個體的結(jié)核感染狀態(tài)的制作方法
【專利說明】個體的結(jié)核感染狀態(tài)
[0001] 在第一方面,本發(fā)明設(shè)及一種診斷或確定個體結(jié)核感染狀態(tài)的方法,所述的個體 患有或疑似患有結(jié)核感染。在另一方面,還提供了一種對結(jié)核感染個體治療方案分層次的 方法,W及一種預(yù)測患有結(jié)核感染個體的臨床結(jié)果或確定療程的方法。此外,本發(fā)明提供 了一種監(jiān)測個體內(nèi)的結(jié)核感染自潛伏至活性狀態(tài)(或其相反過程)變化的方法。另外,本 發(fā)明設(shè)及一種用于診斷或檢測結(jié)核感染狀態(tài)的試劑盒,W及結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis)丙氨酸脫氨酶在個體中特異性區(qū)分結(jié)核潛伏狀態(tài)和活動性疾病狀態(tài)的應(yīng) 用。 現(xiàn)有技術(shù)
[0002] 在過去的十年里,結(jié)核分枝桿菌(TB)感染的體外免疫診斷取得了很大的進(jìn)步 (Machingaidze S.等.,化diatr Infect Dis J. 2011;30:694-700)。有S種市售可得的結(jié) 核分枝桿菌特異性丫 -干擾素(interferon-丫)釋放試驗(IGRAs)。離體接觸特異性結(jié)核 分枝桿菌抗原后,該些試驗通過化ISpot (T-SP0T. TB-牛津免疫技術(shù),阿賓頓,英國(Oxford Immunotec, Abingdon, UK))檢測單核細(xì)胞(mononuclear cell)釋放的丫-干擾素(INF-丫) 釋放或通過化ISA((Quanti陽R0N-TB GOLD and 化anti陽R0N-TB GOLD in tube;QFT-G-IT; 塞蒂斯公司(Cellestis),卡內(nèi)基,澳大利亞(Carnegie,Australia))檢測全血中的丫-干 擾素(INF-丫)釋放。相對于結(jié)核菌素皮膚實驗(TST),IGRAs有幾個優(yōu)點;受先前接種的卡 介苗炬CG)或非結(jié)核病的分支桿菌感染的影響最小,不產(chǎn)生加強(qiáng)效應(yīng)化ooster effect), 無需反復(fù)去醫(yī)療機(jī)構(gòu),且對結(jié)果的解讀并不依賴于操作者煙liappini等,Clin Ther. 2012 年4月16日)。據(jù)報道,成年人的IGRAs特異性更高,靈敏度至少與TST相同,現(xiàn)已收錄 為成年人診斷規(guī)程的指導(dǎo)守則(Mazurek GH等,美國,2010,MMWR Recomm Rep.2010; 59:1-25.)。然而,在對兒童人群的研究中,所報道的IGRAs的靈敏度和特異性相差很大, 鑒于數(shù)據(jù)不佳且相反,因此建議應(yīng)注意其在兒童中的應(yīng)用(Machingai化e S.等,Pediatr Infect Dis J. 2011;30:694-700 ;Sun L.等,F(xiàn)EMS Immunol. Med. Microbiol. 2011; 63:165-73 ;Mandalakas AM,等,Int J Tuberc Lung Dis 2011;15:1018-32)。此外,它 們并不能用于區(qū)分活動性和潛伏性結(jié)核感染(LTBI)((Amanatidou V.等,Eur J Clin Microbiol Infect Dis. 2012年1月4日)。該個問題對于兒科醫(yī)師來說十分重要,因為在 兒童中,罕有通過培養(yǎng)物確認(rèn)的明確TB診斷。兒童的TB通常含菌較少,而且,基于TST和 IGRA結(jié)果、臨床癥狀和體征、影像學(xué)發(fā)現(xiàn)、個人史、對TB治療的反應(yīng),W及在本領(lǐng)域中醫(yī)生 的經(jīng)驗,大部分兒童的TB診斷都是"疑似性"疾病。
[0003] 當(dāng)具有活動性TB體征提示的兒童IGRA呈陽性時,并不能明確診斷,尤其是當(dāng)該 名兒童來自TB高發(fā)區(qū)域。IGRA的陽性結(jié)果可能是由于TB疾病造成,也可能是LTBI造成 的,其可能是導(dǎo)致所調(diào)查的癥狀或體征的疾病的意外所致。在此情況下,一種能夠精確區(qū)分 活動性結(jié)核和潛伏性TB感染的試驗就變得很有價值。目前,在基于除INF- 丫 W外的細(xì)胞 因子(如;比-10 或 11-2),采用 ELISpot 試驗(Amanatidou V.等,E;ur J Clin Microbiol Infect Dis. 2012年1月4日)的研究或探索除ESAT-6、CFP-10和TB7. 7 (目前包含在市 售的IGRAs中)W外的其他分支桿菌抗原的免疫反應(yīng)的研究尚未成功。
[0004] 結(jié)核病狀態(tài)的其他檢測方法包括測定結(jié)核病狀態(tài)的抗體概況特征。例如在美國 專利申請扣S2007/0026473Al)W及DavidowA等(2005,感染與免疫,73(10),6846-6851) 中,描述了該些抗體概況。其中,采用抗原,ESAT-6、38kDA抗原、16kDa抗原、Rv 2626c、鐵 氧還蛋白(ferridoxine)和丙氨酸脫氨酶來測定抗體概況。據(jù)描述,38kDa抗原、丙氨酸脫 氨酶和Rv2626c的抗體與活動性化相關(guān),而16kDa抗原、鐵氧還蛋白A和ESAT-6的抗體與 非活動性TB相關(guān)。與此相反的是,該研究組稍后在Gennaro M.L.等(In J.Tuberc.Lung Dis.,11化),624-631)中認(rèn)為,與對照組中相比,TB組中對抗原ESAT-6、38kDa Ag、16kDa Ag、蘋果酸合成酶和MTSA-lO/CFP-10的抗體反應(yīng)有所上升,而其他抗原Rv2626c、鐵氧還蛋 白A、丙氨酸脫氨酶、Ag85和Glu則顯示在抗體水平上沒有差異。因此,對于某些抗原而言, 數(shù)據(jù)是相互矛盾的,而在稍后出版的Gennaro等的文獻(xiàn)表明丙氨酸脫氨酶及其它物質(zhì),W 及Rv2626c并不適用于檢測TB狀態(tài)。
[0005] 然而,基于抗體的試驗在靈敏度和特異性方面有缺陷。至今,尚沒有開發(fā)出一種高 靈敏度和特異性地診斷活動性TB的血清學(xué)試驗((Sarman Sin曲和V. M Katoch,Indian J Med Res 2011,1:M巧):583-587:doi:20 10. 4103/0971-5916. 90980)。
[0006] 因此,還需要一種區(qū)分潛伏和活動狀態(tài)結(jié)核感染的方法。據(jù)此,本領(lǐng)域需要檢測和 確定治療方案的方法、預(yù)測臨床結(jié)果、確定療程并檢測個體結(jié)核感染狀態(tài)的方法。
[0007] 本發(fā)明旨在提供特別用于上述問題的新方法和試驗。
[000引本發(fā)明概述
[0009] 在第一方面,本發(fā)明設(shè)及一種診斷和確定患有或疑似患有結(jié)核感染的個體內(nèi)結(jié)核 感染狀態(tài)的方法,包括:
[0010] a)測定單核細(xì)胞經(jīng)刺激后釋放或產(chǎn)生的細(xì)胞因子的水平或量,其中,所述單核細(xì) 胞獲自所述個體;和
[0011] b)基于單核細(xì)胞釋放或產(chǎn)生的細(xì)胞因子的水平或量,確定或診斷所述個體的狀 態(tài),其特征在于,所述的單核細(xì)胞經(jīng)分枝桿菌丙氨酸脫氨酶(AlaDH)刺激。
[0012] 在另一方面,本發(fā)明設(shè)及一種對結(jié)核感染個體的治療方案分層次的方法,包括:
[0013] a)測定單核細(xì)胞經(jīng)刺激后釋放或產(chǎn)生的細(xì)胞因子的水平或量,其中,所述單核細(xì) 胞獲自所述個體;和
[0014] b)基于所述單核細(xì)胞經(jīng)刺激后釋放或產(chǎn)生的細(xì)胞因子的水平或量,確定結(jié)核感染 的狀態(tài),從而區(qū)分所述個體內(nèi)結(jié)核感染的潛伏和活動狀態(tài),其特征在于,在有分枝桿菌丙氨 酸脫氨酶(AlaDH),尤其是結(jié)核分枝桿菌丙氨酸脫氨酶(AlaDH)存在下刺激所述單核細(xì)胞。
[0015] 在另一方面,本發(fā)明設(shè)及一種預(yù)測患有結(jié)核感染個體的臨床結(jié)果或確定療程的方 法,包括:
[0016] a)測定單核細(xì)胞經(jīng)刺激后釋放或產(chǎn)生的細(xì)胞因子的水平或量,其中,所述單核細(xì) 胞獲自所述個體;和
[0017] b)基于單核細(xì)胞經(jīng)刺激后釋放或產(chǎn)生的細(xì)胞因子的水平或量,預(yù)測臨床結(jié)果或確 定療程,其特征在于,所述的刺激包括在分枝桿菌丙氨酸脫氨酶(AlaDH),尤其是結(jié)核分枝 桿菌丙氨酸脫氨酶(AlaDH)存在下培養(yǎng)所述的單核細(xì)胞。
[0018] 本發(fā)明的另一實施例設(shè)及一種監(jiān)測個體中結(jié)核感染從潛伏轉(zhuǎn)變?yōu)榛顒訝顟B(tài)(或 其相反過程)的方法,包括:
[0019] a)在第一時間點測定所述個體的單核細(xì)胞經(jīng)刺激后釋放或產(chǎn)生的細(xì)胞因子的水 平或量;
[0020] b)測定單核細(xì)胞經(jīng)刺激后釋放或產(chǎn)生的細(xì)胞因子的水平或量,所述的單核細(xì)胞在 第二時間點獲自所述個體;和
[0021] C)將步驟a)中測定的細(xì)胞因子水平或量與步驟b)中測定的水平或量相比較,或 與一參比值相比,相對于參比值或相對于步驟a)測定的水平或量,水平或量有所增加時, 表示自潛伏向活動狀態(tài)轉(zhuǎn)變,而相對于參比值或相對于步驟a)測定的水平或量,水平或量 有所降低時,表示自活動向潛伏狀態(tài)轉(zhuǎn)變;
[0022] 其特征在于,所述單核細(xì)胞經(jīng)分枝桿菌丙氨酸脫氨酶(AlaDH),尤其是結(jié)核分枝桿 菌丙氨酸脫氨酶(AlaDH)刺激。
[0023] 目P,本發(fā)明人認(rèn)識到,分枝桿菌,尤其是結(jié)核分枝桿菌丙氨酸脫氨酶(AlaDH)是獲 自患有或疑似患有結(jié)核感染個體的合適單核細(xì)胞刺激物,然后檢測所述單核細(xì)胞經(jīng)刺激后 釋放或產(chǎn)生的細(xì)胞因子的量或水平,從而能夠區(qū)分所述個體內(nèi)結(jié)核感染的潛