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一種快速、高靈敏結(jié)核桿菌耐藥株鑒別與拉曼定量分析方法

文檔序號:40573336發(fā)布日期:2025-01-03 11:36閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種表面增強拉曼sers基底材料的制備方法,其特征在于,包括以下步驟:

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法,其特征在于,步驟(1)中,所述cuac2、超純水、鄰甲氧基苯胺的用量比為0.05g-0.2g:30-50ml:0.05-0.2mol/l;和/或,所述水熱反應(yīng)的溫度為160℃-200℃;和/或,所述水熱反應(yīng)的時間為8h-15h;和/或,所述溶液混合的時間為15min-45min。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法,其特征在于,步驟(2)中,所述離心的轉(zhuǎn)速為3000rpm-8000rpm;和/或,所述離心的時間為3min-10min;和/或,所述cu2o納米線的表面改性活性劑為聚乙烯吡咯烷酮、聚氯乙烯、聚苯乙烯中的一種;和/或,所述cu2o納米線組裝所用的表面改性活性劑的分子量為100-1000000中的一種;和/或,所述cu2o納米線的用量為10-100μg;和/或,所述cu2o納米線表面改性所用溶劑為超純水或無水乙醇;和/或,所述cu2o納米線表面改性過程所用的時間為8-15h;和/或,所述cu2o納米線表面改性過程所用的溫度為20-40℃;和/或,所述油/水界面為水/氯仿,水/環(huán)己烷,水/二氯甲烷中的一種;和/或,所述油/水界面的油/水比例為1:0.5-1:3;和/或,所述油/水的分散溶劑的總體積為0.5-2ml;和/或,所述干燥的溫度為40℃-80℃。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3之任一項所述方法制備得到的表面增強拉曼sers基底材料。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的表面增強拉曼sers基底材料在構(gòu)建結(jié)核桿菌耐藥基因sers分析探針、分析芯片以及在結(jié)核桿菌耐藥基因分析方面中的應(yīng)用。

6.一種結(jié)核桿菌耐藥基因sers分析探針的制備方法,其特征在于,基于權(quán)利要求4所述的表面增強拉曼sers基底材料,針對特定結(jié)核桿菌耐藥基因設(shè)計核酸識別探針,并通過信號分子與參比分子修飾構(gòu)建結(jié)核桿菌耐藥基因sers分析探針。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法,其特征在于,所述結(jié)核桿菌耐藥基因的核酸序列為結(jié)核桿菌耐藥基因片段katg、gyrb、rpob、gyra中的一種;和/或,所述核酸識別序列與核酸信號序列為dna分子或rna分子;和/或,所述核酸識別序列的堿基數(shù)量為35-40nt;和/或,所述核酸信號序列的堿基數(shù)量為6-10nt;和/或,所述核酸識別序列5‘端修飾基團為氨基、巰基、羥基、羧酸基中的一種;和/或,所述核酸信號序列3‘端修飾基團為氨基、巰基、羥基、羧酸基中的一種。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法,其特征在于,所述核酸識別序列的堿基序列如seqid?no.1~6所示中的一種;和/或,所述核酸信號序列的堿基序列為:5’-ccagttgg-nh2-3’、5’-catgacgg-nh2-3’、5’-attggtgg-nh2-3’、5’-accagtgg-nh2-3’中的一種;和/或,所述拉曼信號分子為苝四甲酸二酐、羅丹明6g、羅丹明b、花菁及其衍生物、四氰基醌二甲烷及其衍生物、浴銅靈及其衍生物、苯乙炔及其衍生物中的一種;和/或,所述拉曼參比分子為苝四甲酸二酐、羅丹明6g、羅丹明b、花菁及其衍生物、四氰基醌二甲烷及其衍生物、浴銅靈及其衍生物、苯乙炔及其衍生物中的一種;和/或,所述參比分子溶液的濃度為100μm-2mm;和/或,所述的參比分子溶液的體積為100μl-1000μl;和/或,所述參比分子的修飾時間為30min-60min;和/或,所述信號序列-分子修飾所用的拉曼信號分子溶液的濃度為100μm-1000μm;和/或,所述序列-分子修飾所用的拉曼信號分子體系的總體積為1ml-20ml;和/或,所述序列-分子修飾所用的拉曼信號分子體系中的偶聯(lián)劑為1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽,n-羥基琥珀酰亞胺,比例為2:1;和/或,所述序列-分子修飾所用的拉曼信號分子體系中,核酸信號序列的用量為10μm-100μm;和/或,所述序列-分子修飾所用的反應(yīng)時間為10h-20h;和/或,所述的序列-分子修飾所用的反應(yīng)反應(yīng)溫度為60℃-90℃;和/或,所述基底-識別序列修飾所用的核酸識別序列的濃度為10-50μm;和/或,所述基底-識別序列修飾所用的核酸識別序列的溶液的體積為100μl-1ml;和/或,所述基底-識別序列修飾所用的核酸識別序列的反應(yīng)溫度為20℃-50℃。

9.一種結(jié)核桿菌耐藥基因sers分析芯片的制備方法,其特征在于,所述方法包括以下步驟:基于如權(quán)利要求6所述方法制備得到的結(jié)核桿菌耐藥基因sers分析探針,針對多種不同的結(jié)核桿菌耐藥基因序列,固定一系列具有不同識別功能的sers分析探針于石英基底片表面,進而構(gòu)建結(jié)核桿菌耐藥基因sers分析芯片,進行拉曼光譜測試。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的制備方法,其特征在于,所述基底片為玻璃片、石英片、云母片中的一種;和/或,所述結(jié)合桿菌核酸痰液模擬樣本的體積為200μl-800μl;和/或,所述共同孵育的溫度為30℃-80℃;和/或,所述共同孵育的時間為1-10min;和/或,所述核酸信號序列探針溶液的體積為100μl-500μl;和/或,含有核酸信號序列探針溶液的濃度為0.5-2μm;和/或,拉曼光譜測試所使用的激光波長為532nm、633nm和785nm中的一種;和/或,所述拉曼光譜測試所使用的激光功率為0.5-5mw;和/或,所述拉曼光譜測試所使用的測試曝光時間為0.5-2s。


技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種快速、高靈敏結(jié)核桿菌耐藥株鑒別與拉曼定量分析方法,首先,采用自組裝的方法構(gòu)建具有高穩(wěn)定性、高增強因子的半導(dǎo)體表面增強拉曼基底實現(xiàn)待測信號分子拉曼信號的放大,為分析檢測提供高靈敏度;其次,依據(jù)結(jié)合桿菌關(guān)鍵耐藥基因的突變位點,設(shè)計合成多條具有單堿基識別能力的結(jié)核桿菌核酸識別單元;選擇合適拉曼信號分子與內(nèi)參比分析,構(gòu)建高選擇性、高靈敏度的無酶、無核酸擴增過程的快速結(jié)核桿菌耐藥基因拉曼分析探針,并通過空間排布設(shè)計構(gòu)建一種全新的結(jié)核桿菌耐藥株鑒別與拉曼定量分析芯片與方法,最終實現(xiàn)了分析試劑的常溫長期保存以及對常見結(jié)合桿菌耐藥株的低成本快速分型與高靈敏、高選擇性定量分析檢測。

技術(shù)研發(fā)人員:田陽,鄭婷婷,馮恩鐸
受保護的技術(shù)使用者:華東師范大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日:
技術(shù)公布日:2025/1/2
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