本發(fā)明屬于分析化學(xué)，具體涉及一種采用一測多評法測定牡丹皮及其制劑中七種成分含量的方法。該方法用于檢測牡丹皮及其制劑中7個(gè)化學(xué)成分的含量測定。

背景技術(shù)：

1、牡丹皮始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，為毛茛科植物牡丹paeonia?suffruticosaandr.的干燥根皮,具有清熱涼血，活血化瘀，清虛熱的功效。牡丹皮中主要生物活性成分包括酚類(丹皮酚)、萜類(如芍藥苷、氧化芍藥苷、苯甲酰芍藥苷等)、鞣質(zhì)類(如五沒食子酰葡萄糖)及有機(jī)酸類(如沒食子酸、沒食子酸甲酯等)。然而，當(dāng)前中國藥典僅對丹皮酚設(shè)定了質(zhì)量下限，單一成分評估方法不全面，且多指標(biāo)定量測定受限于對照品獲取難度及高成本。為此，一測多評法因其利用易得、價(jià)廉對照品實(shí)現(xiàn)多成分同時(shí)測定的優(yōu)勢，被藥典采納并廣泛用于中藥質(zhì)控?，F(xiàn)已有關(guān)于牡丹皮中多成分含量測定的報(bào)道，但多為外標(biāo)法，導(dǎo)致成本上升。

2、一測多評法(quantitative?analysis?ofmulticomponents?by?single?marker，qams)是中藥領(lǐng)域多成分同步質(zhì)量控制的新模式，指利用中藥有效成分內(nèi)在的函數(shù)關(guān)系和比例關(guān)系，通過只測定其中一個(gè)穩(wěn)定、廉價(jià)、易得的成分，來實(shí)現(xiàn)多個(gè)成分(對照品難以得到或供應(yīng))的同步測定，可有效解決中藥多指標(biāo)質(zhì)量控制過程中對照品使用較多、成本高、難以供應(yīng)等問題，其方法將會是中藥多組分同步定量的發(fā)展方向。

3、目前報(bào)道的牡丹皮及其制劑質(zhì)量的評價(jià)方法存在檢測成分少、標(biāo)準(zhǔn)品品種多、操作步驟繁瑣、分析周期長、成本高等問題。因此，本專利為建立穩(wěn)定可控、成本低、準(zhǔn)確高效的牡丹皮及其制劑質(zhì)量控制方法提供一種新思路。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于提供一種采用一測多評法測定牡丹皮及其制劑中七種成分含量的方法。該檢測方法可以客觀、全面、準(zhǔn)確的檢測牡丹皮及其制劑中沒食子酸、氧化芍藥苷、沒食子酸甲酯、芍藥苷、五沒食子酰葡萄糖、苯甲酰芍藥苷、丹皮酚的含量，具有重復(fù)性好、穩(wěn)定性高和可信度強(qiáng)等特點(diǎn)，大大節(jié)省了資源、降低了檢測成本。

2、為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明的技術(shù)方案為：

3、第一方面，本發(fā)明請求保護(hù)一種采用一測多評法測定牡丹皮及其制劑中7種成分含量的方法，該方法為：采用丹皮酚作為內(nèi)標(biāo)進(jìn)行一測多評，建立丹皮酚與沒食子酸、氧化芍藥苷、沒食子酸甲酯、芍藥苷、五沒食子酰葡萄糖、苯甲酰芍藥苷之間的相對校正因子，通過相對校正因子計(jì)算牡丹皮及其制劑中沒食子酸、氧化芍藥苷、沒食子酸甲酯、芍藥苷、五沒食子酰葡萄糖、苯甲酰芍藥苷的含量。

4、進(jìn)一步，該方法具體包括以下步驟：

5、(1)制備對照品溶液并建立內(nèi)標(biāo)與其他待測成分之間的相對校正因子：采用丹皮酚作為內(nèi)標(biāo)，建立丹皮酚與沒食子酸、氧化芍藥苷、沒食子酸甲酯、芍藥苷、五沒食子酰葡萄糖、苯甲酰芍藥苷之間的相對校正因子的過程為：將沒食子酸、氧化芍藥苷、沒食子酸甲酯、芍藥苷、五沒食子酰葡萄糖、苯甲酰芍藥苷和丹皮酚分別用溶劑溶解；取不同系列濃度的參照物及待測成分的對照品，配制參照物及待測成分的對照品溶液，注入高效液相色譜儀進(jìn)行測定，用最小二乘法以濃度對峰面積進(jìn)行線性回歸(應(yīng)帶入原點(diǎn))，根據(jù)如下公式計(jì)算相對校正因子：

6、

7、其中，fsx為參照物s與待測成分x的相對斜率比值，ks為參照物s的標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率，ks為待測成分x的標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率，以對照品中丹皮酚為參照物，計(jì)算其他成分的相對校正因子fsx；

8、(2)制備供試品溶液：將牡丹皮和溶劑混合，超聲處理使溶解，放冷，定容，混勻，濾過，取續(xù)濾液，得供試品溶液；

9、(3)色譜條件：

10、流動相a：乙腈；流動相b：甲酸水

11、洗脫條件：

12、0min～30min，流動相a的體積分?jǐn)?shù)由5％～15％升高至20％～30％；

13、30min～50min，流動相a的體積分?jǐn)?shù)由20％～30％升高至35％～55％；

14、50min～55min，流動相a的體積分?jǐn)?shù)由35％～55％降至至5％～15％；

15、55min～60min，流動相a的體積分?jǐn)?shù)為5％～15％；

16、檢測波長：250nm～260nm；流速：0.8～1.2ml/min；柱溫：25～40℃；

17、色譜柱：c18柱；

18、(4)測定：將供試品溶液注入高效液相色譜儀，采用內(nèi)標(biāo)法計(jì)算，通過與丹皮酚的相對校正因子計(jì)算沒食子酸、氧化芍藥苷、沒食子酸甲酯、芍藥苷、五沒食子酰葡萄糖、苯甲酰芍藥苷的含量。

19、進(jìn)一步，步驟(1)和步驟(2)中所述的溶劑為甲醇或甲醇水溶液，優(yōu)選為70～80％(v/v)的甲醇水溶液。

20、進(jìn)一步，步驟(1)中，所述對照品溶液的濃度為0.400-0.700mg/ml，優(yōu)選為0.436-0.667mg/ml。

21、進(jìn)一步，步驟(2)中所述超聲時(shí)間為30-50分鐘，功率為100-500w、頻率為40-60khz；優(yōu)選為，所述超聲時(shí)間為45分鐘，功率為300w、頻率為50khz。

22、進(jìn)一步，步驟(3)中所述檢測波長為254nm，流速為1.0ml/min，柱溫為30℃。

23、進(jìn)一步，步驟(3)中，梯度洗脫的條件為：

24、0min～30min，流動相a的體積分?jǐn)?shù)由10％升高至25％；

25、30min～50min，流動相a的體積分?jǐn)?shù)由25％升高至45％；

26、50min～55min，流動相a的體積分?jǐn)?shù)由45％降至至10％；

27、55min～60min，流動相a的體積分?jǐn)?shù)為10％；

28、進(jìn)一步，步驟(3)中，所述流動相b為0.01～1％(v/v)的甲酸水溶液；優(yōu)選為，0.2％(v/v)的甲酸水溶液。

29、進(jìn)一步，步驟(3)中，所述c18柱選自zorbx?extend-c18，aglientzorbax?sb-c18柱，aglient?tc-c18(2)柱中的至少一種；優(yōu)選為，所述c18柱為zorbx?extend-c18色譜柱。色譜柱的規(guī)格為：4.6mm×250mm，5μm。

30、第二方面，本發(fā)明請求保護(hù)上述的方法在檢測牡丹皮及其制劑中丹皮酚、沒食子酸、氧化芍藥苷、沒食子酸甲酯、芍藥苷、五沒食子酰葡萄糖、苯甲酰芍藥苷含量中的應(yīng)用。

31、本發(fā)明方法通過相對校正因子及色譜峰定位計(jì)算指標(biāo)成分含量，可以同時(shí)有效檢測出牡丹皮及其制劑中沒食子酸、氧化芍藥苷、沒食子酸甲酯、芍藥苷、五沒食子酰葡萄糖、苯甲酰芍藥苷、丹皮酚七種成分的含量，可節(jié)約成本、簡化操作，提高效率，且檢測靈敏度高，穩(wěn)定性好，測定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，對牡丹皮及其制劑的質(zhì)量控制和臨床療效具有重大意義

32、本發(fā)明的有益效果為：

33、本發(fā)明提供一種一測多評法同時(shí)測定牡丹皮及其制劑中沒食子酸、氧化芍藥苷、沒食子酸甲酯、芍藥苷、五沒食子酰葡萄糖、苯甲酰芍藥苷、丹皮酚的含量，通過方法學(xué)驗(yàn)證、相對校正因子確認(rèn)、重復(fù)性考察、色譜峰定位、準(zhǔn)確性評價(jià)，一測多評法含量測定結(jié)果與外標(biāo)法無顯著性差異。本發(fā)明具有較高的重復(fù)性、穩(wěn)定性及可信度，可為牡丹皮及其制劑的質(zhì)量評價(jià)提供參考依據(jù)。