液-甲醇為流動相A,以體積比為40∶60的磷酸鹽緩沖液-甲醇為流動相B,梯度洗脫,磷酸鹽緩沖液的濃度為0.04~0.1mol/L,pH值為7.0~7.8,柱溫為25~35℃,流速為0.9~1.1ml/min,檢測波長為247nm;
標準品溶液制備:分別取起始原料、中間體1、中間體2、中間體3、雜質A、雜質B和萘普替尼對照品加流動相A制成每1ml中含0.0025~0.5mg的混合溶液;
精密量取10μl所述混合溶液注入液相色譜儀,記錄色譜圖,校定檢測系統(tǒng)至萘普替尼主峰與相鄰雜質B的峰的分離度大于1.5,萘普替尼主峰的理論板數不低于10000,拖尾因子不大于1.5;
(2)制備供試品溶液和對照品溶液;
取萘普替尼待測樣品,加流動相A制成濃度為0.5mg/ml的溶液,作為供試品溶液;取萘普替尼對照品,加流動相A制成濃度為0.005mg/ml的溶液,作為對照品溶液;
(3)通過高效液相色譜測定待測樣品中雜質B及相關有關物質的含量;
以對照品溶液注入經上述步驟(1)校定后的液相色譜儀,調節(jié)檢測靈敏度,再將供試品溶液注入液相色譜儀,在步驟(1)所述的色譜條件下進行高效液相色譜測定,記錄色譜圖至萘普替尼主峰保留時間的3~4倍;
(4)計算待測樣品中各雜質的含量;
按外標法以峰面積計算,各雜質峰面積之和不得超過1.0%。
2.權利要求1所述的方法,其中所述的梯度洗脫中,流動相A比例的變化范圍為:于0~10分鐘,線性梯度洗脫,流動相A的比例從75%變化為55%,流動相B的比例從25%變化為45%;于10~20分鐘,等度洗脫,流動相A的比例保持55%不變,流動相B的比例保持45%不變;于20~30分鐘,線性梯度洗脫,流動相A的比例從55%變化為0%,流動相B的比例從45%變化為100%;于30~40分鐘,等度洗脫,流動相A的比例保持0%不變,流動相B的比例保持100%不變,于40~45分鐘,流動相A和B回到初始比例,色譜柱重新平衡。
3.如權利要求1所述的方法,其中所述鹽選自磷酸二氫鈉。
4.如權利要求3所述的方法,其中所述的磷酸二氫鈉的濃度為0.05mol/L,pH值為7.5。
5.如權利要求1所述的方法,其色譜條件為:色譜柱為十八烷基硅烷鍵合柱(100×4.6mm,3.5μm),以體積比為82∶18的磷酸鹽緩沖液-甲醇為流動相A,以體積比為40:60的磷酸鹽緩沖液-甲醇為流動相B,梯度洗脫,柱溫為30℃,流速為1.0ml/min,檢測波長為247nm。
6.如權利要求5所述的方法,所述的色譜柱為Waters XBridge C18色譜柱。
7.如權利要求1-6任一項所述的方法,其特征在于,所述萘普替尼待測樣品包括萘普替尼原料、萘普替尼粗品、萘普替尼片劑和萘普替尼膠囊。