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一種侵染生姜的黃瓜花葉病毒抗血清的制備方法與流程

文檔序號(hào):12784877閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種制備侵染生姜的黃瓜花葉病毒抗血清的方法,其特征在于,包括以下步驟:

a、粗病毒的提取將黃瓜花葉病毒侵染的生姜病葉勻漿,過(guò)濾和低速離心去除大的固體雜質(zhì),四氯化碳去除葉綠素,加入聚乙二醇6000(PEG6000)、NaCl和Triton-X 100后靜置使病毒粒子沉淀,用20%蔗糖墊進(jìn)一步純化獲得的黃瓜花葉病毒顆粒, 將其溶解于PBS中,得到病毒懸液,于-80°C儲(chǔ)存?zhèn)溆茫?/p>

b、黃瓜花葉病毒外殼蛋白的5-20% SDS-PAGE梯度分離純化將病毒懸液與等體積的1.5-2.5倍SDS上樣緩沖液混合,沸水浴加熱8-12分鐘,冷卻后離心除去沉淀,然后將樣品加入制備型的5-20% SDS-PAGE梯度凝膠板中電泳,完畢后凝膠用4°C的0.25M KCl浸泡染色,切下乳白色的黃瓜花葉病毒外殼蛋白條帶,平分3-5份;

c、將含外殼蛋白的凝膠加生理鹽水磨細(xì)后,免疫注射3-5只小鼠,4次免疫注射,兩次之間間隔6-7天,第一次注射方式為皮下注射0.24-0.26 mL,腹腔注射0.24-0.26 mL,第二、第三和第四次注射均腹腔注射0.48-0.52 mL,第四次注射后第3天斷頭取血,6小時(shí)后離心獲得抗血清。

2.權(quán)利要求1所述的抗血清制備方法制得的抗血清。

3.權(quán)利要求2所述的抗血清在侵染生姜黃瓜花葉病毒檢測(cè)上的應(yīng)用。

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