15 701])， 所研究的兒童分為非感染、LTBI病例或活性肺部TB疾病病例。如果有不一致的TST/ QFT-G-IT結(jié)果，根據(jù)最新的美國(guó)和歐洲指導(dǎo)意見（美國(guó)兒科學(xué)會(huì)指導(dǎo)意見[結(jié)核病]?？?于：Pickering LK，8aker CJ，Kimberlin DW, Long SS 編，紅皮書；2009 感染性疾病委員 會(huì)報(bào)告，第28版.E化Grove Village,伊利諾斯州：美國(guó)兒科學(xué)會(huì)；2009: [680-15701] Amanatidou V.等，見前），基于TST結(jié)果，將兒童們分入相應(yīng)的組內(nèi)。具體地，TST陰性的 無癥狀兒童定義為非感染。任何無活動(dòng)性TB臨床或影像學(xué)證據(jù)和TST陽性兒童作出LTBI 診斷?；顒?dòng)性TB病例根據(jù)兩項(xiàng)分類來定義；明確TB，自疲或胃部抽出培養(yǎng)物中通過培養(yǎng)或 顯微鏡或分子學(xué)方法檢出結(jié)核分枝桿菌的兒童，和疑似TB ;無微生物學(xué)確認(rèn)但具有W下所 有標(biāo)準(zhǔn)：(A)有活動(dòng)性TB臨床癥狀和體征，炬）與肺部TB相符的影像學(xué)或CT掃描異常，（C) 對(duì)TB治療有反應(yīng)和值）有TB接觸史或在過去的24個(gè)月內(nèi)到過TB流行的國(guó)家（Amanatidou 等，見前述）。
[0084] 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
[0085] 采用卡方檢驗(yàn)（費(fèi)雪爾正確性檢驗(yàn)（Fisher S exact test)，當(dāng)預(yù)期細(xì)胞大小小于 5)對(duì)分類數(shù)據(jù)進(jìn)行比較。假設(shè)當(dāng)因變量為非正常分布區(qū)間變量，對(duì)連續(xù)測(cè)量值采用秩和檢 驗(yàn)（Wilcoxon-Mann-Whitneytest)來檢驗(yàn)非配對(duì)分析之間的關(guān)系。采用Cohen'sK統(tǒng)計(jì) 進(jìn)行一致性檢驗(yàn)，統(tǒng)一定義k《0. 2為"輕微"，0. 2 < k《0. 4為"尚可"，0. 4 < k《0. 6為 "適度"，0. 6 < k《0. 8為"實(shí)質(zhì)性"，W及0. 8 < k《1. 0為"優(yōu)化"。相對(duì)于特異性結(jié)核分 枝桿菌抗原，通過受試者工作特征（R0C)曲線分析確定在活動(dòng)性或潛伏TB兒童之間作出 區(qū)分的最佳IL-2和IFN-丫的化ISpot結(jié)果闊值，并給出了相應(yīng)的靈敏度和特異性。還計(jì) 算了 R0C曲線下面積（AUC) W及95 %可信區(qū)間（CI)。采用Windows統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS (版 本14. 0)進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。P < 0. 05為顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
[0086] 結(jié)果
[0087] 本研究涵蓋了 75名兒童（男性）；中位年齡75個(gè)月；四分位距（IQR) 36-116)。記 錄有先前BCG接種的兒童為21名（28. 0% )。
[008引 5名兒童確診為TB疾病。所有的兒童都表現(xiàn)出與TB癥狀相符（如持續(xù)性咳嗽、發(fā) 熱、夜間盜汗或體重下降）和/或通過胸部X線記錄并由CT掃描結(jié)果確認(rèn)的肺部疾病，W 及自培養(yǎng)物和/或顯微鏡和/或聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)出的結(jié)核分枝桿菌。20名兒童診斷為疑 似性TB。所有兒童均經(jīng)過至少=次胃抽出物或疲檢驗(yàn)來檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌，并獲得陰性結(jié) 果。表1顯示了根據(jù)最終診斷的BCG接種狀態(tài)，TST大小W及QFT-G-IT結(jié)果。
[0089] 表1 ;根據(jù)所研究?jī)和罱K診斷的BCG接種狀態(tài)、TST大小和QFT-G-IT結(jié)果
[0090]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種診斷或確定患有或疑似患有結(jié)核感染的個(gè)體中結(jié)核感染狀態(tài)的方法，包括： a) 測(cè)定單核細(xì)胞經(jīng)刺激后釋放或產(chǎn)生的細(xì)胞因子的水平或量，其中，所述單核細(xì)胞獲 自所述個(gè)體；和 b) 基于單核細(xì)胞釋放或產(chǎn)生的細(xì)胞因子的水平或量，確定或診斷所述個(gè)體的狀態(tài)， 其特征在于，所述的單核細(xì)胞經(jīng)分枝桿菌丙氨酸脫氨酶（AlaDH)，尤其是結(jié)核分枝桿菌 丙氨酸脫氨酶（AlaDH)刺激。
2. -種對(duì)結(jié)核感染個(gè)體的治療方案分層次的方法，包括： a) 測(cè)定單核細(xì)胞經(jīng)刺激后釋放或產(chǎn)生的細(xì)胞因子的水平或量，其中，所述單核細(xì)胞獲 自所述個(gè)體；和 b) 基于所述單核細(xì)胞經(jīng)刺激后釋放或產(chǎn)生的細(xì)胞因子的水平或量，確定或診斷結(jié)核感 染狀態(tài)，從而區(qū)分所述個(gè)體內(nèi)結(jié)核感染的潛伏和活動(dòng)狀態(tài)，其特征在于，所述的單核細(xì)胞在 有分枝桿菌丙氨酸脫氨酶（AlaDH),尤其是結(jié)核分枝桿菌丙氨酸脫氨酶（AlaDH)的存在下 進(jìn)行刺激。
3. -種預(yù)測(cè)患有結(jié)核感染個(gè)體的臨床結(jié)果或確定療程的方法，包括： a) 測(cè)定單核細(xì)胞經(jīng)刺激后釋放或產(chǎn)生的細(xì)胞因子的水平或量，其中，所述單核細(xì)胞獲 自所述個(gè)體；和 b) 基于所述單核細(xì)胞經(jīng)刺激后釋放或產(chǎn)生的細(xì)胞因子的水平或量，預(yù)測(cè)臨床結(jié)果或確 定療程，其特征在于，所述的刺激包括在分枝桿菌丙氨酸脫氨酶（AlaDH)，尤其是結(jié)核分枝 桿菌丙氨酸脫氨酶（AlaDH)存在下培養(yǎng)所述的單核細(xì)胞。
4. 如權(quán)利要求1所述的方法，用于監(jiān)測(cè)個(gè)體中結(jié)核感染從潛伏轉(zhuǎn)變?yōu)榛顒?dòng)狀態(tài)或其相 反過程： a) 在第一時(shí)間點(diǎn)測(cè)定所述個(gè)體的單核細(xì)胞經(jīng)刺激后釋放或產(chǎn)生的細(xì)胞因子的水平或 量； b) 測(cè)定單核細(xì)胞經(jīng)刺激后釋放或產(chǎn)生的細(xì)胞因子的水平或量，所述的單核細(xì)胞在第二 時(shí)間點(diǎn)獲自所述個(gè)體；和 C)將步驟a)中測(cè)定的細(xì)胞因子水平或量與步驟b)中測(cè)定的水平或量或與一參比值 相比較，相對(duì)于參比值或相對(duì)于步驟a)測(cè)定的水平或量，水平或量有所增加時(shí)，表示自潛 伏向活動(dòng)狀態(tài)轉(zhuǎn)變，而相對(duì)于參比值或相對(duì)于步驟a)測(cè)定的水平或量，水平或量有所降低 時(shí)，表示自活動(dòng)向潛伏狀態(tài)轉(zhuǎn)變； 其特征在于，所述單核細(xì)胞經(jīng)分枝桿菌丙氨酸脫氨酶（AlaDH)，尤其是結(jié)核分枝桿菌丙 氨酸脫氨酶（AlaDH)刺激。
5. 如W上任一權(quán)利要求所述的方法，其特征在于，所述單核細(xì)胞源自個(gè)體的樣本，包括 血樣或其他包括肺泡支氣管灌洗液、尿液和組織在內(nèi)的體液。
6. 如W上任一權(quán)利要求所述的方法，其特征在于，在蛋白水平測(cè)定細(xì)胞因子的水平或 量，尤其是通過免疫試驗(yàn)，如化ISpot或化ISA ;或在核酸水平進(jìn)行測(cè)定，尤其是通過PCR技 術(shù)。
7. 如W上任一權(quán)利要求所述的方法，其特征在于，所檢測(cè)的細(xì)胞因子選自IL-2和 丫-干擾素，尤其是IL-2。
8. 如W上任一權(quán)利要求所述的方法，其特征在于，比-2Elispot中的參比值低于25。
9. 如W上任一權(quán)利要求所述的方法，其特征在于，所述個(gè)體為兒童。
10. -種試劑盒的用途，用于診斷或測(cè)定患有或疑似患有結(jié)核感染個(gè)體的結(jié)核感染狀 態(tài)、或預(yù)測(cè)臨床結(jié)果、或確定療程，或用于對(duì)結(jié)核感染個(gè)體的治療方案分層次、或監(jiān)測(cè)結(jié)核 感染進(jìn)展、或用于檢測(cè)個(gè)體的結(jié)核感染自潛伏至活動(dòng)狀態(tài)的轉(zhuǎn)變，所述試劑盒包括檢測(cè)單 核細(xì)胞經(jīng)刺激后釋放或產(chǎn)生細(xì)胞因子的水平或量的器件，所述單核細(xì)胞獲自所述個(gè)體，刺 激物質(zhì)是分枝桿菌丙氨酸脫氨酶（AlaDH)，尤其是結(jié)核分枝桿菌丙氨酸脫氨酶（AlaDH)，和 如何使用所述測(cè)試試劑盒實(shí)施權(quán)利要求1-9任一所述方法的說明書。
11. 如權(quán)利要求10所述的試劑盒的用途，其中，所述的試劑盒是化ISpot或化ISA，或 所述試劑盒是PCR試劑盒。
12. 分枝桿菌丙氨酸脫氨酶（AlaDH)，尤其是結(jié)核分枝桿菌丙氨酸脫氨酶（AlaDH)，用 作區(qū)分患有或疑似患有結(jié)核感染個(gè)體的結(jié)核感染潛伏狀態(tài)或活動(dòng)狀態(tài)的刺激物。
13. 如權(quán)利要求12所述的分枝桿菌丙氨酸脫氨酶（AlaDH)，尤其是結(jié)核分枝桿菌丙氨 酸脫氨酶（AlaDH)，用于區(qū)分潛伏性和活性性結(jié)核感染，其特征在于，所述個(gè)體為兒童。
14. 進(jìn)行權(quán)利要求1-9任一所述方法的試驗(yàn)，包含了培養(yǎng)單核細(xì)胞的器件、檢測(cè)細(xì)胞因 子的水平或量的器件W及分枝桿菌丙氨酸脫氨酶（AlaDH)，尤其是結(jié)核分枝桿菌丙氨酸脫 氨酶（AlaDH)。
15. 含有分枝桿菌丙氨酸脫氨酶（AlaDH)，尤其是結(jié)核分枝桿菌丙氨酸脫氨酶 (AlaDH)、ESAT-6和CFP-10的組合物，用于檢測(cè)個(gè)體結(jié)核感染，尤其是利用所述組合物的組 分作為刺激物檢測(cè)個(gè)體結(jié)核感染。
【專利摘要】在第一方面，本發(fā)明涉及診斷或確定患有或疑似患有結(jié)核感染的個(gè)體結(jié)核感染狀態(tài)的方法。在另一方面，還提供了對(duì)結(jié)核感染個(gè)體的治療方案分層次的方法，以及預(yù)測(cè)患有結(jié)核感染個(gè)體臨床結(jié)果或確定療程的方法。此外，本發(fā)明提供監(jiān)測(cè)個(gè)體內(nèi)的結(jié)核感染自潛伏至活動(dòng)狀態(tài)(或其相反過程)變化的方法。另外，本發(fā)明涉及用于診斷或檢測(cè)結(jié)核感染狀態(tài)的試劑盒，以及結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis)丙氨酸脫氫酶在特異性區(qū)分個(gè)體的結(jié)核潛伏狀態(tài)和活動(dòng)性疾病狀態(tài)中的應(yīng)用。
【IPC分類】G01N33-569
【公開號(hào)】CN104541169
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201380038250
【發(fā)明人】M·辛格, M·M·德萊斯, 貝拉 C·黛拉
【申請(qǐng)人】捷獅有限公司
【公開日】2015年4月22日
【申請(qǐng)日】2013年7月16日
【公告號(hào)】CA2878497A1, EP2687848A1, EP2872896A1, WO2014012928A1