1.一種細(xì)菌莢膜多糖或者細(xì)菌莢膜多糖與載體蛋白結(jié)合物樣品中各單糖組分含量的檢測方法,其特征在于,所述的方法包括如下步驟:
2.如權(quán)利要求1所述的檢測方法,其特征在于,步驟1)中樣品水解方式a)具體包括如下操作:吹干樣品,加入2-4mol/l三氟乙酸,100-120℃水解2-4h。
3.如權(quán)利要求1所述的檢測方法,其特征在于,步驟1)中樣品水解方式b)具體包括如下操作:吹干樣品,加入2-4mol/l無水氯化氫-甲醇溶液后,70-90℃水浴12-24h,然后吹干,加入2-4mol/l三氟乙酸,100-120℃繼續(xù)水解2-4h。
4.如權(quán)利要求1所述的檢測方法,其特征在于,步驟1)中樣品水解方式c)具體包括如下操作:吹干樣品,加入40-50%(v/v)氫氟酸溶液后,60-80℃水浴2-4h,然后吹干,加入2-4mol/l三氟乙酸,100-120℃繼續(xù)水解2-4h。
5.如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的檢測方法,其特征在于,步驟2)中衍生化反應(yīng)采用如下條件:pmp濃度0.4-0.6mol/l,氫氧化鈉濃度0.3-0.5mol/l,反應(yīng)溫度60-80℃,反應(yīng)時(shí)間30-90min,鹽酸濃度和氫氧化鈉濃度保持一致。
6.如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的檢測方法,其特征在于,步驟2)中用于萃取的有機(jī)溶劑任選自以下的一種或多種:三氯甲烷、甲苯、乙酸異戊酯、正已烷。
7.如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的檢測方法,其特征在于,步驟3)中液相色譜分析采用如下條件:采用dad二級管陣列檢測器或紫外檢測器,檢測波長240-250nm,進(jìn)樣量10-50μl,流速0.8-1.2ml/min,流動相a:10-100mm醋酸銨緩沖液,其ph?5.5-6.0,流動相b:乙腈溶液,進(jìn)行梯度溶液洗脫。
8.如權(quán)利要求7所述的檢測方法,其特征在于,步驟3)中所述梯度溶液洗脫具體如下:隨著洗脫時(shí)間0→25min→50min→51min→60min,流動相b的濃度梯度:20%→20%→30%→20%→20%,相應(yīng)流動相a的濃度梯度:80%→80%→70%→80%→80%。
9.如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的檢測方法,其特征在于,步驟3)中的單糖含量計(jì)算公式如下:
10.如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的檢測方法,其特征在于,所述的單糖選自以下的一種或多種:d-葡萄糖、d-半乳糖、l-鼠李糖、d-甘露糖、l-巖藻糖、d-葡萄糖醛酸、d-半乳糖醛酸、d-n-乙?;咸烟前?、d-n-乙酰基半乳糖胺、d-n-乙酰基甘露糖胺、l-n-乙?;鶐r藻糖胺。
11.如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的檢測方法,其特征在于,針對凍干樣品,在步驟1)之前,先加水溶解樣品,并將其稀釋至50-500μg/ml。
12.如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的檢測方法,其特征在于,所述細(xì)菌選自革蘭氏陽性菌。
13.如權(quán)利要求12所述的檢測方法,其特征在于,所述革蘭氏陽性菌選自肺炎球菌。
14.如權(quán)利要求13所述的檢測方法,其特征在于,所述不含糖醛酸也不含磷酸二酯鍵的樣品,選自以下血清型肺炎球菌莢膜多糖或其結(jié)合物中的一種或多種:4、7f、12f、14、17f、33f血清型。
15.如權(quán)利要求13所述的檢測方法,其特征在于,所述含糖醛酸的樣品,選自以下血清型肺炎球菌莢膜多糖或其結(jié)合物中的一種或多種:1、2、3、5、8、9n、9v、22f血清型。
16.如權(quán)利要求13所述的檢測方法,其特征在于,所述含磷酸二酯鍵的樣品,選自以下血清型肺炎球菌莢膜多糖或其結(jié)合物中的一種或多種:6a、6b、10a、11a、15b、18c、19a、19f、20、23f血清型。
17.細(xì)菌莢膜多糖或者細(xì)菌莢膜多糖與載體蛋白結(jié)合物中多糖含量的檢測方法,其特征在于,包括如下步驟:
18.如權(quán)利要求17所述的檢測方法,其特征在于,所述細(xì)菌選自革蘭氏陽性菌。
19.如權(quán)利要求18所述的檢測方法,其特征在于,所述革蘭氏陽性菌選自肺炎球菌。
20.如權(quán)利要求19所述的檢測方法,其特征在于,基于肺炎球菌的具體血清型,所述步驟s1)采用選自以下a)~w)中的一種或多種實(shí)施方式: