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一種煙草及煙草制品中煙堿的手性分析高效液相色譜法的制作方法

文檔序號(hào):12784695閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種煙草及煙草制品中煙堿的手性分析高效液相色譜法,其特征在于:將煙草及煙草制品樣品干燥、粉碎和過(guò)篩,樣品經(jīng)過(guò)氫氧化鈉溶液浸潤(rùn)后,采用甲基叔丁基醚和甲醇溶液萃取,萃取液經(jīng)基質(zhì)分散固相萃取凈化后,使用手性柱-正相液相色譜紫外檢測(cè)器分析,采用峰面積歸一化法定量檢測(cè)煙草及煙草制品中S-(-)-煙堿和R-(+)-煙堿的比例,具體步驟如下:

1). 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制:稱(chēng)取約100.0 mg的S-(-)-煙堿標(biāo)準(zhǔn)品,用正己烷和甲醇溶液稀釋定容到50 mL棕色容量瓶中,配制成濃度約為2.0 mg/mL的S-(-)-煙堿標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液;稱(chēng)取約50.0 mg的R-(+)-煙堿標(biāo)準(zhǔn)品,用正己烷和甲醇溶液稀釋定容到50 mL棕色容量瓶中,配制成濃度約為1.0 mg/mL的R-(+)-煙堿標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液;利用S-(-)-煙堿標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液和R-(+)-煙堿標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液稀釋?zhuān)渲芐-(-)-煙堿和R-(+)-煙堿濃度分別為100 μg/mL和5 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,另外分別稀釋得到100 μg/mL的S-(-)-煙堿和R-(+)-煙堿標(biāo)準(zhǔn)溶液;

2). 煙草及煙草制品樣品的混勻:將煙草及煙草制品樣品置于40 oC烘箱中,1小時(shí)后將煙草及煙草制品取出,粉碎后過(guò)0.45毫米孔徑標(biāo)準(zhǔn)篩;

3). 煙草及煙草制品樣品的萃?。悍Q(chēng)取0.3 g已粉碎的樣品于15mL具塞離心管中,加入2.0 mL 5% 的氫氧化鈉溶液,渦旋1min混勻后靜置10 min浸潤(rùn)樣品,取10 mL甲基叔丁基醚/甲醇溶液到離心管中,并于旋渦混合器上以4000 rpm速度振蕩30 min;

4). 萃取液的凈化:取1.5 mL萃取后上清液于2 mL內(nèi)含有基質(zhì)分散固相萃取材料的凈化離心管中,于旋渦混合器上以4000 rpm振蕩2 min,以10000 rpm離心1 min,取上清液過(guò)0.45 μm有機(jī)相濾膜后進(jìn)液相分析;

5).正相高效液相色譜條件:分析柱為Chiralcel OD-H液相色譜柱,柱長(zhǎng) 250 mm ,內(nèi)徑4.6 mm ,固定相粒徑5 μm;流動(dòng)相為正己烷和甲醇溶液,流速1 mL/min;等度洗脫;柱溫30 ℃;進(jìn)樣體積 10 μL;紫外檢測(cè)器檢測(cè)波長(zhǎng)252 nm;分析時(shí)間15 min;采用對(duì)照標(biāo)樣與樣品中煙堿色譜峰的保留時(shí)間進(jìn)行S-(-)-煙堿和R-(+)-煙堿的定性分析,對(duì)峰面積進(jìn)行歸一化定量S-(-)-煙堿和R-(+)-煙堿占總煙堿的比例。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的煙草及煙草制品中煙堿的手性分析高效液相色譜法,其特征在于:步驟3)中甲基叔丁基醚/甲醇溶液的體積比90:10。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的煙草及煙草制品中煙堿的手性分析高效液相色譜法,其特征在于:步驟4)中所述的基質(zhì)分散固相萃取材料為含150 mg無(wú)水硫酸鎂,25 mg PSA吸附劑,7.5 mg GCB吸附劑。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的煙草及煙草制品中煙堿的手性分析高效液相色譜法,其特征在于:步驟5)中流動(dòng)相正己烷和甲醇的體積比為98:2 。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的煙草及煙草制品中煙堿的手性分析高效液相色譜法,其特征在于:步驟1)中標(biāo)準(zhǔn)溶液配制時(shí)正己烷和甲醇溶液的體積比為98:2。

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