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一種人類精子線粒體功能檢測方法與流程

文檔序號(hào):12713480閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種人類精子線粒體功能檢測方法,其特征在于包括如下步驟:

(1)將液化的精液用37℃緩沖液稀釋精子至1~2×106個(gè)/mL,每個(gè)標(biāo)本處理兩管,分別作為對(duì)照管和檢測管;

(2)將500μL稀釋過的精子加入到流式細(xì)胞儀上樣管中,同時(shí)加入5μL的JC-1染液,避光染色15分鐘,其中對(duì)照管置于85℃條件下2分鐘,滅活,檢測管置于37℃條件下保持活力;

(3)設(shè)定流式細(xì)胞儀的校準(zhǔn),對(duì)照管、檢測管按順序上機(jī),每管樣本至少連續(xù)測定兩次,每管樣本至少記錄樣本主群5000個(gè)細(xì)胞并使用MMP軟件統(tǒng)計(jì)分析;

(4)根據(jù)MMP軟件統(tǒng)計(jì)分析得出結(jié)果,將37℃正常處理樣本百分比減去85℃高溫處理后的空白樣本百分比,得到的MMP百分比差值即區(qū)分出正常人群百分比數(shù)值;

(5)測定后,分別用漂白劑、進(jìn)樣管清潔劑和除菌的雙蒸水徹底清除殘留于流式細(xì)胞儀進(jìn)樣線中的細(xì)胞碎片和熒光染料。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種人類精子線粒體功能檢測方法,其特征在于:步驟(1)中所述的緩沖液為氯化鈉、磷酸二氫鉀、葡萄糖、氯化鉀、酸鎂、氯化鈣、N-2-羥乙基哌嗪-N-2-乙磺酸二鈉鹽、碳酸氫鈉、丙酮酸鈉、牛血清白蛋白和乳酸鈉的混合物。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種人類精子線粒體功能檢測方法,其特征在于:步驟(2)中所述的JC-1染色液為JC-1和二甲基亞砜的混合物。

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