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一種用于動(dòng)物源樣品中痕量F?2毒素代謝分析的方法與流程

文檔序號(hào):12784711閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種用于動(dòng)物源樣品中痕量F-2毒素代謝分析的方法,其特征在于:以反相色譜柱對(duì)動(dòng)物樣品提取凈化液進(jìn)行在柱連續(xù)進(jìn)樣富集,以甲醇-乙腈-水三元混合溶液為流動(dòng)相,采用恒流等度洗脫和柱后熒光檢測模式,連續(xù)分離檢測動(dòng)物源樣品中痕量F-2毒素及代謝組分,實(shí)現(xiàn)動(dòng)物源樣品中F-2毒素代謝組分的痕量分析。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于動(dòng)物源樣品中痕量F-2毒素代謝分析的方法,其特征在于:所述動(dòng)物源樣品中F-2毒素代謝組分包括F-2毒素、β-玉米赤霉烯醇。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于動(dòng)物源樣品中F-2毒素代謝分析的方法,其特征在于:

所述的反相色譜柱為十八烷基鍵合硅膠填充柱;

所述的甲醇-乙腈-水三元混合溶液體積比為55:13:32;

所述的熒光檢測模式的激發(fā)波長為274 nm、發(fā)射波長為440 nm。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述用于動(dòng)物源樣品中痕量F-2毒素代謝分析的方法,其特征在于:所述動(dòng)物源樣品為豬的肝臟、肌肉和血清。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述用于動(dòng)物源樣品中痕量F-2毒素代謝分析的方法,其特征在于:所述方法對(duì)于肝臟、肌肉組織樣品分析的具體包括以下步驟:

(1)提取:取1g均質(zhì)的組織樣品,均勻攪碎,置放于10 mL離心管中,加入2.0 mL乙酸鈉溶液、3.0 mL無水乙醚,4000r/min離心10min,轉(zhuǎn)移上清液;重復(fù)提取一次;合并提取液,40℃下氮?dú)獯蹈桑?/p>

殘?jiān)?.5mL三氯甲烷溶解,超聲2min,加入1.5mL 0.5mol/L的氫氧化鈉溶液,4000r/min離心10min,轉(zhuǎn)移上清液;重復(fù)提取一次;合并提取液,40℃下氮?dú)獯蹈桑霉腆w備用;

(2)凈化:在步驟(1)得到的固體中加入體積比1:4的磷酸-水溶液0.5mL,混勻后轉(zhuǎn)入PEP固相萃取柱中,先用1.0 mL水淋洗,棄去;采用3.0ml甲醇洗脫,洗脫液于40℃下氮?dú)獯蹈?,殘?jiān)皿w積比為1:3的乙腈-水溶液1.0 mL溶解,過濾,取濾液待測;

(3)在柱富集:以十八烷基鍵合硅膠顆粒填充柱為分離柱;在步驟(2)得到的濾液中加入體積比1:3的乙腈-水混合溶液配制樣品,在柱連續(xù)進(jìn)樣200μL;

(4)等度洗脫分析:以甲醇、乙腈、水三元混合溶液為流動(dòng)相,以流速為1.0 mL/min進(jìn)行恒流等度洗脫;采用熒光檢測方式,激發(fā)波長為274 nm、發(fā)射波長為440 nm,在線測定β-玉米赤霉烯醇、F-2毒素組分,實(shí)現(xiàn)對(duì)痕量F-2毒素代謝組分的色譜等度洗脫-熒光檢測。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述用于動(dòng)物源樣品中痕量F-2毒素代謝分析的方法,其特征在于:所述方法對(duì)于血清樣品分析的具體包括以下步驟:

(1)凈化:取 1mL 血清樣品于 10 mL 離心管中,加入 5.0 mL 乙酸乙酯,渦旋混勻 5min,3000r/min 離心 10 min 取上清液于 10 mL 玻璃離心管中,剩余殘?jiān)?4.0 mL 乙酸乙酯分兩次清洗,洗液轉(zhuǎn)入玻璃離心管中,40℃水浴氮?dú)獯蹈桑瑲堅(jiān)?1.0 mL 流動(dòng)相溶解,3000 r/min 離心 10min,取上清液過濾,濾液待測;

(2)在柱富集:以十八烷基鍵合硅膠顆粒填充柱為分離柱;在步驟(1)得到的濾液中加入體積比1:3的乙腈-水混合溶液配制樣品,在柱連續(xù)進(jìn)樣200μL;

(3)等度洗脫分析:以甲醇、乙腈、水三元混合溶液為流動(dòng)相,以流速為1.0 mL/min進(jìn)行恒流等度洗脫;采用熒光檢測方式,激發(fā)波長為274 nm、發(fā)射波長為440 nm,在線測定β-玉米赤霉烯醇、F-2毒素組分,實(shí)現(xiàn)對(duì)痕量F-2毒素代謝組分的色譜等度洗脫-熒光檢測。

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