本發(fā)明屬于藥物分析，具體涉及一種分離檢測(cè)加替酸乙酯起始物料sm1c及其雜質(zhì)的方法。

背景技術(shù)：

1、加替酸乙酯，又稱為加替羧酸乙酯或加替沙星環(huán)合酯，是合成鹽酸莫西沙星的重要中間體。加替酸乙酯的結(jié)構(gòu)式如式xv所示。

2、

3、sm1c是合成加替酸乙酯的關(guān)鍵起始原料，其中文化學(xué)名為2,4,5-三氟-3-甲氧基苯甲酰氯，英文化學(xué)名為2,4,5-trifluoro-3-methoxybenzoyl?chloride，分子式為c8h4clf3o2，分子量為224.56，cas號(hào)為112811-66-2，結(jié)構(gòu)式如式ⅰ所示。

4、

5、研究發(fā)現(xiàn)，sm1c中容易引入sm1c3、sm1c4、sm1c10、sm1c13等雜質(zhì)。該4種雜質(zhì)均為含有警示結(jié)構(gòu)的致突變雜質(zhì)，檢測(cè)控制sm1c中該4種雜質(zhì)，有助于加替酸乙酯的質(zhì)量控制，對(duì)后續(xù)合成鹽酸莫西沙星具有重要的意義。然而，暫無(wú)現(xiàn)有文獻(xiàn)或?qū)＠夹g(shù)對(duì)sm1c中雜質(zhì)sm1c3、sm1c4、sm1c10和sm1c13的分析方法進(jìn)行報(bào)道。并且，由于sm1c中還容易引入sm1e、sm1c1、sm1c2、sm1c11、sm1c5、sm1c6、sm1c7、sm1c8、sm1c9等其他雜質(zhì)，這些雜質(zhì)的存在進(jìn)一步增加了4種致突變雜質(zhì)的測(cè)定難度。

6、現(xiàn)有技術(shù)中，cn110794046b專利公開了一種莫西沙星中間體中2,4,5-三氟-3-甲氧基苯甲酰氯的檢驗(yàn)方法。該專利采用lc-ms/ms測(cè)定莫西沙星中間體中2,4,5-三氟-3-甲氧基苯甲酰氯的含量，所使用的色譜條件如下：色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流速為0.5±0.1ml/min，柱溫為30℃±5℃，進(jìn)樣量為0.1-0.3μl，以甲酸：水體系為流動(dòng)相a，以甲醇為流動(dòng)相b，采用梯度洗脫。該方法雖然可以測(cè)定莫西沙星中間體中2,4,5-三氟-3-甲氧基苯甲酰氯，但無(wú)法有效分離2,4,5-三氟-3-甲氧基苯甲酰氯中的sm1c3、sm1c4、sm1c10、sm1c13。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的之一在于提供一種基于氣相色譜法分離加替酸乙酯起始物料sm1c及其雜質(zhì)的方法，該方法可以在較短的時(shí)間之內(nèi)完成多種物質(zhì)的分離。

2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案為：

3、基于氣相色譜法分離加替酸乙酯起始物料sm1c及其雜質(zhì)的方法，所述sm1c和所述雜質(zhì)共同組成組合物，所述雜質(zhì)包括sm1c10、sm1c3、sm1c13、sm1c4中的任一種或多種；所述氣相色譜法包括：色譜柱采用以5％苯基-95％甲基聚硅氧烷為固定液的毛細(xì)管柱，利用升溫程序?qū)m1c及其雜質(zhì)進(jìn)行分離；

4、所述組合物中的每種組分的結(jié)構(gòu)式如下：

5、

6、加替酸乙酯起始物料sm1c分離檢測(cè)后可用于參與下一步生產(chǎn)中。

7、上述雜質(zhì)可以按照多種方式排列組合。例如，組合方式1：sm1c10和sm1c3。又如，組合方式2:sm1c10、sm1c3和sm1c13。再如，組合方式3：sm1c10、sm1c3、sm1c13和sm1c4。

8、在此不窮舉所有排列組合方式。理論上，本方法的分離、鑒定和/或含量檢測(cè)的物質(zhì)上限為n(為數(shù)量)種時(shí)，自然可以檢測(cè)1-n種物質(zhì)。

9、進(jìn)一步，所述升溫程序設(shè)置如下：

10、第一階段：起始溫度80-120℃，維持2-5分鐘；

11、第二階段：升溫至180-300℃，維持8-15分鐘；

12、從第一階段到第二階段的升溫速率為10-20℃/min。

13、作為優(yōu)選的方案，所述升溫程序設(shè)置如下：

14、第一階段：起始溫度99～101℃，維持3分鐘；

15、第二階段：升溫至200℃，維持12分鐘；

16、從第一階段到第二階段的升溫速率為14～16℃/min。

17、作為最優(yōu)選的方案，所述升溫程序設(shè)置如下：

18、第一階段：起始溫度100℃，維持3分鐘；

19、第二階段：升溫至200℃，維持12分鐘；

20、從第一階段到第二階段的升溫速率為15℃/min。

21、進(jìn)一步，所述組合物中還可以含有其他物質(zhì)，所述其他物質(zhì)包括sm1e、sm1c1、sm1c2、sm1c11、sm1c5、sm1c6、sm1c7、sm1c8、sm1c9中任一種或多種，其結(jié)構(gòu)式如下：

22、

23、進(jìn)一步，進(jìn)樣口溫度為150～300℃，流速為1～2ml/min，載氣為氮?dú)?，分流比?5～35:1。

24、作為優(yōu)選的方案，進(jìn)樣口溫度為180℃。

25、作為優(yōu)選的方案，分流比為30:1。

26、作為優(yōu)選的方案，流速為1.4～1.6ml/min，最優(yōu)選為1.5ml/min。

27、作為優(yōu)選的方案，色譜柱規(guī)格為30m×0.32mm，0.25μm。

28、作為優(yōu)選的方案，進(jìn)樣體積為1μl。

29、作為優(yōu)選的方案，樣品配制溶劑為二氯甲烷。

30、本方法中，還涉及待檢測(cè)樣品的處理方法，具體為：

31、樣品溶液的配制方法：取本品適量，精密稱定，加二氯甲烷并稀釋制成每1ml中約含50mg的溶液。

32、對(duì)照溶液的配制方法：精密移取樣品溶液，如0.5ml，置100ml量瓶中，用二氯甲烷稀釋至刻度，搖勻，即得。

33、系統(tǒng)適用性溶液的配制方法：取供試品(含雜質(zhì)sm1c13)約0.5g，加入碳酸鉀0.1g和水20μl，立即加入二氯甲烷10ml，振搖30秒后過濾，取續(xù)濾液，在續(xù)濾液中立即加入適量雜質(zhì)sm1c10、sm1c3、sm1c4，精密稱定，用二氯甲烷溶解并稀釋制成每1ml約含sm1c375μg、sm1c475μg、sm1c100.4mg的混合溶液。

34、本發(fā)明的目的之二在于提供一種鑒別加替酸乙酯起始物料sm1c及其雜質(zhì)的方法，該方法可以在較短的時(shí)間之內(nèi)完成多種物質(zhì)的鑒定。

35、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案為：

36、鑒別加替酸乙酯起始物料sm1c及其雜質(zhì)的方法，采用前述分離方法分離所述組合物，并進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，得到色譜圖；通過比較檢測(cè)品與對(duì)照品的色譜圖譜特征，來確定檢測(cè)品中是否含有sm1c及其雜質(zhì)。

37、作為優(yōu)選的方案，檢測(cè)器溫度為220～300℃。

38、作為優(yōu)選的方案，按照保留時(shí)間的先后順序，可以鑒定出組合物中的各組份，所述組合物的組份按照升序依次為：sm1c、sm1c10、sm1c3、sm1c13、sm1c4。

39、作為優(yōu)選的方法，保留時(shí)間為4.9±0.5min，判定為所述sm1c；保留時(shí)間為5.4±0.5min，判定為所述sm1c10；保留時(shí)間為6.3±0.5min，判定為所述sm1c3；保留時(shí)間為13.4±0.5min，判定為所述sm1c13；保留時(shí)間為14.2±0.5min，判定為所述sm1c4。

40、可以用保留時(shí)間來判定組組份。保留時(shí)間是指樣品從進(jìn)入色譜柱到被檢測(cè)器檢測(cè)到所需的時(shí)間。這個(gè)時(shí)間是根據(jù)組分在色譜柱上的移動(dòng)速度計(jì)算的，即從進(jìn)樣開始到某個(gè)組分的色譜頂點(diǎn)(濃度極大值)的時(shí)間間隔。主要用于確定樣品中各組分的出峰順序和位置，是色譜分析中的基本數(shù)據(jù)之一。

41、本發(fā)明的目的之三在于提供一種檢測(cè)加替酸乙酯起始物料sm1c及其雜質(zhì)含量的方法，該方法可以在較短的時(shí)間之內(nèi)完成多種物質(zhì)的鑒定及含量測(cè)定。

42、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案為：

43、檢測(cè)加替酸乙酯起始物料sm1c及其雜質(zhì)含量的方法，采用前述鑒別方法分離并鑒別sm1c及其雜質(zhì)，得到色譜圖；根據(jù)所得色譜圖，采用主成分自身對(duì)照法計(jì)算各雜質(zhì)含量。

44、通過含量測(cè)定，我們進(jìn)一步可以用于判定2,4,5-三氟-3-甲氧基苯甲酰氯中雜質(zhì)含量是否合格。若雜質(zhì)sm1c10、雜質(zhì)sm1c3、雜質(zhì)sm1c13、雜質(zhì)sm1c4中的任一種或多種雜質(zhì)含量(主成分自身對(duì)照法計(jì)算雜質(zhì)含量：雜質(zhì)峰面積/對(duì)照溶液中sm1c峰面積/對(duì)照溶液稀釋倍數(shù)×100％)大于規(guī)定限度，表明雜質(zhì)含量不合格；反之，表明雜質(zhì)含量合格。

45、上述判定方式可以作為藥品質(zhì)量判定模型，進(jìn)一步作為智能化生產(chǎn)流程中不可或缺的一個(gè)關(guān)鍵模塊。該模型通過精確控制升溫程序、分流比、流速、進(jìn)樣口溫度等參數(shù)，實(shí)現(xiàn)對(duì)藥品中活性成分、雜質(zhì)及降解產(chǎn)物的精準(zhǔn)分離與定量分析，為藥品質(zhì)量的全面評(píng)估提供了科學(xué)依據(jù)。在智能化生產(chǎn)體系中，這一模型被無(wú)縫集成，能夠?qū)崟r(shí)接收來自生產(chǎn)線的原始數(shù)據(jù)，自動(dòng)執(zhí)行分析任務(wù)，并基于預(yù)設(shè)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)迅速反饋判定結(jié)果。

46、本發(fā)明的有益效果在于：

47、1.考慮到酰氯化合物遇水、酸、堿不穩(wěn)定，本發(fā)明采用gc法分離測(cè)定加替酸乙酯起始物料sm1c及其雜質(zhì)(sm1c3、sm1c4、sm1c10、sm1c13)，并采用與水不互溶的二氯甲烷為溶劑，避免酰氯及其雜質(zhì)水解。采用弱極性5％苯基-95％甲基聚硅氧烷為固定液的毛細(xì)管柱為分離色譜柱，可以不衍生直接對(duì)加替酸乙酯起始物料sm1c及其4種致突變雜質(zhì)進(jìn)行測(cè)定，各雜質(zhì)間分離度均能滿足要求，具有簡(jiǎn)單、快速、靈敏、有效的特點(diǎn)。

48、2.本方法靈敏度高，主成分sm1c的定量限濃度為10.0920μg/ml，檢測(cè)限濃度為3.0276μg/ml；sm1c10的定量限濃度10.6894μg/ml，檢測(cè)限濃度為3.2068μg/ml；sm1c3的定量限濃度14.2276μg/ml，檢測(cè)限濃度為4.2683μg/ml；sm1c4的定量限濃度14.3521μg/ml，檢測(cè)限濃度為4.3056μg/ml。

49、3.利用本發(fā)明方法分離測(cè)定加替酸乙酯起始物料sm1c及其雜質(zhì)，各組分的測(cè)定不受供試品和其他雜質(zhì)(sm1e、sm1c1、sm1c2、sm1c11、sm1c5、sm1c6、sm1c7、sm1c8和sm1c9)的干擾，不會(huì)引起酰氯的降解，專屬性強(qiáng)，且分離效果好。

50、4.本方法可以在22分鐘內(nèi)同時(shí)分離加替酸乙酯起始物料sm1c及其4種雜質(zhì)，分離時(shí)間短，且準(zhǔn)確度高、耐用性好。