本發(fā)明涉及藥物分析，具體涉及一種太子參藥材指紋圖譜的建立方法。

背景技術(shù)：

1、中藥太子參為石竹科植物孩兒參pseudostellaria?heterophylla(miq.)pax?expax?et?hoffm.的干燥塊根，具有益氣健脾、生津潤(rùn)肺的功效，同時(shí)具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、降血糖等藥理活性。

2、中藥指紋圖譜基于多種化學(xué)成分的鑒定手段，能夠用于綜合評(píng)價(jià)中藥材質(zhì)量。目前有多項(xiàng)文獻(xiàn)資料及專利申請(qǐng)針對(duì)太子參指紋圖譜技術(shù)進(jìn)行了報(bào)道和公開，但存在峰的分離效果差、可用于比較的共有峰數(shù)目少、指紋圖譜的準(zhǔn)確度較低等問題。

3、比如現(xiàn)有技術(shù)1(劉偉祥,胡海云,劉喜純,等.太子參hplc色譜指紋圖譜研究[j].中草藥,2007,38(5):4)公開了太子參hplc色譜指紋圖譜研究，其色譜條件為：色譜柱：dikmakromasil?c18(250mm×4.6mm，5pm)；以乙腈為流動(dòng)相a，以水為流動(dòng)相b，梯度洗脫程序?yàn)?a)：0～25min：0％～15％；25～40min：15％～16％；40～45min：16％～25％；45～75min：25％～50％。體積流量：0.8ml/min；柱溫：25℃；進(jìn)樣量：10μl；檢測(cè)波長(zhǎng)：203nm。供試品溶液的制備包括：精密稱取太子參樣品(粗粉)1.0g,加50％乙醇50ml，超聲30min(300w)，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml溶解，用水飽和的正丁醇30ml萃取，萃取液再用正丁醇飽和的水20ml洗滌，正丁醇液蒸干，殘?jiān)?0％甲醇溶解，并定容至5ml，搖勻。過0.45um微孔濾膜，即得。其指紋圖譜如圖1所示。由圖1可知，其指紋圖譜的4號(hào)峰和5號(hào)峰分離度較差，且共有峰的數(shù)目較少，僅有7個(gè)峰，指紋圖譜的準(zhǔn)確度有待進(jìn)一步提高。

4、中國(guó)專利申請(qǐng)cn114720568a公開了一種太子參藥材的指紋圖譜建立方法及其應(yīng)用，其采用高效液相色譜法，所述高效液相色譜法的條件包括：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動(dòng)相a，以水為流動(dòng)相b形成混合流動(dòng)相，按照0至55min內(nèi)混合流動(dòng)相中的流動(dòng)相a與流動(dòng)相b的體積比從5：95變化至90：10的梯度進(jìn)行洗脫；檢測(cè)波長(zhǎng)為203nm。但是其也僅有12個(gè)共有峰，指紋圖譜的準(zhǔn)確度有待進(jìn)一步提高。

5、因此，開發(fā)一種能解決上述技術(shù)問題的太子參藥材指紋圖譜的建立方法是非常必要的。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足而提供一種峰的分離效果較好、共有峰數(shù)目較多的太子參藥材指紋圖譜的建立方法。

2、本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)的：

3、一種太子參藥材指紋圖譜的建立方法，包括如下步驟：

4、(1)供試品溶液的制備：取太子參藥材用95％乙醇提取，濾過，將濾液干燥后加乙腈溶液復(fù)溶，得到供試品溶液；

5、(2)進(jìn)樣分析：將供試品溶液注入高效液相色譜儀進(jìn)行分析，以共有的色譜峰作為共有特征峰構(gòu)建太子參藥材指紋圖譜。

6、在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，步驟(1)中所述乙腈溶液的體積濃度為20％。

7、在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，步驟(1)中所述提取的方式為加熱回流提取。

8、在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，步驟(1)中所述太子參藥材與95％乙醇的用量比為1g:17.5ml。

9、在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，步驟(1)中所述提取的時(shí)間為1h。

10、在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，步驟(1)中太子參藥材與乙腈溶液的用量比為4g:5ml。

11、在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，步驟(1)中太子參藥材先研磨成粉末再用95％乙醇提取。

12、在本發(fā)明優(yōu)選的一些實(shí)施例中，步驟(1)中所述粉末過五號(hào)篩。

13、在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述建立方法還包括對(duì)照品溶液的制備：選擇太子參環(huán)肽a、太子參環(huán)肽b、太子參環(huán)肽d、太子參環(huán)肽甲、太子參環(huán)肽乙、太子參環(huán)肽丁、太子參環(huán)肽戊和太子參環(huán)肽庚作為對(duì)照品，加甲醇溶解，制備對(duì)照品溶液；步驟(2)中將供試品溶液和對(duì)照品溶液注入高效液相色譜儀進(jìn)行分析，以共有的色譜峰作為共有特征峰構(gòu)建太子參藥材指紋圖譜。

14、在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述太子參藥材指紋圖譜至少包括20個(gè)共有特征峰，其相對(duì)于參照峰太子參環(huán)肽b的相對(duì)保留時(shí)間范圍分別為：0.0642-0.0643、0.0806-0.0807、0.0945-0.0947、0.1191-0.1193、0.1637-0.1643、0.1917-0.1923、0.2474-0.2480、0.3300-0.3314、0.3791-0.3804、0.3967-0.3983、0.4433-0.4452、0.4642-0.4662、0.7646-0.7664、0.7946-0.7965、1.0000、1.0854-1.0890、1.1044-1.1068、1.1550-1.1591、1.2282-1.2320、1.2520-1.2564。

15、在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，步驟(2)中所述高效液相色譜儀的測(cè)試條件包括：采用變波長(zhǎng)檢測(cè)，具體為0～10.5min，220nm；10.5～35min，270nm；35～135min，203nm。

16、在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，步驟(2)中所述高效液相色譜儀的測(cè)試條件包

17、括：采用乙腈作為流動(dòng)相a，采用0.1％磷酸水溶液作為流動(dòng)相b。

18、在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，步驟(2)中所述高效液相色譜儀的測(cè)試條件還包括：洗脫方式為梯度洗脫，具體為：0～30min，10％～16％a；30～35min，16％～23％a；35～85min，23％～43％a；85～91min，43％～67％a；91～115min，67％～95％a；115～135min，95％a。

19、在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，步驟(2)中進(jìn)樣前將供試品溶液和對(duì)照品溶液過0.22μm微孔濾膜。

20、在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述高效液相色譜儀的測(cè)試條件包括：

21、色譜柱：agilent?zorbax?eclipse?plus?c18，5μm，4.6×250mm；

22、流速：1ml/min；

23、柱溫：25℃；

24、進(jìn)樣量：20μl。

25、本發(fā)明的有益效果是：

26、本發(fā)明對(duì)提取溶劑進(jìn)行了優(yōu)化，最終得到的色譜圖峰形好且清晰，分離度較高，有利于構(gòu)建指紋圖譜，提高評(píng)價(jià)準(zhǔn)確度。

27、本發(fā)明對(duì)復(fù)溶溶劑進(jìn)行了篩選，發(fā)現(xiàn)只有采用乙腈溶液才能對(duì)提取后得到的物質(zhì)進(jìn)行復(fù)溶。

28、本發(fā)明進(jìn)一步對(duì)洗脫程序進(jìn)行了優(yōu)化，采用本發(fā)明的洗脫程序得到的色譜峰分布較均勻，峰的數(shù)目較多，且分離度較好。

29、本發(fā)明采用紫外檢測(cè)器在203nm、220nm、270nm這3種波長(zhǎng)切換條件下進(jìn)行檢測(cè)，得到的色譜峰分離度良好且峰的數(shù)目較多。

30、本發(fā)明構(gòu)建的指紋圖譜獲得的共有峰數(shù)目高達(dá)20個(gè)，并且精密度、穩(wěn)定性和重復(fù)性良好，49批太子參藥材的相似度評(píng)價(jià)結(jié)果較高。