本發(fā)明屬于藥物分析檢測(cè)。更具體地，涉及一種同時(shí)檢測(cè)瑪巴洛沙韋原料及其制劑中3個(gè)異構(gòu)體雜質(zhì)的方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、瑪巴洛沙韋(baloxavir?marboxil)，化學(xué)名為[[(r)-12-[(s)-7,8-二氟-6,11-二氫二苯并[b,e]-硫雜-11-基]-6,8-二氧-3,4,6,8,12,12a-六氫-1h-[1,4]嗪并[3,4-c]吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基]氧基]甲基碳酸甲酯，是一種近20年來首創(chuàng)的具有全新作用機(jī)制的抗流感病毒新藥，由日本鹽野義(shionogi)制藥株式會(huì)社和瑞士羅氏(roche)公司合作開發(fā)，于2018年2月在日本上市，同年10月在美國上市，用于單劑量治療癥狀不超過48小時(shí)的急性、無高危因素的成人和12歲或以上的青少年甲型和乙型流感患者?，敯吐迳稠f酯為其前體藥物，經(jīng)腸道上皮、肝臟和血液中的酯酶水解，迅速轉(zhuǎn)化為活性形式瑪巴洛沙韋。

2、瑪巴洛沙韋結(jié)構(gòu)中含有2個(gè)手性中心，主要含有4個(gè)異構(gòu)體，其中有藥理作用的是(r，s)型瑪巴洛沙韋，其他3個(gè)異構(gòu)體均為雜質(zhì)，瑪巴洛沙韋原料生產(chǎn)過程可能引入這3個(gè)異構(gòu)體雜質(zhì)：

3、

4、

5、一般而言，含有手性中心的藥物，不同構(gòu)型間藥效差異較大，且影響目標(biāo)構(gòu)型藥物合成的收率等，目標(biāo)產(chǎn)物的異構(gòu)體雜質(zhì)均需進(jìn)行質(zhì)量研究與控制。同時(shí)，中國藥典雜質(zhì)研究指導(dǎo)原則上也明確規(guī)定單一對(duì)映異構(gòu)體藥品中，可能共存的其他對(duì)映異構(gòu)體和非對(duì)映異構(gòu)體應(yīng)作為雜質(zhì)檢查。在瑪巴洛沙韋原料及制劑的生產(chǎn)、貯存等環(huán)節(jié)中均可能導(dǎo)致手性構(gòu)型的轉(zhuǎn)換，為確保瑪巴洛沙韋的手性純度及其制劑的質(zhì)量和安全，需建立相應(yīng)的異構(gòu)體雜質(zhì)控制方法。

6、在對(duì)瑪巴洛沙韋進(jìn)行檢測(cè)時(shí)發(fā)現(xiàn)，瑪巴洛沙韋異構(gòu)體2雜質(zhì)在常規(guī)反相hplc條件下常與瑪巴洛沙韋共出峰，另外2個(gè)瑪巴洛沙韋異構(gòu)體2和3雜質(zhì)亦共出峰，無法準(zhǔn)確定量單個(gè)雜質(zhì)的含量。

7、目前對(duì)于瑪巴洛沙韋類手性藥物分離以色譜法為主，如周立昕等人(周立昕,彭嘉娟,賈中天,朱雪焱,張鵬.新型抗流感病毒藥物瑪巴洛沙韋的合成工藝優(yōu)化[j].中國醫(yī)藥工業(yè)雜志,2021,52(02):190-197.doi:10.16522/j.cnki.cjph.2021.02.005.)公開了一種測(cè)定瑪巴洛沙韋及其異構(gòu)體的方法，該方法采用waters?sunfire?c18柱(4.6mm×250mm，5μm)為色譜柱，0.1％三氟乙酸溶液為流動(dòng)相a，乙腈為流動(dòng)相b，進(jìn)行色譜測(cè)定瑪巴洛沙韋及異構(gòu)體1；另外再采用chiralpak?ie柱(4.6mm×250mm，5μm)為色譜柱，正己烷∶乙醇(30∶70)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長為254nm，流速為0.5ml/min，柱溫為30℃的檢測(cè)條件測(cè)定瑪巴洛沙韋的異構(gòu)體2、3，并且只有一個(gè)峰?？梢娫摲椒ㄐ枰O(shè)置正、反相兩種體系的檢測(cè)條件才能分步檢測(cè)瑪巴洛沙韋各異構(gòu)體，無法利用同一個(gè)檢測(cè)條件同時(shí)分離檢測(cè)瑪巴洛沙韋及其各異構(gòu)體。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)無法通過同一個(gè)hplc檢測(cè)條件同時(shí)測(cè)定瑪巴洛沙韋原料及其制劑中3個(gè)異構(gòu)體雜質(zhì)的缺陷和不足，提供一種同時(shí)檢測(cè)瑪巴洛沙韋原料及其制劑中3個(gè)異構(gòu)體雜質(zhì)的方法。

2、本發(fā)明的目的是提供所述方法在瑪巴洛沙韋質(zhì)量監(jiān)控中的應(yīng)用。

3、本發(fā)明上述目的通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

4、本發(fā)明保護(hù)一種同時(shí)檢測(cè)瑪巴洛沙韋原料及其制劑中3個(gè)異構(gòu)體雜質(zhì)的方法，采用高效液相色譜法進(jìn)行檢測(cè)，所述高效液相色譜法的條件為：

5、采用chiralpak?ad-h色譜柱，以正己烷、乙醇、二乙胺按照體積比(68～72)：(28～32)：(0.1)的比例混合的混合溶液為流動(dòng)相，等度洗脫后，進(jìn)行檢測(cè)。

6、根據(jù)流動(dòng)相和固定相的極性不同，hplc可以分為正相色譜和反相色譜，其中反相高效液相色譜的固定相由非極性化合物組成，如十八烷基硅烷、c18、c8等有機(jī)化合物，而流動(dòng)相是極性的。因此，極性高的化合物最先被洗脫，低極性或無極性的化合物最后洗脫。hplc大都是對(duì)藥物、食品、生化分子等物質(zhì)進(jìn)行分析，而它們?cè)谧匀唤缰卸际欠菢O性物質(zhì)。因此，常常使用反相高效液相色譜對(duì)這些物質(zhì)進(jìn)行測(cè)定。

7、手性hplc法是通過將手性藥物引入手性環(huán)境使對(duì)映異構(gòu)體間呈現(xiàn)物理特征的差異而進(jìn)行分離的，可分為手性試劑衍生化法(chiralreagent?derivatization，cdr)、手性流動(dòng)相法(chiralmobilephase，cmp)及手性固定相法(chiralstationaryphase，csp)進(jìn)行分離：手性試劑衍生化法是對(duì)映體混合物用手性試劑作柱前衍生，形成一對(duì)非對(duì)映體，然后以常規(guī)固定相分離，手性流動(dòng)相法是將手性試劑添加到流動(dòng)相中，與手性藥物生成非對(duì)映異構(gòu)體復(fù)合物從而實(shí)現(xiàn)分離；手性固定相法是將手性試劑鍵合到固定相上，與藥物對(duì)映異構(gòu)體反應(yīng)形成非對(duì)映異構(gòu)體實(shí)現(xiàn)分離。但是現(xiàn)有技術(shù)都無法在在同一個(gè)檢測(cè)條件下同時(shí)實(shí)現(xiàn)瑪巴洛沙韋及其異構(gòu)體雜質(zhì)的檢測(cè)。

8、發(fā)明人經(jīng)過前期大量的研究，創(chuàng)造性發(fā)現(xiàn)根據(jù)藥物特性結(jié)合手性hplc法對(duì)手性柱、流動(dòng)相等關(guān)鍵檢測(cè)條件進(jìn)行針對(duì)性研究，總結(jié)得到可以快速、準(zhǔn)確地同時(shí)檢測(cè)瑪巴洛沙韋原料及其制劑中3個(gè)異構(gòu)體雜質(zhì)的方法。進(jìn)一步地，對(duì)手性固定相(手性柱)、流動(dòng)相以及其他檢測(cè)參數(shù)的整體影響進(jìn)行不斷的研究，總結(jié)出更加快速、準(zhǔn)確地同時(shí)檢測(cè)瑪巴洛沙韋原料及其制劑中3個(gè)異構(gòu)體雜質(zhì)的優(yōu)化條件和方法，應(yīng)用于巴洛沙韋原料及制劑的檢測(cè)和質(zhì)量控制。

9、其中，所述3個(gè)異構(gòu)體的結(jié)構(gòu)式如下所示，異構(gòu)體1～3分別為(r，s)型、(s，s)型和(s，r)型雜質(zhì)：

10、

11、優(yōu)選地，所述瑪巴洛沙韋測(cè)定時(shí)，供試品溶液用乙醇配制。

12、更優(yōu)選地，所述chiralpak?ad-h色譜柱的規(guī)格為4.6mm×250mm，5μm。

13、優(yōu)選地，高效液相色譜條件中，所述檢測(cè)的波長為250～260nm。

14、優(yōu)選地，高效液相色譜條件中，所述柱溫為20～30℃。

15、優(yōu)選地，高效液相色譜條件中，進(jìn)樣量為10～30μl。

16、優(yōu)選地，高效液相色譜條件中，流動(dòng)相的流速為0.9～1.1ml/min。

17、進(jìn)一步地，所述3個(gè)異構(gòu)體的定量限均為0.02％。

18、進(jìn)一步地，所述3個(gè)異構(gòu)體的檢測(cè)限均為0.01％。

19、本發(fā)明還保護(hù)所述方法在瑪巴洛沙韋質(zhì)量監(jiān)控中的應(yīng)用。

20、本發(fā)明具有以下有益效果：

21、本發(fā)明的檢測(cè)方法可以在一個(gè)色譜條件下同時(shí)檢測(cè)瑪巴洛沙韋原料及其制劑中3個(gè)異構(gòu)體雜質(zhì)，各色譜峰的分離度均較好，檢測(cè)限、定量限也均符合藥物的定性和定量分析要求，靈敏度高，且具有較高的精密度和穩(wěn)定性，重現(xiàn)性好、準(zhǔn)確性高，可用于瑪巴洛沙韋生產(chǎn)過程中對(duì)雜質(zhì)的監(jiān)控，有利于控制、提高瑪巴洛沙韋的質(zhì)量；同時(shí)操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)時(shí)間短，非常適用于大規(guī)模產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)中對(duì)原料藥的質(zhì)量監(jiān)控。